mRNA降解与血痕遗留时间相关性探索

目的:血痕遗留时间一直是法医学领域研究的难点和热点,血痕遗留时间的确定能为案发时间的推断起到重要作用。该研究以离体血痕为研究对象,通过血痕m RNA降解的研究,探讨72小时时间内血痕m RNA降解与血痕遗留时间的相关性。方法:采用TRIzol提取血痕总RNA,对提取的RNA采用基因特异性逆转录引物进行逆转录,对获得的c DNA采用SYBR Green法进行实时定量PCR检测。在基因的选择上,以β-actin、HBB两个基因为目的基因,18s r RNA为内参基因。结果:计算ΔCT值,即ΔCT=CT(target m RNA)-CT(reference DNA),建立ΔCT值与血痕遗留时间的相关性。结果显示离体血痕72小时时间内β-actin、HBB基因m RNA稳定性强,没有发生明显降解。结论:离体72小时血痕β-actin、HBB基因m RNA降解与血痕遗留时间没有相关性,在该时间段m RNA降解尚不能作为血痕遗留时间推断的指标。     

人血痕淋巴细胞核DNA降解规律的研究

应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定离体72小时内不同时间段的血痕中彗星样淋巴细胞出现率。显示淋巴细胞核DNA降解程度与血痕形成时间具有高度的相关性。获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程（P〈0．001）,具有高度的统计学意义。     

多花黄精多糖PcUER1基因的克隆与表达分析

目的探究安徽生产的多花黄精多糖3,5-异构酶/4-还原酶基因(PcUER1)的结构基因信息及其在多花黄精中单糖鼠李糖化合物生源路径中的表达调控机制。方法以多花黄精为研究对象,基于其转录组学数据,克隆PcUER1基因并针对该cDNA序列展开生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR方法检测多花黄精不同组织中PcUER1基因的表达水平。结果多花黄精多糖PcUER1基因的cDNA序列长度为900 bp,编码299个氨基酸;序列分析表明多花黄精与百合科虎眼万年青的相似度达到92.03%;实时荧光定量PCR检测结果显示,PcUER1基因在多花黄精的根、须根、茎、叶中表达水平逐渐降低,茎和叶中PcUER1基因表达水平的差异无统计学意义。结论多花黄精多糖PcUER1基因的活性位点有辅因子结合基序和催化四分体基序,其蛋白表达产物理化性质稳定。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达影响

目的 通过检测大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达水平，探讨五子衍宗丸治疗少弱精子症的作用机制。方法 将体质量200～220 g的雄性SD大鼠随机分成正常组，模型组，生精胶囊组，五子衍宗丸低剂量、中剂量、高剂量组。采用连续灌服雷公藤多苷8周的方法复制少弱精子症模型，模型复制成功后连续给药4周。采用Western blot法测定Catsper1蛋白含量，采用荧光定量PCR法测定Catsper1 mRNA表达水平，采用酶联免疫吸附试验检测睾丸组织中cAMP含量。结果 生精胶囊和高剂量五子衍宗丸能明显提高模型大鼠睾丸组织中降低的cAMP含量以及升高睾丸组织中降低的Catsper1蛋白及其mRNA表达水平（P<0.05）。结论 促进Catsper1蛋白表达并参与cAMP-Ca2+正反馈可能是五子衍宗丸提高精子质量的机制之一。     

电针“神门”穴对创伤后应激障碍小鼠行为学参数和前额叶皮质FKBP5表达的影响

目的 观察电针“神门”穴对创伤应激后障碍（post-traumatic stress disorder，PTSD）小鼠焦虑样行为及前额叶皮质FK506结合蛋白5（FK506-binding protein 5，FKBP5）表达的影响。方法 将C57小鼠随机分为正常组、模型组、电针组，每组6只。模型组和电针组小鼠采用单一延长应激加电刺激法复制PTSD小鼠模型。电针组小鼠每日针刺“神门”穴15 min，每日1次，连续14 d。利用旷场实验、高架十字迷宫实验检测小鼠行为学参数。采用实时荧光定量PCR法检测小鼠前额叶皮质FKBP5 mRNA表达水平，采用Western blot法检测小鼠前额叶皮质FKBP5表达水平。结果 旷场实验中，电针可明显提高模型小鼠中央区域停留时间、跨格次数（P＜0.05）；高架十字迷宫实验中，电针可明显增加模型小鼠开臂时间、开臂次数、开臂时间比、开臂次数比（P＜0.05）。模型组小鼠前额叶皮质FKBP5及其mRNA表达水平较正常组明显升高（P＜0.05）；电针组小鼠前额叶皮质FKBP5及其mRNA表达水平较模型组显著降低（P＜0.05）。结论 电针能明显改善PTSD小鼠焦虑样行为，其作用机制可能与增加PTSD小鼠前额叶皮质FKBP5的表达水平有关。     

荧光标记STRs复合扩增法鉴定混合血痕

本文报道应用荧光标记STR。复合扩增及荧光DNA自动分析技术，对含有大面积混合血痕的生物检材进行鉴定的方法。根据犯罪嫌疑人和被害人基因型差异大的特点。选取等量血痕混合后进行PCR扩增，成功地解决了大量混合血痕的DNA鉴定分析，并进行个体识别案例。     

卵巢老化相关基因筛选及针刺"肾俞"的干预作用

目的:筛选卵巢老化及针刺“肾俞”干预的相关基因。方法:建立自然的更年期大鼠模型,实验动物包括青年组、更年组、针刺组,采用mRNA差异显示PCR技术,筛选卵巢中差异表达的基因,其中部分进行克隆、测序,并与NCB I相关数据库进行同源性比较。结果:获得16条差异表达明显的cDNA片段,其中已测序的6条均为未知功能基因。结论:卵巢老化及针刺“肾俞”的干预效应可能是多基因参与作用的结果,对分离到的cDNA进一步研究有助于揭示其分子机制。     

命案现场血痕形态的分析和利用

在命案现场中,血痕的利用是法医物证技术的重要任务之一。本文从不同的血痕形态入手,结合具体案例,探讨了现场不同的血痕形态是判断案件性质,分析作案过程,辨别现场种类,确定侦查方向和证实犯罪的重要依据,进而提出了分析利用现场血痕形态时应注意的问题。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响，探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只），采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型，将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组，每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性，酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量，实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5，LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平，Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时，艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量，显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平，显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平，显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性，提高BGP含量，其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响

目的 观察冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的调控作用.方法 将RAW264.7巨噬细胞分为对照组,模型组,冠心平含药血清低、中、高剂量组,以80μg/mL ox-LDL刺激24 h,诱导巨噬细胞泡沫化模型,采用不同浓度冠心平含药血清进行干预.油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成;ELISA法检测巨噬细胞内游离胆固醇(free cholesterol,FC)与胆固醇酯(cholesterol esterase,CE)的表达水平;实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞清道夫受体A(scavenger receptor-A,SR-A)和CD36 mRNA表达水平.结果 冠心平中、高剂量能够显著减少巨噬细胞泡沫化;低剂量显著增加巨噬细胞FC水平(P<0.05),高剂量显著降低巨噬细胞CE水平(P<0.05);冠心平高剂量显著增加SR-A mRNA表达水平(P<0.05),低、中、高剂量均显著增加CD36 mRNA表达水平(P<0.05).结论 冠心平能够抑制巨噬细胞的泡沫化,这或许是冠心平治疗动脉粥样硬化的潜在机制之一.     

血痕在福建春季室外环境下的物证检验质量及颜色变化

福建春季室外环境下血液痕迹随时间在不同载体上DNA物证作为证据的有效时间和血液痕迹颜色变化规律,可为侦查提供有效线索。以室外环境下完全暴露与半暴露的两种环境下五种载体上的血痕作为研究对象,对不同时期提取的血液痕迹进行DNA检验,用相机拍照取样,并用PhotoShop取相片色值后用SPSS分析色值数据。其结果显示:福建春季室外暴露14天的血痕物证仍具有证据价值,白色木板上的血痕在是否有纱布遮盖情况下颜色有明显差异。     

血痕在福建春季室外环境下的物证检验质量及颜色变化

福建春季室外环境下血液痕迹随时间在不同载体上DNA物证作为证据的有效时间和血液痕迹颜色变化规律,可为侦查提供有效线索。以室外环境下完全暴露与半暴露的两种环境下五种载体上的血痕作为研究对象,对不同时期提取的血液痕迹进行DNA检验,用相机拍照取样,并用PhotoShop取相片色值后用SPSS分析色值数据。其结果显示:福建春季室外暴露14天的血痕物证仍具有证据价值,白色木板上的血痕在是否有纱布遮盖情况下颜色有明显差异。     

循阳明经按摩对脑卒中大鼠神经功能的影响及其机制

目的 观察循经按摩对脑卒中大鼠模型血清脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）表达及脑组织超微结构的影响，探究循经按摩改善脑卒中后神经功能的作用机制。方法 采用线栓法复制大鼠中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型。将72只实验大鼠随机分为模型组、循经按摩组、假手术组，每个组又按照时间分为4个亚组分别为3天组、7天组、14天组、21天组，循经按摩组在模型复制成功后24 h开始干预。采用Longa评分评定神经功能，采用光学显微镜和透射电子显微镜下分别观察大鼠脑组织变化，采用实时定量PCR检测BDNF mRNA表达水平，采用ELISA法检测BDNF蛋白的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组、循经按摩组大鼠各时间点Longa评分均明显提高（P＜0.05）；与模型组比较，循经按摩组大鼠各个时间点Longa评分均降低（P＜0.05）。光学显微镜下发现，与模型组相比，循经按摩组皮质层损伤部位神经细胞水肿的变性随时间的推移而明显减轻，海马层神经细胞排列逐渐规律，且随着时间的推移排列逐渐紧密；透射电子显微镜下发现，与模型组相比，循经按摩组大鼠脑组织细胞肿胀、自噬和凋亡明显减少。与假手术组比较，模型组各个时间点大鼠BDNF mRNA及蛋白表达水平均明显下调（P＜0.05）；与模型组比较，循经按摩组各个时间点大鼠BDNF mRNA及蛋白表达水平均明显上调（P＜0.05）。结论 循经按摩可以上调BDNF表达水平，减少脑组织神经细胞的变性、凋亡，达到改善神经功能损伤的作用。     

犯罪现场血痕勘验

遗留在犯罪现场各种物体表面上的血痕有不同的形态反映,对血痕证据的分析可以帮助进行现场重建和案情分析。现场血痕的勘验是血迹形态分析的首要环节,对犯罪现场重建有着重要的意义。     

抵当汤对糖尿病大鼠心肌组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨抵当汤及其拆方对糖尿病大鼠肥大心肌细胞JAK2/STAT3信号通路的影响。〖JP〗方法 单次注射链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、抵当汤组、桃仁大黄组、水蛭虻虫组和缬沙坦组,以正常雄性SD大鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组大鼠接受相应药物灌胃,连续8周。采用Western blot法检测心钠素（atrial natriuretic peptide,ANP）、心肌组织JAK2和STAT3蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测JAK2、STAT3 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,模型组ANP、JAK2、STAT3蛋白以及JAK2、STAT3 mRNA表达水平均显著上调（P<0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织ANP、JAK2和STAT3蛋白表达的主效应均具有统计学意义（P<0.05）,两者的交互作用均无统计学意义（P>0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织JAK2、STAT3 mRNA表达的交互作用具有统计学意义（P<0.05）。缬沙坦组、抵当汤组及两个抵当汤拆方组ANP、JAK2蛋白及JAK2 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 抵当汤延缓糖尿病大鼠心肌细胞肥大的机制与抑制JAK2/STAT3信号通路有关,其拆方对JAK2、STAT3 mRNA表达的效应存在相互影响。     

健胎液对模型小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜容受性的影响。方法:于妊娠第4天9∶00利用米非司酮建立胚泡着床障碍小鼠模型,予健胎液进行干预,于妊娠第4天21∶00处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,采用放免法检测血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测子宫ERmRNA、PRmRNA表达。结果:与模型组相比,中药组着床率和平均着床胚胎数均显著升高,与对照组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;3组血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量无显著改变;中药组子宫ER mRNA、PR mRNA表达均较模型组显著提高,与正常组比较差异无显著性。结论:健胎液通过促进子宫内膜发育,调节胚泡着床障碍小鼠子宫组织ER、PR基因的表达,改善子宫内膜容受性,利于胚泡着床。     

补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号通路Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达的影响

目的 探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号转导通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响。方法 采用线栓法复制右侧大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组和益气活血方组。脑缺血2 h后，持续灌注7 d。采用PCR检测额顶叶皮质Nurr1、SMO mRNA表达水平，采用Western blot检测其蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达水平均明显上调（P<0.05）；益气活血方组和补肾生髓方组Nurr1 mRNA及其蛋白、SMO蛋白相对表达水平均较模型组明显下调（P<0.05）；模型组、益气活血方组和补肾生髓方组SMO mRNA相对表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；益气活血方组与补肾生髓方组Nurr1、SMO蛋白表达水平有显著差异（P<0.05）。结论 补肾生髓方和益气活血方促进脑组织修复的作用与其下调Notch信号转导通路中Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达有关。     

理筋手法对膝骨关节炎兔软骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨理筋手法对膝骨关节炎（knee osteoarthritis, KOA）兔软骨的保护机制。方法 将新西兰兔随机分为正常组、模型组及手法组，每组8只。采用关节腔内注射木瓜蛋白酶水溶液复制KOA模型。手法组每日采用理筋手法治疗，每次10 min，连续治疗21 d；正常组和模型组均不给予干预措施。采用ELISA法测定血清白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)水平；采用苏木精-伊红染色法观察膝关节软骨的组织形态；采用Western blot法和实时荧光定量PCR分别测定软骨组织中Wnt3α、β-catenin、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13)蛋白及其mRNA的表达水平。结果 与模型组比较，手法组软骨板厚度增加、软骨剥脱较少，细胞核变性更轻微。与正常组比较，模型组血清IL-1β、TNF-α水平显著升高(P<0.05)；与模型组比较，手法组血清IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。模型组软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白及其mRNA表达水平均较正常组显著升高(P<0.05)，手法组软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白及其mRNA表达水平均较模型组显著降低(P<0.05)。结论 理筋手法对KOA兔软骨的干预疗效显著，其作用机制可能与阻断Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

桑黄正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的 探讨桑黄正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Phellinus igniarius decoction，BAEP）体外对白念珠菌（Candida albicans）标准株SC5314生物膜形成的影响。 方法 采用二倍稀释法测定BAEP对白念珠菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）和抑制50%生物膜形成的最低浓度(sessile minimal inhibitory concentration，SMIC50)；采用XTT还原法测定BAEP对白念珠菌生物膜代谢的影响；固体培养基上观察BAEP对白念珠菌菌落形态的影响；倒置显微镜与荧光显微镜下分别观察BAEP对白念珠菌生物膜形态与活性的影响；扫描电镜下观察BAEP对白念珠菌生物膜形态结构的影响；实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测生物膜相关基因ALS1和HWP1的转录水平变化。结果 BAEP对白念珠菌生物膜的SMIC50为1 024 μg/mL；菌落形态实验观察结果显示，1 024 μg/mL BAEP可影响白念珠菌菌落；倒置显微镜、荧光显微镜下显示1 024 μg/mL BAEP可抑制白念珠菌生物膜的形态和活性；扫描电镜下显示1 024 μg/mL BAEP对白念珠菌生物膜有明显的抑制作用；qRT-PCR检测结果显示BAEP可明显下调HWP1的表达水平和上调ALS1基因的表达水平。结论 BAEP对白念珠菌SC5314生物膜的形成有一定的抑制作用。