一种与增生性间质性肺炎相联系的绵羊肺炎枝原体的分离、繁殖和特性的研究

本文报告与绵羊慢性增生性间质性肺炎相联系的一种新发现的枝原体的分离和特性的研究。实际上所有研究过的慢性受感染的羔羊的气管和支气管中只有这种病原存在,证实了以前提出的它是本病的病原的看法。建议将此菌命名为绵羊肺炎枝原体(Mycoplasma ovipneumoniae),因为它与迄今已知的各种绵羊和山羊枝原体都不相同。 绵羊枝原体的主要鉴别特征包括菌落形态、发酵葡萄糖产酸的能力,对绵羊红血球的显著溶血能力,通过代谢抑制和生长抑制试验所表现的独特的血清学特性,以及对幼年羔羊的致病力。 为了最有效地从受感染的绵羊肺脏中分离绵羊肺炎枝原体,重要的是从下呼吸道采取拭子样品。在枝气管冲洗液中曾发现一种对枝原体的生长抑制物。这种抑制物的性质尚未鉴定,但相信它是抗体。这种抑制物的存在可能是从稀释的比未稀释的肺脏悬浮液更常易分离出 枝原体的原因。补体结合反应未能从肺炎绵羊的血清中或枝气管冲洗液中检出有意义的抗体含量,不过在肺炎发病率很高的羊群的一些绵羊血清中曾发现有低度的代谢抑制活力。     

内寄生植物真菌可致绵羊发病

内寄生植物真菌可致绵羊发病国外有关资料记载，黑麦草内寄生植物真菌可引起绵羊发病。在我国南方的一些人工草场上放牧的绵羊，也有内寄生植物真菌致病的病例，但往往误诊为绵羊的脑脊髓丝虫病或传染性胸膜肺炎而延误治疗。病原该病致病病原是一种名为ｌｏｌｉｕｍｅｎｄ...     

绵羊肺炎支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

本研究旨在建立一种灵敏性高、特异性强的检测绵羊肺炎支原体的TaqMan实时荧光定量PCR方法。根据GenBank上已发表的绵羊肺炎支原体HSP70基因序列设计引物和探针,构建标准阳性质粒,建立实时荧光定量PCR方法。试验结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=1.000,斜率S=-3.334,扩增效率E=99.5%;敏感性高,可以检测出的最低样品浓度为1×101copies/L,是普通PCR的100倍;特异性强,能有效区分巴氏杆菌等9种病原;重复性好,组内、组间的Ct值变异系数均小于2%。运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法可简便、准确地鉴定绵羊肺炎支原体。     

绵羊肺炎霉形体病几种诊断方法的比较

绵羊肺炎霉形体病自1963年由Mackay确诊以来,相继在许多国家或地区流行。我国四川、云南和宁夏等省区也有本病发生的报道。数十年来,对该病病原的研究资料较多,并已由Johs(1986)进行了评述。有关该病的诊断方法有免疫荧光(Ro-     

猪鼻枝原体的病原性

引言 猪鼻枝原体(Mycoplasma hyohinis)是一种能引起猪多发性浆膜炎、关节炎及胸膜肺炎等病症的致病性枝原体。最初Carler和Mckay(1953)从传染性萎缩性鼻炎的呼吸道分离到这种枝原体。Switzer(1953、1954、1955)从萎缩性的和正常猪的鼻甲骨分离到,并详细叙述了这种分离物的生物学特征,建议采用猪鼻枝原体(Mycoplasma hyorhinis)来命名。在英国和美国的慢性猪肺炎中,50％以上存在这种枝原体,(Whittles     

聚合酶链反应检测绵羊肺炎霉形体的研究

参照基因库中已发表的绵羊肺炎霉形体Y98株的 1 6SrDNA序列 ,设计合成了 1对引物 ,建立了聚合酶链反应 (PCR)检测绵羊肺炎霉形体的方法。结果显示 ,所建立的PCR能特异扩增绵羊肺炎霉形体的DNA ,而对照的菌株均为阴性 ;其敏感性可达 1pg。经对绵羊肺炎霉形体分离株HD 1的扩增产物进行测序 ,并与绵羊肺炎霉形体标准株Y98的 1 6SrDNA序列进行比较 ,发现有 6个碱基的差异     

绵羊肺炎支原体荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立快速检测绵羊肺炎支原体的荧光定量PCR方法,根据EF-Tu基因序列设计合成引物,构建含有EF-Tu基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,检验该方法的特异性、敏感性和重复性,并用于临床样本的检测。结果显示,本研究建立的方法能特异性扩增绵羊肺炎支原体,与其他病原无交叉反应,最低检测限为5 copies/L,在5×104~5×109稀释度范围内具有良好的线性关系(r2=0.996),检测的批内和批间变异系数均小于5%。对临床肺组织样本中绵羊肺炎支原体的检出率(105/134,78%)与基于P113基因的q RT-PCR方法的相符,而对鼻腔棉拭子样本的检出率(27/50,54%)略高于后者(25/50,50%)。对人工感染绵羊肺炎支原体山羊肺的病变部位、病健交界部位和无明显病变部位的检出率分别为1/6、6/6和4/6,确定肺的病健交界部位为最佳采样部位。对采自四川、新疆、青海的439份表观健康羊肺绵羊肺炎支原体的平均检出率分别为48%(61/126)、63%(103/163)和75%(113/150),提示受检羊群仍存在严重的绵羊肺炎支原体带菌感染情况。该方法的建立对绵羊肺炎支原体感染的监测与快速诊断有重要意义。     

动物衣原体病对人类健康的潜在威胁

动物衣原体病是由鹦鹉衣原体引起的一种人兽共患传染病。早在本世纪以前,人们已观察到一种由鹦鹉传染给人的死亡率较高的肺炎,当初,人们把这种病称为“肺炎伤寒”(Pneumotyphus)。现已证实,人的鹦鹉衣原体感染不仅与鹦鹉有关,而且也涉及其它鸟类、家禽和哺乳动物。(一)哺乳动物源衣原体对人类健康的威胁迄今已发现人的哺乳动物源衣原体感染占有一定的比例,如绵羊源鹦鹉衣原体对人的感染有一些较严重的报道,包括与绵羊有关的衣原体性脑膜炎、结膜炎、肺炎和怀孕妇女的流产(Johson,1983)。     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——病原诊断

于1987年从甘肃省陇东类山羊传染性胸膜肺炎流行区采取临床可疑的山羊、绵羊病料,进行了一系列病原诊断研究,结果:排除了相关致病因素,如梅迪,维士那,山羊关节炎脑炎(CAE),衣原体及相关致病菌感染和寄生虫侵袭;最终从21例山羊6/6例绵羊病变肺组织中培养分离出支原体13株/4株,分菌率均在60％以上,分离株经初步鉴定后,经英国国际支原体鉴定中心(NCTC)最终鉴定均为绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia);以分离株人工感染健康山羊7只,绵羊3只,结果6/7的山羊,2/3的绵羊于接种后第14天始形成与自然病例相似的病变,并以7/7山羊,2/3绵羊病变肺组织中收回原接种物;以琼脂双扩散,试管凝集反应及间接血球凝集试验进行抗原性研究结果证明,分离株与绵羊肺炎支原体标准株(y—98)具有共同抗原性。从而不仅首次确证了该地本病是由绵羊肺炎支原体所致,且对山羊和绵羊都具有很高的感染率和较强的致病性。     

绵羊肺炎支原体特异性分子检测靶标的筛选与应用

本文旨在筛选出特异性的绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)分子检测靶标,利用全基因组BLASTn筛选出绵羊肺炎支原体特异性蛋白基因序列,再运用NCBI线上Primer BLAST程序,选择G/C含量较高的4个靶基因设计11对引物,通过引物筛选和反应条件的优化,成功筛选到一对针对靶标728序列的特异性引物728 2F/2R。用该引物对53株绵羊肺炎支原体菌株、15株其它支原体和18株常见反刍动物细菌的DNA进行扩增,并对27份临床样品进行检测。结果显示,7282F/2R只能从绵羊肺炎支原体菌株DNA扩增出288 bp目的片段,且具有良好的敏感性,与已发表方法相比特异性更好,更适合于绵羊肺炎支原体检测。     

绵羊和山羊嗜血支原体感染的检测及分子鉴定

为了解绵羊和山羊嗜血支原体在甘肃、辽宁、内蒙古、宁夏、重庆、海南等地的流行状况及病原种类,利用瑞氏染色方法和已发表的嗜血支原体通用qPCR方法,对2011—2015年间采自上述地区的绵羊和山羊血液样品346份进行了检测,并对部分qPCR阳性样品扩增产物进行了测序和序列分析。结果,在甘肃、内蒙古的绵羊样品中和重庆、海南的山羊样品中检出嗜血支原体;其中,瑞氏染色方法的绵羊样品阳性率为12.45%(33/265),山羊样品阳性率为24.69%(20/81);qPCR绵羊阳性率为22.26%(59/265),山羊阳性率为37.04%(30/81)。对部分阳性样品的qPCR产物进行的序列分析结果显示,绵羊样品中5/7份为绵羊支原体和绵羊嗜血支原体待定种共同感染,1/7为绵羊支原体感染,1/7为绵羊嗜血支原体待定种感染;山羊样品中,2/3为绵羊支原体感染,1/3为绵羊嗜血支原体待定种感染。本文在我国首次证实山羊和绵羊中流行绵羊支原体和绵羊嗜血支原体待定种两种不同的嗜血支原体,且绵羊中存在两种嗜血支原体共同感染的情况。     

枝原体的生物学性状

(一)溶血性 枝原体一般都有溶解豚鼠血球的性质,特别是肺炎枝原体有很强的溶血能力。在含3％血球的琼脂培养后,于冰箱中放置一夜,即在菌落周围出现溶血。肺炎枝原体和肺枝原体等为B型完全溶血,其他型枝原体溶血反应迟缓,而且是d型不完全溶血。使用的血球以豚鼠的最好,家兔的最差。溶血素是向琼脂扩散的毒素,是能通过透析膜的低分子物质。在氧分压下降和菌量生长过多时不能发生溶血反应,因此,氧化反应与溶血反应是有某些关联的。经56℃加热或用紫外线杀死的枝原体无溶血能力。最近弄清了溶血球就是过氧化     

甘肃省羊传染性胸膜肺炎血清学调查

由羊肺炎支原体（Myc－oplasmaOvipneumonia）引起的绵羊、山羊传染性胸膜肺炎已成为世界性分布的一种重要传染病。本病能感染不同年龄、性别的绵羊、山羊。在我国陕西、青海、宁夏、四川、云南、辽宁等省均有发生本病的报道。1987年在甘肃省也首次确定了该病的存在。为了解本病在甘肃各地羊群的感染情况和为本病的防治提供依据，我们于1991年以来，对甘肃省的酒泉、阿克塞、金塔、张掖、皇城羊场、天祝、古浪、景泰、漳县、环县、合水、华池等县（市）进行了羊传染性胸膜肺炎血清学调查，现将结果报告如下。（一）材料和方法1.血清:被检血…     

绵羊肺腺瘤病毒套式RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)基因组序列,应用Oligo6.0软件设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为467bp,内部引物的扩增片段大小为214bp,建立了一种快速检测JSRV的套式RT-PCR检测方法。试验结果显示,该检测方法与同属的几种绵羊易感的病毒均无交叉反应,比普通RT-PCR方法敏感性高,具有重复性好、特异性强、敏感性高等优点,可以准确快速地检测出极低含量的JSRV病原,为绵羊肺腺瘤病的快速诊断、净化及深入研究奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体免疫蛋白质组学的初步研究

利用双向电泳及免疫印迹方法对绵羊肺炎支原体MoGH3-3分离株的抗原蛋白进行筛选,并采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱对其进行初步鉴定。结果,共筛选到MoGH3-3株3个主要抗原蛋白点,其中2个被鉴定为延伸因子(elongation factor Tu,EF-Tu),1个为丙酮酸脱氢酶E1-a亚单位(pyruvate dehydrogenase E1-alpha subunit,PDHA)。结果表明,EF-Tu及PDHA是绵羊肺炎支原体主要的抗原蛋白,这为下一步绵羊支原体肺炎基因工程疫苗的研制提供了靶标。     

制取牛粘膜病病毒和绵羊边界病病毒的试样供电镜检验

牛病毒性腹泻──粘膜病(简称BVD-MD)是欧美各国奶牛和肉牛群的常发病,近年测知,我国也有少数地区存在本病。其病原属RNA病毒,对牛粘膜病毒或牛病毒性腹泻病毒、绵羊边界病病毒和猪瘟病毒已进行分类,同属于披盖病毒科(Togaviridae)的瘟疫病毒属(genus Pestvirus)。 病毒在动物体产生中和抗体和补体结合抗体;在琼脂扩散系统中,BVD-MD病毒抗原和猪瘟血清或绵羊边界病血清产生沉淀反应,所以说,三种病毒有共同的可溶性沉淀抗体。还     

山羊支原体山羊肺炎亚种M1601株外膜蛋白的免疫原性

通过免疫印迹试验对山羊支原体山羊肺炎亚种M1601株外膜蛋白及M1601株全菌蛋白进行了免疫原性分析,并与绵羊肺炎支原体抗血清和丝状支原体山羊亚种抗血清进行了比较,以筛选M1601株特异性的外膜蛋白。结果表明,存在于外膜蛋白中的分子质量分别为60.0和49.7 ku的蛋白是其主要的免疫原性蛋白,也是山羊支原体山羊肺炎亚种区别于丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体的主要特异性抗原,这一结论为山羊传染性胸膜肺炎的诊断和疫苗研制奠定了良好的理论基础。     

绵羊肺炎支原体P113蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫荧光检测中的应用研究

P113蛋白是绵羊肺炎支原体重要的免疫原。为了制备针对P113蛋白的单克隆抗体,本研究以原核表达的重组P113蛋白免疫小鼠,制备了1株P113蛋白的特异性单克隆抗体C426,纯化后用异硫氰酸荧光素标记单克隆抗体,并建立了绵羊肺炎支原体的免疫荧光检测技术。结果显示,该株单克隆抗体的ELISA效价为1∶128 000,亚型为IgG2b,轻链类型为κ型,并具有良好的特异性。所建立的免疫荧光检测方法特异性强、灵敏度高,其对绵羊肺炎支原体培养物的检测下限为100 CCU/m L。该方法可以从感染动物的鼻拭子样品或肺组织中成功检测到绵羊肺炎支原体,与PCR方法的阳性符合率为86.25%,明显高于支原体分离培养的方法。本研究制备的P113蛋白单克隆抗体以及免疫荧光技术不仅为绵羊肺炎支原体感染的诊断提供了新的手段,同时为进一步研究P113的功能提供了良好的工具。     

浅谈动物恶性卡他热的血清学诊断

恶性卡他热(MCF)为世界范围发生的一种动物传染病,我国也有疑似恶性卡他热病的报道。该病主要危害牛,多呈散在发生,发病率不高,但致死率很高。目前世界上把恶性卡他热分成两种,一种是角马源恶性卡他热,也称作“角马关联”型恶性卡他热,主要存在于非洲;另一种为绵羊源恶性卡他热,也称为“绵羊关联”型恶性卡他热,主要分布在欧、美、亚和大洋洲。现已明确“角马关联”型恶性卡他热的病原是一种疱疹病毒(牛疱疹病毒3型),而“绵羊关联”型恶性卡他热的病原至今仍不清楚。关于恶性卡他热的诊断,国内外仍主要基于该病特征性的临床症状,剖检病变及病理组织学变化。国外虽有许多学者企图利用血清学诊断确定恶性卡他热,但可供使用的成熟方法却很少。在我国有关恶性卡他热血清学诊断方面的研究甚少,至今未见报道。下面简单介绍国外对恶性卡他热血清学诊断研究的情况。     

绵羊致病性乳房炎链球菌的分离试验

致病性乳房炎链球菌主要包括无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌,这三种链球菌在形态上相似,其中牛乳房炎的病原体致病性较强,但无乳链球菌也可引起绵羊的乳房炎,不过病例少见,据国外资料报道;停乳链球菌可致羔羊多发性关节炎。 近几年来,在红星一牧场绵羊中流行一种以产羔母羊乳汁稀薄和产后无乳为特征的慢性传染病,给养羊事业带来一定的损失。为此,我们对该病病原进行了较为全面的调查研究,现将分离鉴定结果介绍如下。