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马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原(MATSA)免疫SPF级BALB/c小鼠制备阳性对照抗体,以SPF级BALB/c小鼠血清为阴性对照抗体,筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果,包被液为0.1 mol/L pH 9.6的碳酸盐缓冲液,抗原包被浓度为4μg/mL,封闭液为含10 g/L BSA的PBST,抗血清稀释比例为1:800,酶标抗体稀释比例为1:1200,酶标抗体作用时间为37℃温育45 min,底物作用时间为37℃温育15 min,终止液为2 mol/L H2SO4,洗涤4次,每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选,成功获得了MATSA的单克隆抗体,表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。 相似文献
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利用PCR技术扩增编码水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-Ind)糖蛋白基因的主要抗原表位区,通过引入其两端的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,定向插入到pET30c质粒T7启动子下游的多克隆区,构建重组质粒pET30c-vsvG,并转化至宿主菌BL21(DE3)株中。用1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白在大肠埃希氏菌中得到了高效表达,经过4 h表达即可达到高峰;融合蛋白的相对分子质量为57 ku。重组蛋白含有六聚组氨酸尾,主要以包涵体形式存在,Ni柱纯化后的蛋白经Western-blotting鉴定,具有良好的抗原性和特异性。 相似文献
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