鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病，经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ ＧＩＢ） ，并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 株，ＨＡ 效价为２１２，ＥＩＤ５０ 为１０ －６．８１／０ ．２ ｍ Ｌ。病毒干扰试验中，ＩＢＶＪＢ９７０２ ＋ ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ 效价为２４～６ ，ＬａＳｏｔａ 接种鸡胚ＨＡ 效价为２１０～１１ ；用ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 病毒液１∶１０ 稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ１２０ 弱毒疫苗免疫雏鸡，发病８／１０ ，死亡３／１０ 。     

牛O型口蹄疫灭活苗制苗毒种的稳定性及其免疫原性监测

用Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ法测定牛Ｏ型口蹄疫（ＦＭＤ）制苗毒种ＯＡ／５８（Ｆ４９／９１）对牛的半数最小感染量（ＭＩＤ＿（５０））为１０￣（－８．７７）／０．１ｍｌ，与ＯＡ／５８（Ｆ３０／６６）一致，表明毒种对一的毒力稳定。毒种适应制苗细胞ＢＨＫ—２１单层在７～２０代内收获的细胞毒具有稳定的蚀斑特性和感染性滴度。不同代数病毒（Ｆ１０、Ｆ１５、Ｆ２０）蚀斑克隆株的大斑、小斑株按疫苗制造与检验试行规程制成双相油佐剂疫苗免疫豚鼠，２８天后用强毒攻击，结呆Ｆ１０６／８保护，Ｆ１５６／８保护，Ｆ２０７／８保护，证明在试验代数内制苗毒种对豚鼠具有良好、稳定的免疫原性。对强毒攻击７天后的豚鼠血清中和抗体分析表明，此时血清中和效价与免疫豚鼠抗强毒感染的保护性之间无对应关系。     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ＿（１１）／７５ｃ，ＳＢ＿１，ＨＶＴ＿（ＦＣ１２６）三个马立克氏病毒株分别免疫Ｂａｌ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒（ＭＤＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ＿３、ＦＭ＿（１７）、ＦＭ＿（２４）、ＦＭ＿（２８）、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（４５）、ＦＭ＿（６２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５４）、ＦＭ＿（１５９）．这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０￣３～１０￣５，其中ＦＭ＿３、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（１５９）等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，腹水抗体效价为１０￣３～１０￣５。ＦＭ＿（１５０）识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿３、ＦＭ＿１７识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５７）识别血清Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４５）识别血清Ｉ和Ⅱ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（２４）识别血清Ⅱ型和Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４２）能识别三个血清型ＭＤＶ。这些单克隆抗体可用于ＭＤ早期诊断，和疫苗质量的监测。     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

鸡用天然缓释免疫增强剂的研究──天然免疫增效药物的筛选

选用黄芪等１０种天然药物，将２６４只８日龄蛋用雏鸡分为１１组，每组２４只。１０个试验组，每组饲料中添加１种天然药物。在鸡３，５，７和１０周龄时检测Ｔ淋巴细胞Ｅ花环（ＥＲＦＣ）形成率、Ｂ淋巴细胞花环（ＥＡＣ）形成率、外周血淋巴细胞转化率、酸性α醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）阳性率，结果证明所选用的药物程度不同地增强了鸡的免疫功能。从中筛选出黄芪等７种免疫增效作用较强的药物。     

Vero-2和MA-104细胞系染色体组型分析与致癌─致瘤性研究——在犬五联疫苗制备中替代BHK-21细胞系细胞株的筛选和检定

在用纯化３代的猫肾原代细胞（ＦＫＣ）和犬肾原代细胞（ＣＫＣ）皮下接种裸鼠无致癌致瘤性,以人类子宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）超二倍体ＫＢ株、Ｘ株及超二倍体和亚四倍体ＮＭ２０／Ｘ株皮下接种裸鼠产生进行性恶性肿瘤比率分别为１０／１０,２５／２５和５／５的前提下,非洲绿猴肾细胞系亚二倍体（Ｖｅｒｏ２）ＪＣ株５～１９代和超二倍体ＹＡ株１２～１８代分别皮下接种２０和１０只裸鼠,均未产生肿瘤,恒河猴肾细胞系亚四倍体（ＭＡ１０４）ＪＣ株４代皮下接种５只裸鼠亦未产生肿瘤。不同株的Ｈｅｌａ和地鼠肾细胞系（ＢＨＫ２１）在３．３ｇ／Ｌ琼脂中均具有抛锚独立生长特性,并在终浓度３．１２５～２００ｍｇ／ｍＬ植物凝集素（ＰＨＡ）作用下出现凝集现象,而ＦＫＣ、ＣＫＣ及Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株、ＹＡ株既不具有抛锚独立生长特性,在不同浓度ＰＨＡ作用下也不发生凝集,符合非肿瘤源性细胞的特性。因此,Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株可用作病毒疫苗毒株的传代培养,而Ｖｅｒｏ２细胞系ＹＡ株和ＭＡ１０４细胞系ＪＣ株则不适宜。     

杆状病毒表达的猪传染性胃肠炎病毒钉状糖蛋白在其血清学诊断上的应用

利用从猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ｍｉｌｅｒ株（Ｍ５Ｃ）克隆建立的一株重组杆状病毒（Ｒ２－２）表达的重组ＴＧＥＶ钉状糖蛋白（Ｓ），建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来检测猪群抗ＴＧＥＶ抗体。试验表明，用重组病毒Ｒ２－２接种ｓｆ９细胞（ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）所表达的重组蛋白量在接种后第７２ｈ达到最高值；该重组蛋白能与抗ＴＧＥＶＳ蛋白Ａ位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ＥＬＩＳＡ检测６８份来自无ＴＧＥＶ感染或ＴＧＥＶ（Ｐｕｒｄｕｅｌ５）免疫的仔猪或母猪血清，结果与ＴＧＥＶ蚀斑减数试验完全相符，灵敏度和特异性均为１００％。同时检测来自ＴＧＥＶ试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清６２７份，阳性检出率分别为８２．６１％、６１．６２％、５８．３３％和２９．１０％；用中和试验（微量中和试验或病毒蚀斑减数试验）检测的ＴＧＥ血清抗体阳性率分别为８０．８７％、５９．６０％、５６．１１％和３０．６０％，两种方法对抗ＴＧＥＶ抗体的检出率没有显著差异。     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。     

FRIENDLY EXCHANGES

ＦＲＩＥＮＤＬＹＥＸＣＨＡＮＧＥＳ￥（ＪａｎｕａｒｙｔｏＪｕｎｅ，１９９４）Ｉｎ－ｃｏｍｉｎｇＶｉｓｉｔｓＪａｎｕａｒｙ＊Ａ３－ｍｅｍｂｅｒｄｅｌｅｇａｔｉｏｎｆｒｏｍＪａｐａｎＴａｋｅｏＨｉｒａｔａＤａｎｃｅＡｃａｄｅｍｙ＊Ａ５－ｍｅｍｂｅｒｄｅｌ...     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂支瘤细胞（３Ａ＿６、３Ｂ＿８、３Ｄ＿５）。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ＿１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

鸡病毒性关节炎病毒的提纯结构蛋白及其免疫活性分析

采用差速离心和蔗糖递度超速离心法提纯了鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｈ＿（９３０７）株，并用ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳技术分析其结构蛋白，该病毒主要由８条多肽组成（ＶＰ＿１～ＶＰ＿８），它们的分子量分别是１４５、１３０、１１５、７２、７０、６５、４２、３９ＫＤ。用Ｗｅｓｔｅｒｎｈｌｏｔｔｉｎｇ免疫印迹技术分析这些多肽的免疫活性，与同源病毒株抗血清出现５条可见的反应带，分别是ＶＰ＿１、ＶＰ＿２、ＶＰ＿４、ＶＰ＿５和ＶＰ＿７；与异源病毒抗血清反应只出现两条可见的阳性反应带，分别是ＶＰ＿１和ＶＰ＿２。     

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。     

弓形虫病免疫的研究─—弓形虫GJS和QHO株在不同浓度血清培养条件下的生物学特性观测

在用低浓度犊牛血清（２．５％）和不含血清的１６４０培养液培养的ＢＨＫ－２１细胞中，接种毒力不同的弓形虫ＧＪＳ和ＱＨＪＯ株，于５％ＣＯ＿２３７℃培养。结果两虫株的生物学特性存在一定差异；在含２．５％血清培养液培养的细胞中，虫体繁殖显示两个高峰，在无血清条件下只有一个高峰值，ＢＨＫ－２１细胞在含虫、不含虫及含血清和不含血清条件下均只有一个高峰值；两虫株培养上清蛋白含量均以递增方式增加，至１９０小时蛋白含量牧最初２小时分别增加１．９３、２．５２倍，对照ＢＨＫ－２１细胞上清蛋白无明显变化；培养上清虫体分泌排泄抗原（Ｅ／ＳＡ）滴度随培养时间的延长而上升，ＢＨＫ－２１对照上清呈阴性。     

鸡传染性法氏囊病中和抗体动态水平监测及其应用的研究

用鸡胚成纤维细胞的微量血清中和（ＳＮ）试验跟踪抽检了同群两种不同免疫程序的１２组次共１４２只鸡的传染性囊病（ＩＢＤ）中和抗体滴度。结果表明，该群１日龄雏鸡的母源抗体水平高达８．３ｌｏｇ＿２并且较整齐，雏鸡母源抗体半衰期约为４．３～５．０天，用ＳＮ免疫监测不同的免疫程序及其实际效果，说明在中和抗体滴度降１６．０～６．５ｌｏｇ＿２（１５～１８日龄）时首免效果最好。该方法准确且敏感性高，可用于鸡群免疫监测，指导合理的免疫程序。     

香菇多糖对vAMV感染雏鸡SOD活性的影响

３日龄肉用ＡＡ雏鸡人工感染禽成髓细胞性白血病强毒（ｖＡＭＶ）后，禽成髓细胞性白血病（ＡＭＢ）的发病率达８６．７％，病死率为７０．０％，与健康雏鸡相比，脾脏、胸腺、法氏囊、心脏、肝脏、肾脏及性腺的总超氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）和锰超氧化物歧化酶（Ｍｎ－ＳＯＤ）的活性于９日龄时明显升高（Ｐ＜０．０１），于１６日龄后则显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）而铜超氧化物歧化酶（Ｃｕ－ＳＯＤ）和锌超氧化物歧化酶（Ｚｎ－ＳＯＤ）的活性无显著变化（Ｐ＞０．０５）。ｖＡＭＶ感染雏鸡注射香菇多糖，ＡＭＢ发病率为６７．５％，病死率为５５．０％。同对照组相比，感染后注射香菇多糖组的Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ及Ｃｕ－ＳＯＤ的活性初期均显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），中、后期变化不显著（Ｐ＞０．０５）。     

新城疫V_4株弱毒疫苗的研究─—口服免疫剂量免疫期及保存期试验

本实验结果表明：新城疫Ｖ_４株弱毒苗的最小口服免疫剂量小于１０￣（－５）×０．５ｍｌ，Ｖ_４株弱毒冻干苗在室温（１８～３０℃）避光可保存１９个月以上；Ｖ_４株弱毒湿苗在室温（１８～３０℃）避光可保存５１天对鸡胚感染性不变；Ｖ_４株弱毒苗１次口服免疫的免疫期可达７个月以上。     

鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

在山东省从死亡率达７２％、混合感染多种病原微生物的海兰白蛋鸡和艾维茵肉鸡群中分离到３株鸡贫血病毒（ＣＡＶ），这些毒株耐体积分数５０％氯仿和７０℃水浴１５ｍｉｎ，能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞内增殖。用分离的细胞毒接种１日龄ＳＰＦ鸡呈现典型的鸡传染性贫血特征性的临床症状和病理变化；用间接免疫荧光检查感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞涂片和鸡组织触片，可见特异的核内荧光。分离毒株能被ＣＡＶ－ＴＫ５８０３株抗血清所中和；５周龄ＳＰＦ鸡接种分离细胞毒可产生ＣＡＶ抗体；电子显微镜观察，分离毒株ＭＳＢ１细胞培养物中有大量２０ｎｍ左右的病毒粒子。应用特异性ＰＣＲ引物可扩增到预计长度的病毒核酸片段，进一步证实分离株为ＣＡＶ。     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。