高效液相色谱法测定新藤黄酸纳米粒中新藤黄酸的含量和包封率

目的:建立新藤黄酸纳米粒中新藤黄酸含量和包封率的测定方法.方法:采用C18-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇:1.0 mol/L磷酸(9:1),流速为1.0 ml/min,检测波长为360 nm,进样容积为20 μl,柱温为25℃.结果:新藤黄酸在10～120 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9(n=7);新藤黄酸平均回收率为99.32%,RSD为1.03%(n=3).平均含量为99.52%,包封率为83.81%.结论:高效液相色谱法准确、可靠、重复性好,可用于新藤黄酸纳米粒含量及其包封率的测定.     

新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid，GNA）对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法 倒置显微镜下观察细胞形态变化，采用噻唑蓝法检测细胞的存活率，单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine，MDC）染色法检测自噬泡的形成，吖啶橙（acridine orange，AO）染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化，Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3，LC3）- Ⅱ/LC3- Ⅰ以及Beclin- 1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖；MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成；AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量；Western blot结果显示，GNA作用U87细胞后，LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ比值增大，Beclin- 1的表达增加，提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。     

新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响。〖JP〗方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率。结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强。倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征。流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高。结论 0.75~12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖。     

新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞凋亡的作用

目的 探讨新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的GNA培养B16细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定GNA对B16细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色后细胞凋亡;采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染,流式细胞仪检测B16细胞凋亡。结果 GNA作用B16细胞后,细胞的抑制率随着药物浓度的增加而升高;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA处理的B16细胞出现了典型的凋亡特征;流式细胞仪检测显示GNA处理的B16细胞随着药物浓度的增大凋亡率随之上升。结论 GNA在一定的范围内,能够浓度和时间依赖性地通过诱导细胞凋亡抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响，采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响，采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率，采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响，采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明，新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用，且抑制作用具有明显的剂量依赖性；fluo-3AM染色荧光显微镜下观察，可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平，且呈现浓度依赖关系；PI染色流式细胞仪检测结果表明，新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期；Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明，随着新藤黄酸浓度的增加，A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势；Western blot检测结果表明，新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

新藤黄酸体外抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的 研究新藤黄酸(Gambogenic acid,GNA)抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用及其相关机制.方法 不同浓度GNA分别作用A549细胞24、48和72 h,甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测药物对A549细胞增殖的抑制率,吖啶橙/溴化乙啶(acri...     

新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”探针药物法考察新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450，CYP450)亚型酶活性的影响。 方法 将新藤黄酸与6种亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4)对应的特异性混合探针药茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑与大鼠肝微粒体孵育，采用高效液相色谱法同时检测肝微粒体中6种探针底物的相对酶活性并计算其半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration, IC50）。 结果 不同浓度新藤黄酸作用后大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶活性相比较，差异均具有统计学意义，且随着新藤黄酸的浓度增高，各种酶的活性呈现明显的降低趋势。通过抑制曲线计算得到新藤黄酸对CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4的IC50值分别为4.18、45.61、10.02 μmol/L，对CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1的IC50值均大于100 μmol/L。 结论 新藤黄酸对CYP2C19酶活性有中等抑制作用，对CYP3A4酶活性有弱抑制作用，但对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1酶活性没有抑制作用。     

新藤黄酸温敏原位凝胶剂的设计与研究

目的 制备注射用新藤黄酸温敏原位凝胶剂。方法 运用星点设计-效应面优化法确定注射用新藤黄酸温敏原位凝胶剂的最佳处方,并采用高效液相法对其体外释放进行含量测定。结果 最佳处方为0.2%新藤黄酸+18.26%泊洛沙姆407（F127）+7.4%泊洛沙姆188（F68）+0.5%苯甲醇,胶凝温度为35.4 ℃。新藤黄酸温敏原位凝胶的体外释放方程为 Y=0.983 5X+4.028, R=0.999 3, 符合零级释药。结论 星点设计-效应面优化法能很好地优化该制剂处方,优化后处方的体外释药稳定,达到预期要求。     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用。〖JP〗方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素(adriamycin,ADR)及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度。结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50 由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系。结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性。     

自制葡聚糖凝胶微型柱测定新藤黄酸聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球包封率

目的 自制葡聚糖凝胶微型柱，建立分离测定新藤黄酸（gambogenic acid, GNA）-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid, PLGA）纳米微球包封率的方法。方法 采用自制葡聚糖凝胶微型柱分离PLGA纳米微球与游离药物，用浊度法判断葡聚糖凝胶微型柱对PLGA纳米微球的吸附程度；用高效液相色谱法测定PLGA纳米微球中GNA含量，并计算包封率。结果 自制葡聚糖微型柱可以实现游离药物与PLGA纳米微球的分离；所测3批PLGA纳米微球的包封率平均值为82.42%。结论 自制葡聚糖凝胶微型柱法简便，结果较精准，适合于GNA-PLGA纳米微球包封率的测定。