蛋白酶K-Chelex100法提取肋软骨DNA技术的优化

目的优化蛋白酶K的用量和消化时间,用于提取肋软骨DNA。方法 30份肋软骨样本各取大小为0.2cm×0.3cm×0.4cm的软骨块5份,分别编为A～E组。采用不同蛋白酶K用量和消化时间的Chelex100方法,提取5组各30份软骨块DNA,进行DNA定量、采用Sinofiler试剂盒扩增后进行电泳检测,采用非参数检验法比较检验成功率。结果 A～E组样本中采用加入2μL蛋白酶K并消化30min的D组方法成功率最高(96.7%),组间差异具有统计学意义。结论采用蛋白酶K-Chelex100方法,选择加入2μL蛋白酶K,消化30min可有效提高肋软骨DNA分型检验成功率。     

荧光标记3个miniSTR基因座复合扩增系统的建立

目的建立扩增片段<135bp,包括D5S818,D8S1179,D16S539 3个miniSTR基因座复合扩增系统。方法采用不同荧光染料标记引物,通过PCR扩增,利用ABI 3100遗传分析仪进行片段长度分析,对100份无关个体血样,10个家系样本以及30份高度降解检材进行检测。结果本系统DNA分型结果与AmpFLSTR Identifiler试剂盒完全一致,且灵敏度高于AmpFLSTR Identifiler试剂盒。结论本系统可以应用于个人识别和亲权鉴定,为降解DNA样本分型提供了新的方法。     

PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因在溺死鉴定中的应用

目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死（水中溺毙）、死后入水（空气栓塞致死后入水）、对照组（空气栓塞致死后不做处理）;溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩增硅藻特异的核糖体小亚基（SSU）片段,用琼脂糖凝胶电泳检测、DHPLC检测分析。结果 6份硝酸消化法检测阴性的溺死人体器官组织检材经PCR及琼脂糖凝胶电泳检出5例阳性。生前溺死组肺、肝、肾硅藻检出率分别为100%、90%、85%,死后入水组仅肺检出硅藻（15%）,对照组各组织均为阴性;生前溺死组检出率明显高于死后入水组（P〈0.05）。10份溺死人体器官组织检材采用DHPLC法检出硅藻种类明显多于微波消解-扫描电镜法（P〈0.05）。脏器检出硅藻种类与溺死点水样一致。结论采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,有助于溺死鉴定和溺死地点的推断,具有法医学应用价值。     

扫描电镜/能谱观察溺死和死后入水的法医学应用研究

目的探讨扫描电镜/能谱分析在溺死的法医学鉴定中的作用。方法实验选用20例已知生前入水尸体,11例已知的死后入水尸体和2例陆地死亡尸体。在每个肺叶各取3个切面,每个切面用扫描电镜取样台胶面与肺叶的切面充分接触,另在落水地点取水样一份,进行对比。扫描电镜取样台胶在切面上充分接触后封闭取材盒,真空干燥后,直接在扫描电镜下进行观察。结果20例生前入水尸体在肺组织中均检出异物颗粒,并且与对照水样中检出的异物颗粒相吻合;而死后入水的尸体和在陆地上死亡的尸体肺组织中均未检出明显的异物颗粒,3者比较P<0.0001。在肺组织支气管切面中,生前入水的20例中有15例检出异物颗粒,在边缘肺切面及中间切面中分别有13例检出异物颗粒,统计学无明显差异。结论本实验建立的肺脏内异物颗粒取材方法准确可靠实用。对综合判断案件的性质,判断溺死尸体入水地点的具有积极意义。较好地解决了实验室检验中的污染问题。腐败尸体对检测结果无影响。     

应用荧光标记引物进行ABO基因分型

目的:建立一种荧光标记ABO基因分型的方法。方法:利用新设计的引物,在引物5′端标记荧光,经PCR扩增后用ABI3100遗传分析仪电泳。结果:所有样本扩增出相应产物,基因分型结果与血清学一致。结论:本研究采用荧光标记引物PCR-SSP法进行ABO基因分型,灵敏度高、操作简单、结果准确,为ABO基因分型提供了新的方法。     

勒福特王水消解法检验动物器官硅藻的法医学应用

目的研究勒福特王水消解法对动物器官中硅藻检验的法医学应用。方法将勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法与传统强酸消解-离心富集-光学显微镜观察法比较,对生前入水和死后入水的实验动物肺、肝和肾组织中的硅藻数量、检验时间、检出率以及观察效果进行研究,并进行统计学分析。结果生前入水组用勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法检出肺、肝、肾组织中的硅藻数量均多于传统方法(P0.05),检验时间少于传统方法(P0.05),检出率无差异(P0.05),观察效果优于传统方法。结论勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法具有简单、高效、定性定量分析准确的特点,该方法成本低廉,操作简单,具有较好的实用价值。     

浮游生物PCR检测及其在溺死鉴定中的研究进展

溺死鉴定是法医学中的重点和难点之一,目前在相关法医学案件中,主要采用法医病理学尸检与传统硅藻检验等方法综合分析进行鉴定。传统硅藻检验存在灵敏性较低,易于污染等不足。采用PCR法检测尸体不同脏器组织中是否存在水中浮游生物的DNA标记,适用范围广,信息量丰富,灵敏性和特异性较高,有较好的法医学应用前景,有望成为鉴定溺死的新方法。本文对相关研究进展进行综述,为相关研究和实践参考。     

链霉亲和素磁珠同步法检测两个miniSTR复合扩增系统

目的建立同步检测包括D5S818、D8S1179、D16S539和vWA、D21S11、D13S317基因座的两个m in iSTR系统的新方法。方法采用不同荧光染料和生物素标记引物,两个m in iSTR扩增系统在同一试管扩增,通过链霉亲和素磁珠将两个扩增系统PCR产物进行分离,用AB I 3100遗传分析仪对PCR产物检测分型。结果两个m in iSTR扩增系统可成功地进行同步扩增分型。结论应用链霉亲和素磁珠法同步检测两个m in iSTR复合扩增系统的基因型,可以降低成本,减少PCR污染,单次扩增信息量明显增高。     

广东珠江水域硅藻种类调查

目的应用扫描电镜对广东珠江水域水中硅藻进行观察,获得珠江水域硅藻种类情况及分布状况,结果有助于法医学水中尸体死亡原因及落水水域的推断。方法收集了广东省珠江水域19个取水点的水样,采用勒福特王水进行消解,并应用扫描电镜进行观察。结果 (1)19个采样点共检出直链藻、卵形藻、小环藻、菱板藻、菱形藻、双菱藻、针杆藻、冠盘藻、舟形藻、曲壳藻、圆筛藻、短缝藻、桥弯藻、海链藻、布纹藻、波缘藻、等片藻、辐节藻、双壁藻、异极藻和羽纹藻21种硅藻,分属于羽纹纲和中心纲。(2)获得19个采样点硅藻分布数据资料。结论 (1)珠江水域硅藻种类具有一定的特点。(2)不同河域硅藻种类、数量的差异有助于法医学推断溺死落水地点。