抗人N单克隆抗体的制备及其特性的研究

用ON型人红细胞免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌IgM类抗人N单克隆抗体杂交瘤细胞株(ON_1D_3)。其培养上清液抗体效价为128～256,诱生小鼠腹水的抗体效价为8192;与Panel A红细胞反应呈抗N特异性;检测273名成人红细胞,只特异性凝集N(?)MN型人红细胞,不凝集M型红细胞。与猴等9种动物红细胞无交叉反应;酶修饰试验结果表明,ON_1D_3识别的抗原决定簇是唾液酸依赖性的。     

单克隆抗M、抗N抗体的研制及初步应用

用人血型糖蛋白 A 和人红细胞分别免疫 BALB/C 小鼠。用被免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,在37℃、5%二氧化碳培养箱中孵育10～15天,然后用 OM 和 ON 型指示红细胞分别检测培养上清液的凝集情况,筛选出能分泌高特异性和高效价抗 M 和抗 N 抗体的细胞株,并建立了 GM_4H3、GM_4H_4、N_2A_3和 N_2D_(10)细胞株。这些细胞株可持续分泌免疫球蛋白 G 类抗 M、抗 N 抗体。应用这些抗体,通过血凝法、解离法和 ELISA 斑点法,可进行血及血痕的 MN 分型。在血型检验中,优于多克隆抗 M、抗N 血清。     

人类A、B抗原单克隆抗体的研制和初步应用

作者用人类A、B型红细胞及A、B型分泌型唾液免疫8周龄的BALB/C小鼠,用经免疫的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,用血凝法筛选出分泌抗A抗体和抗B抗体的细胞株各3株。经一年多的传代,仍然能稳定地分泌抗A、抗B抗体,抗体特异性专一,培养上清液效价能达到2048倍,并初步应用于血液及体液(斑)的检验。     

抗Le~a和抗Le~b血清的研制

利用进口抗Le~a、Le~b血清筛选OLe(a+b-)和OLe(a-b+)型人,测定其唾液中Le~a和Le~b型物质含量,择其型物质含量高者唾液,用家兔和山羊免疫,合格后采全血,分离血清,用O、A、B型红细胞吸收、除去种属及α和β等凝集素。再用O型Le非相应型红细胞吸收,精制出含不完全抗体的抗Le~a和抗Le~b血清。该血清对Le相应型红细胞均产生明显凝集反应,而不发生非特异的交叉凝集反应。经过盲测鉴定,17份红细胞的Lewis型测定完全准确。制备的抗Le~a和抗Le~b血清在效价和特异性方面达到了引进的同种血清水平,填补了我国抗Le~a、抗Le~b血清制造的空白。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研制及初步应用

本研究在用人A型红细胞悬液免疫BaIb/C小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞融合屡次失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株:3B_2、2H_2、8C_3细胞株。这些杂交瘤细胞可持续分泌抗A单克隆IgM类抗体。     

抗人精特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定

用正常人精液免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_2/O融合,得到6株分泌抗人精液单抗的杂交瘤。对其中一株命名为A_(10)C_6的杂交瘤特性,用免疫双扩散鉴定为IgG_1亚类,免疫组化证实它主要作用于人精子,ELISA(双抗体夹心法)证实它只与人精液起反应,而对牛、猪精液,人乳及A、B、O红细胞表面抗原物不起反应,证明它具有较高的特异性,有一定的应用价值。     

特异性抗人白蛋白血清制备

用乙基乙酰胺修饰的人血清白蛋白吸收免抗人白蛋白血清,可制威特异性极高的抗人白蛋白血清。用该血清和三氯化铬、人血清白蛋白包被的O型红细胞作指示细胞,做凝集抑制试验,能区别人血(斑)和包括灵长类在内的各种动物血(斑)。     

用浓缩唾液制备抗A、抗B血清的吸收精制方法

<正> 用浓缩1/2容量的ASe和BSe人唾液,采用多用途、多部位,并逐渐增大剂量的方法免疫大耳白兔,每4次为一个免疫程,可制备出1024倍以上的抗A、抗B血清.但所得抗血清除有抗A、抗B凝集素外,还含有大量与各型红细胞发生凝集的非特异性凝集素.经反复试验,先用人血粉吸收,然后用少量唾液吸收,可以除去非特异性凝集素,制备出特异性好的抗A、抗B血清,具体方法如下.     

单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞的研制及应用

<正> 本文报道根据反向间接血凝(RPHA)原理,用单克隆抗A、抗B、抗H抗体分别在合适的pH值醋酸盐缓冲液中,致敏醛化人“O”型红细胞,制得单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞。用来检验人体液斑的ABH血型物质。单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞对相应分泌型人唾液的凝集效价为8192倍、4096倍     

分泌抗人精子单克隆抗体的鼠—鼠杂交瘤

<正> 为了获得可用于检验性犯罪案件中人类精斑所需的特异性抗人精液血清,我们建立了生产抗人精子单克隆抗体(SMAB)的杂交瘤技术。将BALB/C小鼠的Sp2/o-Ag14骨髓瘤细胞与用洗涤人精子免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合。192个融合孔中,171孔有杂交瘤细胞生     

抗H单克隆抗体与抗H血清在法医检验应用中的比较

<正> 作者用抗H单克隆抗体和抗H多克隆血清与红细胞H抗原的亲合力和不同检材抗原的检出效果进行了比较,现将结果报告如下.1.亲合力的测定比较分别取HMcAb和抗HPcAb各一滴置于载玻片上与等量的10%O型红细胞生理盐水悬浮液混合,室温下肉眼观察红细胞开始凝集的时间和凝集成1mm凝集块的时间.(表1).     

分泌抗人红细胞膜单克隆抗体细胞株的建立

以人的红细胞膜为抗原，采用选择性免疫抑制的程序，免疫BALB／C小鼠。经免疫的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝法筛选出3株分泌抗人红细胞膜种属特异性单克隆抗体的杂交瘤，即M1A7C4．M3A5B7和M3D9F1。连续传代2个月及复苏冻存半年的杂交瘤，仍能稳定地分泌抗人红细胞膜单克隆抗体。初步鉴定证明：该抗体具有稳定的种属特异性，可鉴别人与其它动物，特别是猴的红细胞，不与己知的血型特异性成分交叉，可凝集成人及脐带血的红细胞。     

抗人红细胞膜种属特异性单克隆抗体的制备──选择性杀伤免疫活性细胞法

常规抗体制备技术所获得的抗体，不能鉴别结构差异甚微的抗原，本文用环磷酰胺做为免疫抑制剂，诱导小鼠对猴的红细胞膜的免疫耐受；随后，用人的红细胞免疫小鼠制备单克隆抗体（选择性杀伤免疫活性细胞法）。成功地获得了三株分泌抗火红细胞膜种属特异性单克隆抗体的杂交瘤。与常规免疫程序比较，该方法提高了抗体的特异性。经鉴定，这三株抗体均具有良好的种属特异性，可鉴别人和猴等25种动物的血。     

乙醚洗脱法制备高效价抗A、抗B血清

ABO 血型检验中通常采用效价在1:128～1:256的标准血清与检材中的抗原物质吸附。以此用“吸收法”、“热解离法”检验血型。但遇到抗原物质较弱的检材(如毛发、非分泌型的分泌物)时则需用高效价血清来检验。笔者采用 Rubin 乙醚洗脱法获得了高效价血清。1 材料与方法1.1 红细胞膜碎片的制备取已知 A、B 型的多份健康人全血,用生理盐水洗3次。将 A、B 型红细胞分别置于塑料试管     

保存不同期限抗M和抗N抗血清的检测

笔者观察了从1976年以来本研究室保存的抗M、抗N抗血清效价及特异性变化情况,以液体及冻干两种保存方式进行比较并检测,发现虽然有的效价、特异性发生了变化,但在同一条件下有些抗血清并不因保存年限的长短和保存方式的不同而有显著变化.甚至有的抗血清经20年保存其效价、特异性不变,实验方法及过程如下.材料和方法1.材料1976年以来冰箱冷藏保存、不同年份研制的抗M、抗N抗血清;人新鲜1%OM1、ON红血球指示细胞;凹玻板.     

抗人红细胞凝集素血清的应用研究

本文通过吸收抑制试验证明了抗人血红蛋白沉淀素血清中存在的那种能凝集人类红细胞的凝集素,实际上就是用人的红细胞免疫家兔而产生的抗人红细胞凝集素.为考察抗人红细胞凝集素血清对血痕种属的鉴识能力,本文用此抗血清作解离试验,对不同稀释度的新鲜人血痕、室内存放的久暂不一的人血痕和15种动物血痕进行了检测.得到的结果是,新鲜人血痕稀释至1/1000仍呈阳性;500例室内存放的人血痕中,存放时间在11年以下的448例全部能够准确测出;存放12-16年的52例人血痕中,有33例能够测出,余19例呈阴性;15种动物血痕全部呈阴性.     

检验A、B、H血型物质指示红细胞的研制

采用单克隆抗Ａ、抗Ｂ、抗Ｈ抗体致敏人Ｏ型红细胞 ,所获得的检验人体液 (斑 )的Ａ、Ｂ、Ｈ指示红细胞 ,为检验人体液斑迹的ＡＢＯ血型提供了一种新的试剂。在制备过程中 ,抗体载体的选定、致敏所需抗体的浓度和致敏环境的酸碱度都直接影响指示红细胞的凝集效价。经过反复实验探索 ,选择出了理想的条件。1　材料与方法1 1　人Ｏ型红细胞的醛化取多人份混合的人Ｏ型红细胞 ,用生理盐水充分洗涤后 ,将压积红细胞用 4℃预冷 ,含 0 5%戊二醛的ＰＢＳ缓冲液稀释成 10 %的悬液 ,作用 30ｍｉｎ后 ,2 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 2 0ｍｉｎ ,弃上清液 ;将压…     

大麻对正常小鼠脾淋巴细胞的免疫损伤作用

目的考察大麻对正常小鼠脾细胞的免疫损伤作用。方法采用小鼠脾细胞体外培养法,在细胞培养液中加入100～200μg/mL大麻提取物,连续培养。检测小鼠脾细胞的ConA增殖反应、脾细胞凋亡现象和脾细胞培养上清中IL-2活性;观察脾细胞超微结构的改变和脾细胞内caspase-3活性。结果与正常对照组相比较,大麻染毒组小鼠脾细胞的ConA增殖反应和培养上清中IL-2的活性均显著降低,经Hoechst 33258染色可见大量凋亡的脾细胞;琼脂糖凝胶电泳显示为DNA梯形谱带;透射电镜观察发现100μg/mL大麻组小鼠脾细胞超微结构改变程度随接触时间延长而显著;荧光定量法检测显示100μg/mL大麻染毒组脾细胞内caspase-3活性显著升高。结论大麻提取物能引起小鼠脾淋巴细胞凋亡。     

分泌抗人类血型-H抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立及初步应用

应用杂交瘤技术,建立了两株分泌抗 H 的单克隆抗体细胞株 H_(2-6)H_8和 B_(2-5)D_9。经体外培养半年以上,生物学性状稳定。两株细胞分泌的抗体属 IgM 类,特异性识别 H 型物质,与几种常见动物的红细胞无交叉反应。培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达1024倍和1.28×10~5倍,可用在中和试验、免疫斑点法中,在实际办案中应用理想。     

微量滴定板上血凝反应结果的定量分析图谱——在生物材料血型分型方面的应用

<正> 作者曾报导一种简单、重复性好的平面记数免疫分析方法,该方法可自动检测抗原包被的乳胶微球所形成的沉降式样。原方法已改进并用于吸收洗脱试验的洗脱液中的血型血凝素的定量测定。用经过乙二醛处理过的指示红细胞,在微量滴定板上滴定冼脱液中的凝集素,指示细胞使用前在5℃贮存。使