基于Ion Torrent PGM~(TM)测序系统的人mtDNA全测序分析

目的应用Ion Torrent PGM~(TM)测序系统对人线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)全序列进行分析检测,研究不同组织间mt DNA序列差异情况。方法通过法医尸体检验采集6名无关个体的组织样本,包括胸腔血液、头发、肋软骨、指甲、骨骼肌和口腔上皮。使用4对引物对线粒体全序列进行扩增,应用Ion Shear~(TM)Plus Reagents试剂盒和Ion Plus Fragment Library试剂盒等构建文库,并在Ion Torrent PGM~(TM)测序系统上进行线粒体基因组全序列测序,并针对异质性位点和在HVⅠ区域突变位点,进行Sanger测序验证。结果所有样本的全基因组mtDNA都扩增成功,6名无关个体分属于6种不同的单倍型,同一个体不同组织之间mtDNA存在异质性差异。异质性位点和HVⅠ区域突变位点采用Sanger测序结果均得到验证。通过Kappa统计方法进行一致性检验后发现,相同个体不同组织的mtDNA序列检验结果仍具有较好的一致性。结论本研究所采用的人线粒体基因组全序列的测序检验方法,可以检测出同一个体不同组织间mtDNA的异质性差异,该差异具有较高的一致性,该结果对mtDNA在法庭科学中的应用具有指导作用。     

外周血DNA甲基化谱与吸烟的关系

目的通过比较吸烟与不吸烟个体外周血DNA甲基化谱的差异,评估DNA甲基化在区分吸烟与不吸烟人群中的应用价值。方法根据下载于NIH的GEO公共数据库的人类全基因组DNA甲基化数据,运用Student’s T检验和聚类分析的方法评估外周血特定CpG位点DNA甲基化程度在吸烟与不吸烟人群中的差异。结果特定Cp G位点上,非吸烟人群与吸烟人群的DNA甲基化有显著区别。结论检测人外周血的甲基化情况可以区分吸烟和非吸烟人群。     

大面积载体上隐性浸润性生物物质DNA的提取

大面积载体上隐性浸润性生物检材主要指毛巾、衣裤等载体上看不见摸不着的人体脱落细胞。对于反复使用的物品,如牙刷、鞋帽、眼镜等,由于人体遗留的脱落上皮细胞较多,使用常规DNA提取方法如Chelex-100法等往往能获得理想的检测结果[1]。     

性别鉴定中amelogenin基因座变异的研究进展

Amelogenin基因座变异,分为amelogenin引物结合区突变和包含amelogenin基因座的Y染色体微缺失两种类型,以后者最为常见。Amelogenin引物结合区突变的发生机制是核苷酸点突变,包含amelogenin的Y染色体微缺失的发生机制可能是非等位同源重组或者非同源末端连接。在全世界人群中,位于印度次大陆地区的印度人群、斯里兰卡人群和尼泊尔人群amelogenin变异率非常高。Amelogenin变异对生育能力和表型影响非常小,但在性别鉴定中会导致错误的性别鉴定结果。采用包含常染色体STR基因座、amelogenin基因座和多个Y-STR基因座的复合扩增试剂盒进行检测可有效避免因amelogenin变异导致的性别误判。     

利用DNA条形码技术鉴别植物

目的研究利用DNA条形码技术鉴定上海地区常见植物叶片种类,在物种鉴定水平的基础上,进一步讨论利用分子标记技术对该类物证进行同一认定可行性。方法随机选取上海地区常见的9种植物,在其非新鲜的状态下利用高盐法提取植物组织的DNA,PCR扩增叶绿体rbcL和matK基因片段并且回收测序,通过数据库比对确定植物的物种。结果利用双基因鉴定分析系统,在随机收集的9份样品中,均达到物种水平的鉴定。结论利用DNA条形码技术,可以在物种水平准确地鉴定植物叶片类物证。     

指纹自动识别系统查询网络建设的构想

吉林市于2000年10月份开始了指纹自动识别系统正式的比对工作,已经录入十指指纹档案7万多份,取得了初步的效果。指纹自动识别系统作为一种高科技成果在刑侦领域得到应用,大大提高了比对指纹的效率,在打击犯罪、揭露犯罪的斗争中取得明显成效。 随着网络技术的不断发展,实现具有网络功能的指纹自动识别系统是其发展的必然趋势。许多省市已经建立起具有网络功能的指纹自动识别系统,利用网络实现指纹信息资料共享,可以极大的提高公安机关侦查破案的能力和工作效率、打击各类流窜犯罪分子,下面,我就谈谈对我市的指纹自动识别系统建立联网的设想。     

应用EZ1自动提取仪提取关节软骨组织的DNA

在刑事案件的DNA检验中.对于一些腐败的生物检材.多采用骨骼组织中的骨松质或骨密质来进行DNA检验.这主要是因为骨骼有外部硬组织的保护,能够抵抗外界环境的影响,其中的DNA不易被破坏[1].     

植物类物证DNA遗传标记鉴定系统的建立

目的建立一套以DNA遗传标记为基础的植物类物证检材的种属鉴定系统。方法收集上海地区常见植物200例,从形态学上确定物种,设计扩增rbc L、mat K、ITS基因片段的引物,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物并测序,评估三个标记的通用性和识别能力。结果在检测成功率方面,rbc L(99.5%)mat K(92.5%)ITS(86.0%);rbc L+mat K组合检测优于单rbc L或单mat K的识别能力,其识别能力主要在属及属以上水平;ITS检测结果不稳定,不适合作为单标记,但可作为有力补充,rbc L+mat K+ITS组合的识别能力明显高于rbc L+mat K组合,对大部分植物样本种属鉴定能够达到属及属以下水平。结论以rbc L+mat K+ITS组合作为标记的鉴定系统对植物类物证有良好的通用性,其识别能力对大部分植物样本能够达到属及属以下水平。     

人体脂肪组织DNA提取方法的比较

在法医物证学检验中，进行DNA分型的检材多为血液（痕）、毛发、指甲、肌肉组织及骨骼等，极少选择脂肪组织。脂肪组织采用常规方法提取模板DNA效果不佳，本文通过对不同提取方法进行比较，以探索可适用于脂肪组织DNA提取的方法。     

16个线粒体DNASNP复合检测体系的建立

目的建立一种复合检测线粒体DNA（mtDNA）单核苷酸多态性（SNP）分型的方法。方法通过设计等位基因特异性引物并结合毛细管电泳分型技术平台,建立包含16个mtDNASNP位点的复合扩增检测体系。对50名汉族无关个体血样进行mtDNASNP检测,并通过直接测序法对其分型结果进行验证。结果50个样本经本检测体系复合扩增后,均得到清晰的SNP分型结果,当模板量在0．5～10pg时能得到较理想的分型图谱。样本的复合检测结果与直接测序法结果完全一致。结论建立的复合检测体系检测mtDNASNP方法灵敏度高、操作简便、分型准确,为针对mtDNA进行简便、有效的中高通量多态性分型提供了一种新方法。