PRRSV GP3蛋白和PCV-2Cap蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的小鼠免疫试验

为了研制以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病双价基因工程亚单位疫苗,利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3蛋白和猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF3-ORF2,并对该重组病毒进行Western-blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验、血清中和试验以及淋巴细胞增殖试验。结果显示,重组杆状病毒表达了重组GP3蛋白和Cap蛋白;该重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP3蛋白和Cap蛋白,并且重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠产生了抗PRRSV和抗PCV-2的特异性抗体,免疫小鼠血清中抗PRRSV和抗PCV-2的中和抗体效价分别达到1∶9.6和1∶13.6。淋巴细胞增殖试验表明,该重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答。结果表明,表面展示PRRSV GP3蛋白和PCV-2Cap蛋白的重组杆状病毒已构建成功,这为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和PCV-2的共感染奠定了基础。     

垂体ghrelin mRNA和LH mRNA在大鼠发情期和间情期的表达

为了探索垂体ghrelin mRNA和LH mRNA在大鼠发情期和间情期的表达特点,将12只未经产SD雌性大鼠随机分为发情期组和间情期2组,每组6只,通过外部观察和阴道涂片相结合的方法确定发情期和间情期.动物宰杀后取垂体,用RT-PCR方法检测ghrelin mRNA和LH mRNA的表达丰度.结果显示,发情期组垂体ghrelin mRNA的表达丰度显著低于间情期组(P＜0.01);发情期组垂体LH mRNA的丰度显著高于间情期组(P＜0.01).结果表明,ghrelin可能在垂体水平上参与了对LH分泌的调节.     

用甘肃棘豆草粉饲喂苦马豆素-BSA免疫山羊的血清相关酶分析

用甘肃棘豆草粉饲喂经苦马豆素(SW)-BSA免疫接种的山羊,检测分析了山羊血清中与中毒相关的酶的活性,以探讨SW-BSA免疫接种对动物机体组织器官的保护作用。将24只山羊随机分为免疫对照组、免疫攻毒组和未免疫攻毒对照组,免疫对照组和免疫攻毒组山羊接种SW-BSA,免疫攻毒组和未免疫攻毒对照组山羊按干重拌料饲喂10 g/(kg.d)甘肃棘豆草粉,检测血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)、尿素氮(BUN)和α-甘露糖苷酶(AMA)的变化。结果表明,免疫攻毒组山羊较未免疫攻毒对照组山羊LDH活性升高延缓28 d,AKP活性升高延缓14 d,AMA活性降低延缓21 d,BUN活性升高延缓14 d,GOT活性升高延缓28 d。这些酶活性延缓变化,说明SW-BSA免疫动物后,在甘肃棘豆攻毒后的30 d内,能够有效地延缓SW对山羊肝、心和肾等组织器官的损伤。     

马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立

用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原(MATSA)免疫SPF级BALB／c小鼠制备阳性对照抗体,以SPF级BALB／c小鼠血清为阴性对照抗体,筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果,包被液为0．1 mol／L pH 9．6的碳酸盐缓冲液,抗原包被浓度为4μg／mL,封闭液为含10 g／L BSA的PBST,抗血清稀释比例为1:800,酶标抗体稀释比例为1:1200,酶标抗体作用时间为37℃温育45 min,底物作用时间为37℃温育15 min,终止液为2 mol／L H2SO4,洗涤4次,每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选,成功获得了MATSA的单克隆抗体,表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。     

鸡头颈肿胀症的病因与发病机理研究

鸡头颈肿胀症的病因与发病机理研究薛登民童德文左宏恩王利刚张联丽（西北农业大学动物医学系陕西杨凌７１２１００）近年来，我们在临床和一些养鸡场发现一种以鸡头颈肿胀为特征的疾病。病鸡一般精神、饮食和营养状况无明显变化，严重者呼吸困难，失明，逐渐消瘦，开产期...     

喜树碱钠盐制备及用活性炭降低其毒性的试验

喜树碱钠盐制备及用活性炭降低其毒性的试验童德文曹光荣邓茂先宋晓平赵宝玉（西北农业大学陕西杨陵７１２１００）喜树（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ）为珙桐科旱莲属多年生落叶乔木，广泛分布于我国西南各省，是我国特有的植物。１９６６年，Ｗａｌ等从我...     

表达猪瘟病毒E2蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株的构建及动物免疫试验

为了构建表达猪瘟病毒E2蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株,亚克隆猪瘟病毒E2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建了重组质粒pYA3341-E2。将该重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E2),并对重组菌表达的E2蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析、测定其在体内外的稳定性、生长曲线、安全性及动物免疫试验。结果显示,重组菌能表达E2蛋白且表达的蛋白能与猪瘟病毒阳性血清特异性结合。在体外营养选择压力下,重组菌株在体外可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾。小鼠口服试验证实重组菌无毒性,安全可靠。动物免疫试验表明,口服重组菌免疫猪产生了抗E2蛋白抗体。淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱导机体产生较强的细胞免疫应答。结果表明,成功构建了能稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究猪瘟口服基因工程疫苗奠定了基础。     

双顺反子表达质粒在DNA疫苗研究中的应用

简述了DNA疫苗的研究概况,介绍了真核双表达质粒的结构特点及其在基因佐剂和二价DNA疫苗中的应用情况,总结分析了双表达质粒的优点和存在的问题,并对其今后在DNA疫苗中的研究方向和前景进行了展望。     

猪瘟病毒囊膜蛋白基因pcDNA4.0-E重组质粒的构建及其对小鼠的免疫原性

以猪瘟病毒石门株RNA序列为模板,应用RT-PCR方法,克隆得到猪瘟病毒囊膜蛋白E0-E2cDNA全序列,并将其与真核表达质粒pcDNA4.0定向连接,构建了重组质粒pcDNA4.0-E。经提纯后,给试验组小鼠后肢胫前肌注射pcDNA4.0-E,每只100μg,15 d后再注射1次,同时设空白对照组。于二免后第10、203、0 d分别扑杀小鼠,进行免疫小鼠脾和外周血淋巴细胞的转化增殖试验,并用间接ELISA法检测血清抗体水平。结果显示,与空白对照组相比,所构建的重组质粒能够极显著增强小鼠脾细胞和外周血淋巴细胞的增殖(P<0.01),血清抗体水平从二免后的第10 d开始逐渐升高,且极显著高于对照组(P<0.01)。说明该重组质粒能够诱导小鼠产生特异性免疫反应。     

蛋鸡脂肪肝出血综合征早期诊断的研究

２０周龄罗曼商品产蛋鸡饲喂低蛋能比日粮（２７７０千卡／ｋｇ，１３．９９％）９０天，实验复制脂肪肝出血综合征，每１５天测定一次血脂。在发病过程中，血浆β－、前β－脂蛋白显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），且与肝脏脂肪含量呈显著负相关（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；血浆磷脂、丙二醛也明显低于对照组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。饲喂标准日粮后，血浆脂蛋白和生产性能分别在１５和３０天内恢复，血浆总胆固醇、游离胆固醇／酯化胆固醇、尿酸、钙、磷与对照组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。日粮脂肪对本病的发生没有促进作用。