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为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养。采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoRⅠ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡。结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍。结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础。 相似文献
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近年来,围绕“农牧民增收,壮大集体经济积累”,福海县提出加强村级财务管理五条新措施.1、实行集体开支分级审批制度.2、实行集体开支的预决算制度.3、实行招待费在财务上单列制度.4、开展村级集体财务清理整顿工作.5、坚持按岗位职责办事. 另外,福海县纪检委为进一步做好党风廉政工作,印制了《领导干部廉洁自律从政31个不 相似文献
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福海县采取“四公开”的办法,切实抓好学校收费工作. “公开办证”:各校必须到福海县物价局办理事业单位收费许可证书,严格按照规定的收费项目和标准收取各项费用.“公开收费”:各校每学期开学初必须将收费项目、收费标准张榜公布.“公开查处”:各校务必于每学期的3月15日和9月15日前,将收费情况以书面形式上报.“公开督办”: 相似文献
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