血色原微量分光法血痕确证试验

目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的灵敏度,用常见疑似血液/血斑,以及不同保存时间、不同基质的血斑测定方法的特异性和检材适应能力。结果用血色原微量分光法,仅血液(斑)具有415nm、525nm和555nm三个吸收峰组成的特异光谱,与常见疑似血液/斑没有交叉。反应2min,上样2.5μL,稀释1000倍的人血可稳定获得三峰光谱。通过延长浸洗时间、设置基质对照,10年陈旧血纱、有色布上的血斑等均可有效确证。三个吸收峰的高度与检液的血含量呈正相关,且525nm和555nm的吸光度变化趋势一致(y=0.523 2x+0.027 4,R2=0.997 1)。结论血色原微量分光法灵敏度高、特异性强,快速简便,可纳入DNA检验流程之中,在实际检案中有较好的应用前景。替代传统结晶法用于教学,更符合当前学生技能和意识的培养要求。     

Alu家族在法医DNA分析中的应用

Alu家族是灵长类特有的短散在重复序列,在人类基因组内含量丰富,分布广泛,甲基化程度高,有种属特异性和插入变异,为法医DNA分析面临的许多问题提供了潜在的解决途径。目前,Alu元件在法医DNA分析中的应用包括:DNA定量、种属鉴定、种族鉴定、性别鉴定、个体识别和亲子鉴定,以及全基因组扩增等。本文总结各种基于Alu元件的法医DNA分析技术的原理和特点,探讨Alu元件的法医学研究和应用前景,供相关学者参考。     

样品成份对“咖啡环”法DNA检测的影响

目的调查样品中常见成份对"咖啡环"法DNA检测的影响。方法将含有不同浓度SDS、Na Cl等的DNA-EB滴加到载玻片上,室温自然蒸发,用凝胶成像系统观察荧光沉积形貌(Deposition Pattern,DP)、计算积分光密度(Integrated Optical Density,IOD),分析量效关系。结果低浓度非DNA成份存在时,DP仍以环状沉积为主,但有年轮环、放射纹等成份特异性细微差异。浓度高时,DP因成份而异,可为环+散在光点型(Na Cl)、中央光斑+弱小环型(SDS)、同心或年轮状多环型(Triton X-100)、环+斑点型(H^+)等。非DNA成份对DNA含量估计有不同程度影响,但估计值多数在0.5~2倍以内。结论样品成份对DNA的DP和IOD均有影响,但不影响DNA含量的粗略估计,且能提供样品纯度和残留物信息。     

单管一步甲基化可变位点分析技术

目的建立单管一步甲基化可变位点（methylationvariableposition,MVP）分析技术一单管消化后PCR链融解曲线分析（post—digestionPCR—meltingcurveanalysis,PDP—MCA）。方法以文献报道的差异甲基化区（differentiallymethylatedregion,DMR）为模型,在MVP两侧设计一组解链温度各不相同的引物。应用FastDigest甲基化敏感性限制酶（methylation—sensitiverestrictionenzyme,MSRE）,在同一反应管内顺次进行DNA的酶切、复合扩增和MCA检测．生成MCA图谱。同时用该方法和传统的MSRE—PCRMCA技术检测相同样品（外周静脉血、精液、阴道液各5份）,比较两种方法检测结果,验证其可行性,并分析比较不同样品的MCA／HRM图谱。结果解链温度相差2℃以上的片段,MCA峰分离良好,复合扩增后可以用MCA技术检测。应用单管PDP—MCA技术,可以集酶切、扩增和检测三步于一管,在2h内得到与传统方法一致的特异性图谱和数据,并实现样品的快速分类鉴别。结论单管PDP-MCA技术可以实现多个MVP的单管、闭管检测,具有简便、快速、易于自动化等优点,可用于样品DNA甲基化差异的检测。     

15例围产期孕产妇死亡纠纷的法医学鉴定分析

<正> 围产期孕产妇死亡引起的医疗纠纷近年来在基层时有发生,有关这方面的尸检报道较少,笔者对受理的15例围产期孕产妇死亡纠纷的法医学鉴定进行回顾性分析研究,结果报告如下:     

降解检材STR分型Ladder-Like条带形成原因的探讨

目的探讨降解DNA短串联重复序列PCR扩增产物在PAGE中Ladder-L ike条带的形成原因。方法用一组人工合成的不同长度的D8S1179DNA单链,模拟降解检材中的断裂DNA;利用John M设计的D8S1179引物对模拟模板的DNA单链进行PCR扩增,PAGE分离。结果不同模拟模板的DNA单链的组合可以扩增出不同的Lad-der-L ike条带。结论短串联重复序列Ladder-like条带是PCR过程中降解DNA多态区互补扩增的产物。     

绿色瘤误诊1例

l案例某男，4岁，某年7月28日因无明显原因两鼻流出粘液脓性分泌物，有腥臭味，逐渐出现鼻塞，以右侧为重2个月，出现间断发热（T：38T－38．SCC），用青霉素治疗无效20天而人院。查体：右侧鼻翼及右下是甲隆起，红色，触之易出血，鼻腔阻塞，右上中切牙发黑，唇龈沟隆起，质软；gy显示右侧上颌窦、筛窦透光度降低。诊断为右鼻腔占位性病变，性质待查。于7月3日在全麻下行右鼻腔肿物探查术，自右上中切片、侧切牙、尖牙牙龈处切开，骨膜下有一！．SXlllXIsillXI．OXXI的肿物，质脆，切面呈鱼肉状，内含一颗牙齿。肿物摘除后，术腔与鼻…     

溺死诊断中的浮游生物检测法

溺水是常见的死亡原因之一,浮游生物检验是法医学鉴定溺死的重要依据。浮游生物检验方法可分为破机法、非破机法和分子生物学方法三大类。前两者主要以形态标记为检验对象,依赖于浮游生物的理化特性,有很大局限性。分子生物学方法以分子标记为检验对象,适用范围广,信息丰富,是值得探索的新方法。本文回顾溺死鉴定中的各种浮游生物检测法,供法医工作者在实践和研究中进行参考。     

HUMARA基因座差异甲基化的法医学意义

目的　探讨X连锁差异甲基化多态性基因座的法医学应用意义。方法　以STR基因座HUMARA为例 ,应用甲基化敏感性限制酶消化后PCR技术 ,复合分析该基因座的STR多态性和甲基化状态 ,调查并比较男、女检材的分型效果。结果　基因组DNA经HpaⅡ消化后 ,男性没有扩增产物 ,女性分型不受影响 ,男女混合检材得到女性的分型图谱。女性单克隆瘤细胞只能检出 1个等位基因。结论　差异甲基化的HUMARA基因座是混合斑分析、性别鉴定和组织克隆性判断的有用工具。     

手套类检材DNA分型的取材部位初步研究

目的探讨手套类检材进行法医DNA分型时的最佳取材部位。方法构建手套模型,对手套内表面分区取样,常规chelex-100法提取DNA,选取常用法医学STR基因座进行PCR扩增,PAGE检测条带,Quantity One和SPSS软件识别并分析条带。结果手套内表面不同部位的D1S1656和D12S1064基因座扩增条带光密度存在显著的组间差异（P〈0.05）,来自右手掌指关节和左手小鱼际对应部位的扩增条带光密度差异显著性最大。结论选取与手掌指关节、小鱼际相对应的手套内表面部位,有可能获得更多的DNA以利于分型,这一判断可直接用于指导法医实践。