血色原微量分光法血痕确证试验

目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的灵敏度,用常见疑似血液/血斑,以及不同保存时间、不同基质的血斑测定方法的特异性和检材适应能力。结果用血色原微量分光法,仅血液(斑)具有415nm、525nm和555nm三个吸收峰组成的特异光谱,与常见疑似血液/斑没有交叉。反应2min,上样2.5μL,稀释1000倍的人血可稳定获得三峰光谱。通过延长浸洗时间、设置基质对照,10年陈旧血纱、有色布上的血斑等均可有效确证。三个吸收峰的高度与检液的血含量呈正相关,且525nm和555nm的吸光度变化趋势一致(y=0.523 2x+0.027 4,R2=0.997 1)。结论血色原微量分光法灵敏度高、特异性强,快速简便,可纳入DNA检验流程之中,在实际检案中有较好的应用前景。替代传统结晶法用于教学,更符合当前学生技能和意识的培养要求。     

样品成份对“咖啡环”法DNA检测的影响

目的调查样品中常见成份对"咖啡环"法DNA检测的影响。方法将含有不同浓度SDS、Na Cl等的DNA-EB滴加到载玻片上,室温自然蒸发,用凝胶成像系统观察荧光沉积形貌(Deposition Pattern,DP)、计算积分光密度(Integrated Optical Density,IOD),分析量效关系。结果低浓度非DNA成份存在时,DP仍以环状沉积为主,但有年轮环、放射纹等成份特异性细微差异。浓度高时,DP因成份而异,可为环+散在光点型(Na Cl)、中央光斑+弱小环型(SDS)、同心或年轮状多环型(Triton X-100)、环+斑点型(H^+)等。非DNA成份对DNA含量估计有不同程度影响,但估计值多数在0.5~2倍以内。结论样品成份对DNA的DP和IOD均有影响,但不影响DNA含量的粗略估计,且能提供样品纯度和残留物信息。     

用“咖啡环”法估测DNA含量

目的探讨DNA-溴化乙锭形成的"咖啡环"用于DNA含量的测定。方法将DNA与溴化乙锭混合,滴加在载玻片等载体上,蒸发后用凝胶成像系统观察、拍照,分析DNA的成环条件、环荧光强度与DNA浓度的相关性,以及"咖啡环"法评价DNA的灵敏度、适用范围等。结果 DNA-溴化乙锭溶液在载玻片、透明聚苯乙烯板等载体表面蒸发后可形成荧光环。在玻片上2μL点样时,DNA检出限可达到2ng/μL。在2ng/μL~1000ng/μL范围内,DNA浓度与环积分光密度拟合Logistic方程(R2=0.999)。结论 "咖啡环"法简单、快速,设备要求低,可用于DNA含量的高效、快速测定。