鸡毒霉形体弱毒疫苗的研究——鸡毒霉形体弱毒F株对鸡的致病性测定

用鸡毒霉形体F株新鲜培养物经点眼途径分别感染1、3和20日龄北京白鸡,以测定其对鸡的致病性。其中有部分鸡在感染F株的同时,感染前或感染后接种新城疫Ⅱ系苗或LaSota株疫苗以及鸡传染性支气管炎H_(120)株疫苗。试验结果表明:F株对各日龄鸡感染都不引起气囊病理损伤,不影响体增重;从感染鸡至少在感染后30日仍能分离到霉形体;接种新城疫疫苗和鸡传染性支气管炎疫苗不增强F株的致病作用。而感染鸡毒霉形体NB_(72)株的部分鸡出现气囊损伤。结果显示F株对鸡不致病。     

鸡毒霉形体弱毒疫苗的研究——鸡毒霉形体弱毒F株免疫效力测定

以点眼的方法,用鸡毒霉形体F株的培养物对1、3和20日龄鸡进行了免疫接种试验,经过致病性株R株的攻击,根据气囊损伤保护率计算,免疫接种鸡可获得85％以上的保护,在攻击后14天内,免疫接种鸡比对照鸡体重增加明显。免疫力持续至少7个半月以上。F株的冻干培养物仍保持着良好的免疫作用。试验结果表明:鸡毒霉形体F株是个优良的疫苗株,可用于生产鸡毒霉形体活疫苗。     

鸡感染鸡毒霉形体和滑液霉形体情况的调查

鸡毒霉形体感染和滑液霉形体感染是世界养鸡业中两种主要霉形体感染。毕丁仁(1984)自北京和南宁两地分离的49株鸡源霉形体中有27株是鸡毒霉形体,2株滑液霉形体,说明国内养鸡场中也存在着这个问题。但是国内这两种霉形体感染情况,却未见报道。作者在各兽医生物药厂监察室同志协助下,对来自20个省、市自治区的21个地区的鸡血清进行了血清学反应检测,对这种感染情况获得初步的数据。     

用表面免疫荧光法鉴定鸡源霉形体

本文报告了用表面免疫荧光法鉴定鸡源霉形体的结果。此法具有很高的特异性,能成功地用于分类鉴定的目的,并能检出培养物中混杂的霉形体种类。 (一)材料和方法 1.培养基:按Frey(1968)所介绍的配方经过适当修改后制成。 2.霉形体菌株:自国际霉形体中心Freundt教授处引进4种霉形体模式株:鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,PG31株);雏鸡霉形体(M.pullorum,CKK株);滑液霉形体(M.synoviae WVU1853株);鸡霉形体(M.gallinarum PG16株)。新分离菌株有:从北京东沙种鸡场(DS)分离3株;从北京朝阳区十八里店公社西直河大队鸡场(XZ)分离13株;从海淀区四季青公社巴沟鸡场(BG)分离23株;从广西南宁市郊区(GX) 4个鸡场分离10株,共计49株。     

鸡胚母源抗体对不同株新城疫病毒增殖的影响

鸡胚培养是增殖新城疫病毒（ＮＤＶ）最简便、有效的方法之一。ＳＰＦ鸡胚成本高、来源少，主要用于科研和种毒增殖；普通鸡胚来源广、价格便宜，适于ＮＤＶ灭活苗的大量生产。但普通鸡胚都有一定的ＮＤＶ母源抗体，疫苗毒的生产能否用普通鸡胚，关键在于鸡胚母源抗体对Ｎ...     

两株鸡传染性囊病病毒对Vero细胞的适应性研究

目前对鸡传染性囊病(IBD)的主要防制办法是进行疫苗接种,而所用的疫苗皆由鸡体组织、鸡胚或鸡胚细胞制造。由于有些病原体可通过种蛋或鸡胚垂直传播,而我国目前无特定病原(SPF)种蛋尚未被广泛应用。为此,我们用Vero细胞对两株鸡传染性囊病病毒(IBDV)的培养特性进行了比较研究,目的是探索用Vero细胞生产IBD疫苗的可能性。 (一)材料和方法 1.种毒: (1)Lukert弱毒株(简称LS):由上海农学院高熙星教授惠赠。经鸡胚成纤维细胞(CEF)     

PR8流感病毒突变株的制备及其在鸡胚上生长特性的研究

在前期发现流感病毒WSN株的NS2或NP蛋白突变使病毒在细胞上增殖能力明显提高的基础上,研究了这些突变是否会使PR8病毒效价在鸡胚上进一步提高的可行性,通过反向遗传操作技术获得了NS2E67S和NPP277A两株PR8突变病毒。经过比较突变病毒与野生病毒在鸡胚中的增殖能力,发现NS2E67S突变病毒在鸡胚上增殖后的效价与HA抗原表达量均明显提高,而NPP277A突变病毒在鸡胚上的增殖能力不及野生PR8病毒。该研究结果将对进一步研究病毒基因变异与宿主互作机制奠定基础,有可能通过NS2E67S突变病毒对改良流感疫苗具有重要的应用价值。     

犬瘟热病毒昆明分离株的生物学特性

从1只曾接种过犬瘟热弱毒疫苗但又发病的宠物犬血样中分离到1株犬瘟热病毒(CDV),命名为CDV昆明分离株(CDV-KM)。该毒株可使Vero细胞产生以细胞融合及空泡化为特征的细胞病变,病毒效价为105.8TCID50/mL或1.76×106PFU/mL,并能在鸡胚绒毛尿囊膜、鸡胚成纤维细胞及MDCK细胞上增殖。微量中和试验结果发现,自制的犬抗CDV-KM株同份血清对CDV-KM株与参考毒株CDV-Onder-stepoort的中和抗体效价即半数保护量分别为1:142和1:132,显示二者未存在明显的中和表位差异。RT-PCR、RFLP和DNA测序分析结果显示,使用参照组合引物CDV-P2/P3/P4扩增,均可得到被认为指示弱毒株特征的177bp核酸片段;而H蛋白全长基因扩增产物未见能指示野生毒株特征的NdeⅠ和SspⅠ酶切位点;H蛋白基因与Onderstepoort小空斑变异株、鸡胚适应株和大空斑变异株的核酸序列同源性分别为98.84%、98.90%和100%。表明该分离株属于疫苗基因群。     

关于鸡新城疫病免疫的讨论

根据最近对有关鸡场调查情况,鸡新城疫病对养鸡事业的威胁仍然是很严重的,这种情况应该引起各鸡场兽医人员高度重视。目前,鸡新城疫病免疫多数采用滴鼻、饮水等方法,这里有些问题值得我们共同讨论。我国鸡霉形体病(MG、MS)污染面很大,多数鸡场都有发生,几乎存在于鸡的整个呼吸系统,特别是MS可引起鸡群100％感染。在这种情况下采取滴鼻方法免疫,常常会激发鸡霉形体病而引起败血症死亡,雏鸡表现更为严重。我国现在多使用Lasota( Ⅳ系)弱毒鸡新城疫疫苗,其毒力仅次于所常用的鸡新城疫Ⅰ系     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及其N基因片段的克隆和测序

通过形态学观察、动物回归试验、鸡胚接种试验、病毒干扰试验以及血凝试验分离鉴定了1株肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。在透射电子显微镜下,病毒粒子多呈球形,直径为80~120 nm,有囊膜,表面有冠状突起。鸡胚连续盲传至第 1~2 代,开始出现死亡或出现侏儒胚;分离株可显著干扰NDV在鸡胚中的增殖;病毒尿囊液无凝血活性,但经5 g/L胰蛋白酶处理后,能够凝集10 mL/L的鸡红细胞。利用RT PCR技术对分离株的N基因进行了扩增,经克隆、序列测定和分析比较,证实分离株为肾型IBV,命名为AH3 04株。     

我国山羊传染性胸膜肺炎病原的研究

本文按Freundt等(1979)介绍的方法,较系统地鉴定了我国山东、山西和新疆三个地区分离保存的山羊传染性胸膜肺炎病原,其中2株是经过山羊传代保存的强毒株,2株是经过鸡胚保存的毒力减弱株。结果表明,上述4株病原在形态特征、培养特性、生化特性和血清学反应等方面均与丝状霉形体山羊亚种国际模式株PG,相一致。因此,我国山羊传染性胸膜肺炎病原是丝状霉形体山羊亚种(M.mycoides subsp. Capri.)。     

牛霉形体PCR检测方法的建立

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法.并对该方法进行了敏感性和特异性试验.该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性.利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法.     

鸡新城疫马立克病二联苗的研制

疫苗联合同时接种,很早以前就被成功地采用了。美国维兰公司出产的禽病疫苗及荷兰出售的禽病疫苗,为二联苗和五联苗。据此,我们引用荷兰鸡新城疫弱毒克隆株(H.Clone30)和我国现引的火鸡疮疹病毒株(HVT),分别以鸡胚和鸡胚细胞复制后,联合干燥制成二联苗,即鸡新城疫马立克病弱毒冻干二联苗。(一)材料与方法1.毒株:①H.Clone30F_6克隆株,血凝价达1:1280(鸡胚复制);②鸡马立克火鸡疙疹病毒HVT FC126干燥株;③强毒株:F_(48)E_(48);④稀释液:马立克病毒稀释液SPGA加4％血清。2.病毒的增殖与收获:(1)H.C30株:以灭菌盐水将H.C30病毒稀释成10~(-4)接种于9～10日龄的健康鸡胚(CE),每只尿囊腔接种0.2ml,于37℃温箱中继续孵育,每日检查2次。鸡胚接种后72小时以前死亡者弃     

从鸡蛋和18日龄鸡胚培养鸡毒霉形体试验

从鸡蛋和１８日龄鸡胚培养鸡毒霉形体试验郭建华陈德威张冰（中国农业大学实验动物研究所１０００９４）赵良仓（山西省畜牧兽医学校鸡毒霉形体（ＭＧ）引起的鸡的慢性呼吸道病，给养鸡业造成严重的经济损失，特别是和其他呼吸道病原体混合感染时更是如此，而且这种病难以...     

鸡新城疫和鸡支气管炎弱毒在同一鸡胚内培养生产二联苗的研究

目前国内外生产鸡新城疫(ND)、支气管炎(IB)二联苗的方法,是将两种弱毒分别在鸡胚尿囊内培养、收毒,然后再按1:1比例配制成二联苗。此法存在生产工序复杂、增加鸡胚和疫苗瓶用量的缺点。目前国内生产用鸡股大部分是用鸡新城疫免疫母鸡所产的蛋孵化的,接种NDV Lasota株等弱毒后,很少引起死亡,只能收取96小时活胚毒;而IBVH_(52) (或H_(120))株在接种鸡胚后则要求在30小时左右收取活胚毒。能否根据这两种病毒增     

内蒙古地区肉用仔鸡群中鸡毒霉形体感染情况调查及病原性研究

应用快速平板凝集试验(SPA)检测内蒙古地区有代表性的10个肉用仔鸡场鸡毒霉形体(MG),平均阳性率为52.7%;对部分阳性鸡进行霉形体分离鉴定,分得的15株霉形体中有12株为MG,将其中的1株接种24日龄肉用仔鸡,证明有很强的致病性.     

聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒霉形体 (MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点 ,分别设计合成 2对引物XZ1、XZ2 和XZ4 5、XZ4 6 ,建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2 对MG强毒株和弱毒株进行的PCR ,均可扩增出 732bp的特异性片段 ;而以另 1对引物XZ4 5、XZ4 6 对MG弱毒株进行PCR ,可扩增出 5 2 4bp的特异性片段 ,但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR ,则扩增不出任何条带。特异性试验表明 ,这 2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示 ,2对引物PCR均能检出 10 0fg的MGDNA。研究结果表明 ,通过上述 2对引物的 2次PCR扩增 ,在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株     

霉形体检测技术简介

霉形体 (Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ)是一类缺乏细胞壁的原核生物 ,最早分离自牛传染性胸膜肺炎病例 ,初称之为胸膜肺炎微生物 (ＰＰＬＯｓ)。在分类学上 ,霉形体属于原核生物界、软壁菌门、软膜体纲、霉形体目、霉形体科、霉形体属 ,在医学和兽医学上是一类重要的病原微生物 ,对人类及猪、牛、禽和试验动物等有广泛的致病性 ,主要侵害呼吸道和生殖道 ,还有关节、乳腺、眼部。霉形体个体微小 ,结构简单 ,无细胞壁 ,呈多形性形态 ,因而可通过细胞滤器。霉形体还常污染用于生产生物制剂的细胞或鸡胚 ,导致生物制剂品质下降或废弃 ,因此霉形体的检测…     

鸡传染性喉气管炎病毒安徽株AH-XY15的分离鉴定

安徽省某鸡场120日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎(ILT),根据Gen Bank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)株g D基因设计合成1对特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出1 134 bp大小片段。将病鸡喉头气管及其分泌物处理后接种SPF鸡胚,接种120 h后在绒毛尿囊膜(CAM)上形成典型痘斑,证实分离到1株鸡传染性喉气管炎病毒,命名为AH-XY15株。应用鸡胚传代的第4代病毒感染5日龄健康麻羽鸡,结果感染鸡出现了典型ILT临床症状,并能够从发病鸡喉头分泌物检出ILTV。应用PCR扩增分离株毒力基因TK基因和g B基因,序列分析显示,AH-XY15分离株TK、g B基因的核苷酸序列与国内WG株、国外USDA株以及国内疫苗株K317株同源性均在99%以上,氨基酸序列同源性在97%~99.8%之间。     

电子显微镜检测马立克氏病病毒的研究

摘要本文利用电镜技术检测了马立克氏病疫苗或其种毒复壮及传代过程中的鸡胚成纤维细胞培养物。其结果:①马立克氏病病毒是目的毒,其直径约150nm,但数量不多;②RNA肿瘤病毒(C型粒子),常见于鸡体内,我国约有90％以上的鸡体中都有此病毒;③霉形体;④细菌;⑤网状内皮增生症病毒样粒子,其直径约90nm,形态呈炸面圈样。在细胞原生质膜上以“出芽”方式释放病毒。该病毒非常容易混入马立克氏病疫苗中,通过预防接种蔓延。