鸭MAPK1蛋白的原核表达和单克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 曹守林,韩先干,王少辉,侯湾湾,田明星,丁铲,王桂军,于圣青.鸭MAPK1蛋白的原核表达和单克隆抗体的制备[J].中国兽医科学,2014(11). |
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作者姓名: | 曹守林 韩先干 王少辉 侯湾湾 田明星 丁铲 王桂军 于圣青 |
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作者单位: | 中国农业科学院上海兽医研究所;安徽农业大学动物科技学院; |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A209);安徽省教育厅产学研重点科研项目(KJ2012A124) |
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摘 要: | 为研制鸭丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)单克隆抗体,从樱桃谷鸭脾样品扩增鸭MAPK1基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建鸭MAPK1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白,经纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选分泌抗鸭MAPK1的单克隆杂交瘤细胞株,进行3次亚克隆纯化后,制备小鼠腹水。采用间接ELISA测定腹水效价,用Western-blot检测其特异性,并进行单克隆抗体的亚类鉴定。测序结果表明,鸭MAPK1基因编码区全长1 107bp,编码369个氨基酸。SDS-PAGE检测结果表明,本研究获得了可溶性的42ku的鸭MAPK1重组蛋白。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,得到2株抗鸭MAPK1的阳性杂交瘤细胞株,腹水效价均达到1∶12 800以上,均为IgG1亚类。Western-blot分析结果表明,制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应特异性。以上结果表明,本研究成功制备了抗鸭MAPK1的单克隆抗体,为进一步研究其在先天免疫反应中的作用奠定了基础。
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关 键 词: | 鸭 MAPK基因 克隆 原核表达 单克隆抗体 |
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