禽流感病毒等RNA病毒鉴别基因芯片的制备

将克隆和鉴定的AIV的HA、NA、M、NS、NP基因以及NDV、IBDV,IBV的保守基因片段作为探针,同时以克隆的GAPDH基因作为阳性对照,利用芯片点样系统spotArray<'TM>24将探针与阳性对照、阴性对照和空白对照按照设计好的阵列点在基片上,制备了AIV等RNA病毒诊断芯片,并从点样条件和杂交条件两个方面进行了优化.结果显示,探针浓度在300～1 200 μg/mL时点样,Cy3-dUTP终浓度为0.05μmol/mL,杂交温度在42℃,杂交时间在8～12 h时,杂交信号比较理想.该方法对20份已鉴定的H5N1亚型禽流感病毒的检出率为100%(20/20);10份现地送检的疑似AIV样品的检出率为70%(7/10),检测结果与RT-PCR和鸡胚传代分离鉴定的符合率为100%.结果表明,制备的DNA芯片可有效诊断上述病毒.     

H2O2诱导PC12细胞凋亡前后miRNA的变化及探讨

目的用微小RNA(miRNA)基因芯片技术检测H2O2诱导凋亡的PC12细胞和正常PC12细胞miR-NA的表达谱差异。方法分别以不同浓度的H2O2处理PC12细胞12h,用MTT和流式细胞仪检测处理后细胞的生长活力和凋亡情况;分别提取A(0浓度H2O2处理组)和B(400nmol/LH2O2处理组)PC12细胞的miRNA做miRNA基因芯片检测。结果以A组作为对照,30、50、100、200、400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞生存率分别为(92±9.80)%、(90±14.70)%、(80±13.85)%、(54±12.33)%、(22±7.35)%(P<0.01);0、30、50、100、200和400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞早期凋亡率分别为2.6%、5.2%、7.2%、10.4%、16.6%、72.2%;在样品A中共筛选出68个有效表达的miRNA分子数据,在样品B中筛选出46个有效表达的miRNA分子数据,两者样品中均检测到有效表达的miRNA分子有39个,其中与样品A相比,在样品B中显著性下调表达的有6个。结论为脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡的机制和治疗的研究提供了理论依据和新的研究思路。     

犬瘟热病毒感染小鼠脾淋巴细胞所引起的主要基因表达情况的变化

采用基因芯片技术对正常小鼠淋巴细胞和犬瘟热病毒(CDV)感染后第7天的小鼠淋巴细胞基因表达的差异性进行了比较,从分子水平上探究了CDV感染机体后的免疫应答情况。结果显示,检测到364个差异表达基因,其中280个基因的表达水平升高,84个基因的表达水平下降。进一步以基因芯片中CDV感染后上调基因C-C型趋化因子受体2(CCR2)和下调基因CD14为研究对象,应用实时荧光定量方法验证基因芯片的结果,两者完全相符,说明芯片的筛查结果可靠。根据基因芯片的结果,采用Go注释系统和数据库查询,对364个差异表达基因进行功能注释,结果显示,差异表达基因主要与水解、结合、转运调控、信号传递、代谢、结构组成等有关,其中CCR2基因、CD14基因、丝裂原活化蛋白激酶1(MAP3K1)基因、CD69基因等被鉴定为差异表达基因。上述结果为进一步阐明CDV感染后机体的免疫应答机制奠定了基础。     

五种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其应用

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病痛毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上,以这5种细胞毒的核酸作为模板,进行不对称PCR扩增,制备靶物,经绿色荧光染料Cy3标记后,分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交,杂交信号经Genepix 4000A扫描仪扫描.结果显示,该芯片探针可以特异地与Cy3标记的这5种靶物结合.用该基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测,检出PRRSV阳性样品26份,PCV-2阳性样品47份,PRRSV和PCV-2混合感染阳性样品17份,PPV阳性样品5份,PRV阳性样品2份,CSFV阳性样品20份.表明,本试验研制的cDNA芯片探针可以特异地检测这5种猪病病毒,具有良好的诊断应用前景.     

MDCK细胞感染犬细小病毒后的差异表达谱分析

通过了解MDCK细胞感染犬细小病毒(CPV)后基因表达水平的差异,研究病毒对细胞的致病作用以及细胞抵御病毒感染的机制。利用表达谱基因芯片技术,分析持续感染犬细小病毒的MDCK细胞基因表达水平的变化情况,并用Real-Time PCR技术加以验证。结果显示,获得了359个差异大于1.5倍的表达基因(P0.05),占总基因数的1.53%,其中193个上调表达(0.84%),166个下调表达(0.69%)。对差异基因进行GO功能聚类分析,小部分涉及免疫应答、生长周期调控、信号转导和蛋白酶活性,其他大部分基因功能未知。利用Real-Time PCR随机验证5个基因在持续感染CPV后的差异表达,其结果和芯片杂交的结果一致。表明建立了MDCK细胞持续感染CPV后的差异表达谱,初步了解到CPV对宿主细胞的制约作用,引起部分细胞增殖调控相关基因发生了表达下调,以及细胞对感染的积极应答反应,部分免疫反应基因、肽链内切酶活性基因等发生了上调表达,从而为探索病毒的致病机理和宿主的抗病毒途径提供了试验基础。     

基因芯片技术专利纠纷及其对策

前言当今生物技术的迅猛发展带来了许多法律与伦理问题,其中发生于大洋彼岸,围绕基因芯片技术专利①而展开的近于白热化的法律纠纷,其产生、波折过程、解决渠道引起了生物产业的极大关注,涉及的专利技术保护问题对于我国生物技术产业是具有参考意义的。本文将从基因芯片专利纠纷的战况、基因芯片技术的专利分析、专利侵权     

OTS-2．2S基因芯片对人脑挫伤后基因表达差异的初步研究

目的利用基因芯片技术,研究人挫伤脑组织中基因表达差异。方法从脑组织提取mRNA,通过OTS-2.2S基因芯片,研究脑挫伤组织与对照脑组织细胞原癌及抑癌相关基因特异性表达差异。结果发现在挫伤脑组织中,HoJ-1和KIAAOO65基因表达水平显著下降,而p107mRNA表达水平显著升高。结论在脑挫伤中仅发现3条基因的表达有显著性差异;本研究是对脑损伤后基因表达水平及其法医学意义进行的探索性研究。     

基因芯片技术在中医药研究中的应用

生物科学正迅速地演变为一门信息科学.人类基因组计划(human genome project,HGP)也近尾声,其精确测序即将完成.人类正从结构基因组学(structural genomics)进入功能基因组学(functional genomics)和功能蛋白质组学(functional proteomics)时代,即所谓的后基因组时代.而基因芯片技术是后基因组时代一项举足轻重的技术.     

纳米科技与法医DNA检验

综述了纳米科技进步将对法医DNA检验产生的深远影响,对从DNA提取到基因芯片研究等多个未来研究的新方向进行了探讨。     

基因芯片技术在法医毒理学中的研究及应用前景

基因芯片 (genechip) ,也被称之为DNA微阵列 (DNAar ray)、寡核苷酸微芯片 (oligonucleotidemicrochip)或寡核苷酸微阵列 (oligonucleotidearray) ,首先由美国加州Affymetrix公司于 1996年开发 ,它的出现给分子生物学技术和人类基因组计划带来了一场新的革命[1] 。DNA芯片技术的基本原理就是通过RNA链或DNA单链间按碱基互补配对原则进行的杂交[2 ] 。基因芯片利用了大规模集成电路手段 ,控制固相载体上合成的千百万个DNA探针 ,将它们很有规律地排列在固相支持物上 ,形成DNA微阵列。样品DNA/RNA通过PCR扩增或体外转录等技术掺入…