3种DNA提取法在污染严重混合斑分型中的应用比较

目的比较Chelex-100法、酚/氯仿法和二氧化硅膜法3种DNA提取法在污染严重混合斑分型中的应用效果。方法从日常案例中收集污染严重的混合斑25份,差异消化法分离精子后同时用Chelex-100法、酚/氯仿法和二氧化硅膜技术3种方法提取DNA,采用PCR-STR技术对D19S253、FGA和CSF1PO 3个基因座进行分型,Gel-Pro软件处理电泳图谱,SPSS软件分析比较不同方法之间的差异。结果采用Chelex-100法提取DNA,25份检材分型结果均未成功;采用酚/氯仿法,25份检材中10份分型成功,3份检材FGA和CSF1PO基因座可分型,4份检材CSF1PO基因座可分型;采二氧化硅膜纯化法,25份检材均成功分型;酚/氯仿法和二氧化硅膜法两种方法比较,结果存在显著性差异(P<0.05)。结论二氧化硅膜纯化技术可以有效去除PCR抑制物,提取的DNA扩增效果明显优于Chelex-100法和酚/氯仿法,具有较高的应用价值。     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

模板DNA磁珠提取法

<正> 生物检材的DNA分析结果取决于对检材DNA的提取与获得。DNA提取的方法很多,如常规采用的有机酚-氯仿提取法和Chelex-100提取法。前者操作复杂,步骤多,虽纯度高但回收率低;后者操作简便、快速,但纯度低,含有大量酶抑制剂,影响检验的成功率。本文作者介绍一种提取DNA纯度高的快速方法。     

用磁珠法快速提取指甲DNA

<正>在日常检案过程中,一般采用Chelex-100法或苯酚/氯仿法提取指甲DNA。Chelex-100法提取的DNA模板有时存在着较多扩增抑制物,需进一步纯化。苯酚/氯仿法虽可以得到质量较好的DNA模板,但在提取过程中需要多步离心,有可能使DNA样品     

Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用

目的利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。     

应用Differex~(TM)法提取混合斑中精子DNA

对混合斑中精子的检验,采用传统的Chelex-100两步消化法存在消化时间长、离心洗涤次数不易控制等缺点,一旦操作不当,就会因此而引起DNA混合、损失,导致PCR反应失败。本文应用D ifferexTM系统法,解决了部分混合斑检材的精子DNA提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的效果。1材料与方法1.1案件检材所用检材系案件鉴定中含有精子的现场提取床单上的混合斑、被害人的短裤、擦拭用的报纸、被害人的阴道及口腔拭子,以及在室温下存放约1年的阴道拭子。1.2 DNA提取方法1.2.1 Chelex-100两步消化法[1]取适量检材剪碎,加入适量TNE,37℃水浴…     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较CSCD

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

联合运用CTAB与磁珠提取陈旧骨骼DNA

<正> 用Chelex-100法或酚-氯仿法提取骨骼DNA,一般采用PK消化。该法虽对比较新鲜且有软骨组织存在的骨骼DNA提取效果较好,但对陈旧性骨骼DNA提取,难以达到理想效果。有人将CTAB(cetytrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化胺)用于陈旧性骨骼DNA提取,并采用纯化柱对DNA提取液进行浓缩纯化。由于其检验步骤相对烦琐,产物回收率受到限制。本文作者用CTAB裂解     

硅珠法提取生物检材DNA的影响因素

正在酚-氯仿有机法、Chelex-100法、磁珠法及硅珠法几种DNA提取方法中,硅珠法在脱落细胞等微量生物检材以及骨骼、牙齿等疑难生物检材中的成功应用得到了很多学者的认可[1-3]。随着硅珠法的不断推广应用,有学者对传统的硅珠法进行了改良以提高其提取模板DNA的灵敏度[4],也有人通过实验证实加大检材量能够提高硅珠法在脱落细胞DNA中的提取浓度[5]。本研究系统地比较了硅珠量、硅珠悬浮时间以及     

3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较

性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比…     

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。     

现场大量生物检材的自动化提取应用

正随着司法诉讼进程对证据质量要求的不断提高,重特大案件的现场重建直接导致生物检材的送检量大幅度提升,时效要求也越来越高。而现场送检的生物检材种类繁多,以往应用Chelex-100法手工操作耗时长、易污染,手工磁珠法无法批量进行,传统方式已无法适应形势的要求~([1]),寻求高通量的生物检材DNA自动化提取应用已迫在眉睫。本研究通过采用Auto Lys STAR自动化工作站结合微量检材DNA提取试剂盒建立生物检材DNA自动化检验体系,以实     

碱性裂解法提取法医生物检材DNA及其法医学应用

目前 ,在法庭科学领域中常规使用的ＤＮＡ提取方法有两种 :Ｃｈｅｌｅｘ 10 0提取法及苯酚 氯仿提取法。其中 ,Ｃｈｅｌｅｘ 10 0提取法提取检材ＤＮＡ至少需要 1ｈ以上 ,其间经过几次离心及温度转换 ,对某些组织如精斑等还要求过夜。而苯酚 氯仿抽提法则更繁杂 ,不仅需一两天 ,而且耗检材多 ,所用试剂昂贵。因此 ,如何缩短ＤＮＡ的提取时间 ,减少检材用量 ,降低试剂消耗是十分值得研究的课题。碱性裂解法是指在强碱作用下 ,使构成细胞的蛋白质成分谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸残基等迅速发生电离 ,从而快速破坏蛋白质的一级结构[1,2…     

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法（M48）和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。     

全血中DNA6种提取方法的比较

目的 比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异.方法 收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析.结果 常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义.改良有机法得率最低,IQ法得率最高.统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义.结论 与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提.     

泥土中精斑的DNA检验

泥土混合物检材在案件检验中经常遇到,去除泥土对DNA检验的影响,得到理想的检验结论是检验者关心的共同问题,作者成功对1例遗留在泥土中的精液混合斑进行DNA检验。我们设计了以下检验过程,对提取过程和纯化过程进行了简化,得到了理想的检验结论。1案例资料取含有精液混合斑的泥土适量检材两份,分别装入两个1.5ml的离心管中,编为1、2号,采用PK消化去除女性细胞后。1号管采用5%chelex-100结合PK、DTT提取DNA。2号管经有机法消化后采用酚氯仿提取DNA,在加入等体积氯仿混匀离心后,转移上层液至干净离心管中,进行纯化浓缩,得到纯化的DNA…     

3种方法联合运用提取人体脱落上皮细胞DNA

目的寻求提高法医物证检验中附有人体脱落细胞载体检材的DNA检出率的方法。方法根据案件检材的具体条件．选择3种提取方法即Chelex-100法、Chelex-100联合有机法和Chelex-100联合磁珠法。结果采用了分步提取DNA法,可充分、有效地提取微量DNA,提高了人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。结论根据第一步提取方法的检测结果,来调整下一步的提取策略,如是否加以纯化浓缩,可增加人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。     

一种改良Chelex地方法提取血痕DNA

对于新鲜或量足的血痕,采用文献报道的Chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得满意结果,但在日常检案过程中,陈旧而量少的血痕检材经常遇到,而且载体可能有泥沙、色素或吸附力强等PCR扩增抑制物的存在.这类检材DNA采用普通的Chelex-100快速提取法,有时很难奏效.针对以上问题,本文结合两例检案,对血痕DNA的Chelex-100快速提取法进行了一些改良,显著提高了检出率,使检案成功,报告如下:1 材料与方法1.1 材料:取自本实验室检验的两案例中的22份血痕.     

DNA检案中混合拭子提取方法的优化

正在强奸案中,阴道拭子作为犯罪证据,其重要性不可替代。通常精斑预实验阳性的阴道拭子检材即为混合斑的拭子,分离检验方法是采用差异裂解法(两步法)先除去精子外的其他细胞DNA,保留精子DNA[1],再通过DNA IQTMSystem提取精子DNA,获得纯精子的DNA图谱。但在实际操作中,混合斑中的阴道上皮细胞和精子DNA未作定量检测,使用该方法提取精子DNA时,往往会出现女性DNA去除不干