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应用Differex~(TM)法提取混合斑中精子DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
对混合斑中精子的检验,采用传统的Chelex-100两步消化法存在消化时间长、离心洗涤次数不易控制等缺点,一旦操作不当,就会因此而引起DNA混合、损失,导致PCR反应失败。本文应用D ifferexTM系统法,解决了部分混合斑检材的精子DNA提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的效果。1材料与方法1.1案件检材所用检材系案件鉴定中含有精子的现场提取床单上的混合斑、被害人的短裤、擦拭用的报纸、被害人的阴道及口腔拭子,以及在室温下存放约1年的阴道拭子。1.2 DNA提取方法1.2.1 Chelex-100两步消化法[1]取适量检材剪碎,加入适量TNE,37℃水浴… 相似文献
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Differex~(TM)系统在混合斑精子DNA分离提取中的应用 总被引:1,自引:1,他引:0
叶某,女,7岁。某日放学途中被诱骗奸杀,3日后发现其尸体,且已高度腐败。提取阴道内容物送检。阴道拭子浸出液沉淀经涂片,检见少量精子和阴道上皮细胞。用传统差异裂解法[1]分离提取混合斑精子DNA,扩增分型效果不佳(照片1)。本文作者应用D ifferexTM系统分离提取混合斑精子DNA,取得扩增分型的满意结果。现报道如下。1 D ifferexTM系统分离提取精子DNA1.1主要仪器与试剂D ifferexTM试剂盒(含消化缓冲液、分离液、无核酸酶水)、DNA IQTM纯化系统、PowerPlexTM16试剂盒为美国Promega公司产品;金牌酶、AB I3100遗传分析仪、9700PC… 相似文献
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1 案例资料1998年11月14日,广州某郊市一发廊发生一起入屋抢劫轮奸案.案发后当地警方先后送检了受害者梁某、沈某的阴道拭子和血纱,以及7名嫌疑人的血.提取梁某、沈某阴道拭子上的精子DNA和受害人、嫌疑人血DNA,用荧光标记复合扩增STR试剂盒Amp Fi STR Profiler Plus Amplification Kit(美国PE公司),用PE377全自动测序仪电泳检测分析(操作方法按文献),证实梁某阴道拭子上含有1人精斑,沈某阴道拭子上含有至少2人的混合精斑,同时排除了7名嫌疑人.1999年5月25日,该郊市另一发廊又发生一起入屋抢劫轮奸案,事后当地警方很快送检了受害者谭某的阴道拭子和血纱,以及3名嫌疑人的血.提取谭某阴道拭子上的精子DNA和受害人、嫌疑人血DNA,用上述拭剂盒扩增,经检测分析各样品的基因型,发现谭某阴道拭子上含有至少2人的混合精斑,但排除含 相似文献
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混合斑的精子DNA提取是法医物证DNA分析中的一种重要技术,能否从中成功地提取有效的模板DNA,将最终决定能否将罪犯绳之以法。在实际检案中,当遇到手纸中的混合斑时,由于手纸遇水后纤维分解,形成糊状物质,导致混合斑与载体难以分离去除;有些手纸中含有漂染剂,对PCR扩增有抑制作用。为此,手纸中混合斑的精子DNA提取是一个广泛性的难题。笔者对通用的混合斑二步提取法进行改良,有效地解决了上述难题,并在实际检案应用中取得了满意的结果。1检材与方法1.1检材日常检案中涉及的含有混合斑的手纸30份。1.2方法1.2.1DNA提取1.2.1.1常规法(1… 相似文献
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DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。 相似文献
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目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。 相似文献
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3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较 总被引:1,自引:0,他引:1
性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比… 相似文献
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笔者在强奸案件混合斑精子的DNA检验中,以差异裂解法第一步消化去除女性细胞得到精子沉淀后,采用DNA IQTM系统直接提取混合斑中精子DNA,在200余份检材的检验中获得较满意结果。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料取自本实验室日常检案积累的混合斑样本216份。主要仪器和试剂采用9700PCR扩增仪(美国ABI公司)、ABI3100型遗传分析仪(美国ABI公司)、DNA IQTM系统(Promega公司)、AmpF1STRIdentifiler试剂盒((美国ABI公司)。1.2方法1.2.1 DNA提取参照差异裂解法,经过套管离心去除女性细胞后,得到沉淀精子,加入100~200ulDNA … 相似文献
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本文用TNE缓冲液浸泡提取混合斑中的精子和阴道上皮细胞,用高效价单克隆抗A、抗B血清进行吸附,加入含2.5%鸡白蛋白的红细胞指示悬液进行红细胞粘连试验。结果,精子和阴道上皮细胞能与相应的红细胞粘连,可同时判定混合斑中精子和阴道上皮细胞的血型。 相似文献
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目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。 相似文献
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目的分析应用免疫磁珠分离技术和差异裂解法对混合样本的DNA检验效果,评价其在法医学应用中的价值。方法制备含有不同数量精细胞与阴道上皮细胞混合悬液和植绒混合斑拭子,分别采用MOSPD3抗体、SPAG8抗体免疫磁珠法及差异裂解法对样本进行检验,观察分析不同比例的混合细胞悬液,以及不同保存时间植绒混合斑拭子DNA分型的正确率。结果当混合细胞悬液内精细胞与阴道上皮细胞比例约1∶10时,免疫磁珠法的正确率明显高于差异裂解法(P0.01);当比例等于或高于1∶1时,两种方法正确率的差异无显著性意义(P0.05)。植绒拭子混合斑的免疫磁珠法正确率明显低于差异裂解法(P0.01);随混合斑保存时间的延长,差异裂解法正确率无明显下降(P0.05)。结论免疫磁珠法适用于新鲜混合样本中精细胞的分离检验,且在精细胞含量较低时优势更明显,差异裂解法较适合陈旧混合斑的分离检验。 相似文献
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混合斑中酸性磷酸酶及精子检出时限的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究探讨性生活后活体阴道内混合斑中酸性磷酸酶( ACP)及精子的检出时限。方法 采用取材、检验三盲法对 600例阴道拭子进行 ACP及精子的常规检验。结果 ACP最长检出时限 255h,平均检出时限 52h。精子最长检出时限 132h,精子平均检出时限 29h。 ACP检出例中阳性程度在(++)以上占 41.3%,精子检出例中阳性程度为每个视野 6~ 10个占 34.3%。 结论 应用混合斑中酸性磷酸酶及精子的检出时限 ,能为侦审性犯罪案件的法医学鉴定提供客观依据。 相似文献