四川省苍溪县暴发嗜群血蜱的研究

为了解嗜群血蜱在苍溪县的分布与危害、宿主种类、季节活动规律、群体生态形成的原因及一些生物学特性,采用宿主体检蜱法、拖旗法、布旗覆盖法采集动物体表和野外环境的蜱,对其进行了形态鉴定和药物防制试验。结果显示,苍溪县嗜群血蜱的流行面达97.4%,人感染率53.8%,动物感染率7.7%~100%;嗜群血蜱的寄生宿主有15种,主要活动期为4~9月份;吸血后引起叮咬部位皮肤丘疹、红肿、瘙痒,甚至感染溃烂,伤口愈合后痒痛和色素斑可持续数月。依据上述结果提出了防控嗜群血蜱的建议。     

微小牛蜱幼蜱cDNA表达文库的构建

为了研究微小牛蜱功能性抗原基因,从微小牛蜱(Boophilus microplus)幼蜱中提取总RNA并分离纯化mRNA。采用Oligo(dT)引物合成双链cDNA,在其两端加EcoRⅠ、HindⅢ定向接头,用Mini Column Fractionation凝胶过滤柱纯化后定向克隆到λSCREEN载体。经体外包装,成功构建了我国微小牛蜱幼蜱cDNA表达文库,铺板测定原始库容量为4.5×105PFU,扩增后的滴度为7.2×1010PFU/mL。     

四川省巴中市嗜群血蜱的调查与防治

1999年3～6月四川省巴中市的43个乡(镇)212个村严重暴发了侵袭人和畜禽的外寄生虫,经鉴定为嗜群血蜱(Haemaphysalis concinna).受虫害面积达410 km2,抽样调查牛感染率为100%、山羊100%、猪27.0%、鸡100%、鸭89.0%,感染强度1～2241只,疫区灌木丛含蜱量以人工步旗500 m为2635只.经用三氯杀螨醇、敌百虫喷雾灭蜱后,其灌木丛人工步旗500 m含蜱量降为7.3只;用双甲脒、氯菊脂涂抹患处和内服阿维菌素后,抽样调查牛感染率为6.0%、山羊8.0%、猪为0、鸡2.0%、鸭0.6%;在疫区内扑杀野兔和老鼠等供血宿主139 448只.     

青海血蜱幼蜱cDNA表达文库的构建及其保护性抗原基因的免疫学筛选

采用常规方法构建了青海血蜱幼蜱cDNA表达文库,初级文库的库容量为5.0×105PFU/mL,扩增后的库容量为8×109PFU/mL;用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清对该文库进行了免疫学筛选,对阳性噬菌体进行了亚克隆,提取质粒后转化宿主菌JM109,最终共得到幼蜱基因11个,分别命名为HqL1、HqL2、HqL3、HqL4、HqL5、HqL6、HqL7、HqL8、HqL9、HqL10、HqL11。测序分析表明,其中的6个为新基因。分析发现HqL7、HqL8、HqL9和HqL11具有较高的研究价值。     

麻点璃眼蜱生活史的研究

在实验室条件下 ,将麻点璃眼蜱 (Hyalommarufipes)幼蜱至若蜱置于牛体或兔体、成蜱置于羊体摄食 ;若蜱蜕化、饱血雌蜱产卵和孵化在 2 8℃、相对湿度约 80 %的培养箱中完成。在此条件下 ,对从甘肃省永靖县羊体获得的麻点璃眼蜱在实验室进行了生活史研究。试验证实 ,该种蜱为二宿主蜱 ,一个生活周期需要经过幼蜱、若蜱、成蜱和卵 4个发育阶段。幼蜱 5～ 7d饱血 ,蜕化为若蜱后不离开前一变态期蜱的寄生部位 ,继续在宿主体上叮咬吸血 ,经 14～ 2 4d若蜱饱血脱落。若蜱蜕化期为 18～ 63d ,平均 40 .5d。雌蜱饱血需 8～ 16d ,平均 12 .0d。雌蜱产卵前静止期 6～ 43d ,产卵期 16～ 2 9d ,平均 2 2 .5d。卵经 2 0～ 41d孵出幼蜱 ,平均 3 1.5d。该种蜱在实验室完成一个生活周期需要 91～ 2 2 6d     

长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。     

基于ITS和COⅠ基因对于我国璃眼蜱的分类研究

为了重建我国璃眼蜱的分类地位,厘清一些分类争议,首次将ITS和COⅠ作为标记基因进行璃眼蜱的分类研究。从新疆、甘肃、内蒙古等地共收集到7种璃眼蜱样品,提取样品基因组后,以ITS和COⅠ为目的基因进行扩增,将测序结果与GenBank中其他相关序列进行相似性比对及系统进化分析。结果,从样品中扩增到ITS基因序列长度为2 925~3 121 bp,COⅠ基因的长度为707 bp;基于ITS和COⅠ基因对我国璃眼蜱的分类结果显示,盾糙璃眼蜱与残缘璃眼蜱为同物异种,边缘璃眼蜱与麻点璃眼蜱为2个独立种,亚洲璃眼蜱与亚东璃眼蜱是否为亚种关系还需进一步研究证实。     

波斯锐缘蜱的形态学和分子标记特征

为了精准鉴定波斯锐缘蜱,从新疆、甘肃、河北等地采集寄生蜱,借助体视显微镜超景深系统对其形态学特征进行观察;经PCR扩增、测序获得其16S rDNA和cox1基因序列,结合GenBank数据库中参考序列,比对分析同源性并构建系统进化树。结果显示,波斯锐缘蜱幼蜱形态与其他发育阶段差异较大,其体型较小,背、腹表面光滑,无盘窝,生殖孔未形成,足3对。若蜱除生殖孔不显著外,其他形态结构均与成蜱相似。雌、雄成蜱形态学差异主要为:雌蜱生殖孔呈横裂形,雄蜱生殖孔呈半圆形。同时,在16S rDNA和cox1基因序列的邻位相接系统进化树中,波斯锐缘蜱分布于两大进化枝之一的软蜱科,同种聚类良好。结果提示:波斯锐缘蜱具有显著、易辨识、易鉴定的形态学和分子标记特征。     

森林革蜱Septin-2的原核表达及其免疫分析

为了了解森林革蜱Septin-2基因的结构、表达特征及生物学功能,通过对Septin-2基因进行克隆、原核表达及生物信息学分析,利用RT-qPCR方法检测该基因在森林革蜱不同发育时期以及不同组织间的表达丰度。结果显示,本实验室培养的森林革蜱庆阳株Septin-2基因中最大编码区为1 281 bp,可编码大小为426 aa的蛋白,主要功能区基因大小为868 bp,与森林革蜱陕西株（KAH7952853,XP＿037569269）的同一性最高,高达100%;森林革蜱Septin-2在卵巢中的表达丰度最高,且蜱饱血后的表达量明显高于饥饿状态的蜱,Septin-2基因能够表达37 ku的重组蛋白,并能被家兔抗森林革蜱血清识别。上述研究表明,Septin-2基因在蜱饱血及卵巢的发育过程中均表达。     

牛大巴贝西虫在我国的发现及其媒介蜱的确定

首次在我国发现和分离出一株牛的大巴贝西虫并确定了其媒介蜱为长角血蜱。1988年4月,从河南省卢氏县同一群黄牛体上采集到长角血蜱饱血雌虫4只和微小牛蜱饱血雌虫16只,然后分别用其第二代幼虫、若虫和成虫感染除脾小牛。结果证明长角血蜱饱血雌虫能经卵传递大巴贝西虫,第二代幼虫对牛具有感染力,若虫和成虫不能感染。微小牛蜱的幼虫、若虫和成虫各期都不能传播这种巴贝西 虫。长角血蜱幼虫感染的小牛,红细胞内的虫体稍小于双芽巴贝西虫,大于牛巴贝西虫,双梨子形虫体较宽,其量度为3.1～3.7×1.5～2.3μm,长宽指数为1.87。     

残缘璃眼蜱subolesin基因的原核表达及表达产物的反应原性分析

为研究残缘璃眼蜱subolesin基因的生物学特性以及寻找新的抗蜱和蜱传病疫苗候选抗原,根据GenBank上登录的小亚璃眼蜱subolesin基因核苷酸序列设计特异性引物,以残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱的饥饿成蜱cDNA为模板,扩增出subolesin基因的完整阅读框(ORF)。将残缘璃眼蜱subolesin基因的PCR产物经EcoRⅠ+NotⅠ双酶切后连接至表达载体pGEX-4T-1,把重组质粒pGEX-4T-1-subolesin导入感受态细胞BL21(DE3)中,在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析subolesin基因的体外表达特征;用Western-blot分析Subolesin蛋白的反应原性。结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱subolesin基因的ORF长度分别为492、492、486bp,分别编码163、163、161个氨基酸。subolesin基因序列和推导的氨基酸序列的比对结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱与参考的小亚璃眼蜱的核苷酸序列同源性分别为98%、98%、89%,氨基酸序列同源性分别为98%、99%、93%。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组残缘璃眼蜱Subolesin蛋白的分子质量为45ku,纯化的subolesin重组抗原可与抗残缘璃眼蜱全蜱血清、残缘璃眼蜱唾液腺、卵巢血清有较强的反应原性。     

蜱源抗菌多肽的研究进展

概述了蜱源抗菌多肽的来源、种类和抗菌机理方面的最新研究进展,并对其应用前景做出了展望.指出对蜱先天免疫机制以及蜱与病原相互关系的深入探讨将为蜱及蜱传疾病的控制提供新的策略.     

实验室条件下长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生物学特性

在实验室条件下,对我国北方长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生活史进行了首次观察。研究发现,行孤雌生殖的长角血蜱为三宿主蜱;在兔体完成1个世代共需106~154 d,饥饿期的幼蜱、若蜱与两性生殖的饥饿幼蜱、若蜱体重的差异不显著(P>0.05),而饱血体重与两性生殖的长角血蜱种群饱血体重差异极显著(P<0.01);雌蜱饱血体重可达吸血前的108.46±19.72倍,与两性生殖的种群饱血体重差异亦极显著(P<0.01)。雌蜱产卵量与饱食体重之间呈极显著正相关r=0.897 0(P<0.01);生殖效率指数REI=6.76,生殖适合度指数RFI=6.29;蜱发育时间在不同季节无明显变化。     

张家川县绵羊血液原虫病的调查与防治

对甘肃省张家川县绵羊蜱媒血液原虫病进行了流行病学调查。结果发现 ,绵羊体表寄生蜱类 5种 ,即青海血蜱 (Haemaphysalisqinghaiensis)、长角血蜱 (H .longicornis)、革蜱 (Dermacentorspp .)、草原革蜱 (D .nuttalli)和微小牛蜱 (Boophilusmicroplus) ,其中青海血蜱为传播媒介优势种。绵羊泰勒虫 (Theileriaovis)感染率为 6 2 .2 % ,无形体 (Anaplasmaovis)感染率为 16 .7% ,且有双重感染的病例。体表喷洒药物灭蜱试验表明 ,5 0mg/L倍特对蜱类的半数致死时间 (LT50 )为 4 .91h ,用药后 3d体表残留活蜱数为 3.4± 2 .2只 ,14d后再次染蜱数为 4 9.7± 12 .0只 ,羊只血液原虫病感染率由38.1%降至 8.8% (P <0 .0 1) ,红细胞染虫率由 11.6 %± 6 .9%降至 5 .4 %± 2 .1% (P >0 .0 1)。     

马焦虫病传播者草原革蜱生物防治的研究——蜱经钴~(60)处理后对马体的不育效果及其安全性试验

草原革蜱经钴~(60)辐射后,在兔体进行试验(1981～1982年),证实其有效不育剂量为3000仑琴,其虫卵不育率可达100％。在上述工作的基础上将经钴~(60)(3000仑琴)处理后的草原革蜱雄虫,放置马体来观察虫体的不育效果及对马体的安全性(草原革蜱是经卵传递病原的,观察有否传播病的能力)。     

甘肃省媒介硬蜱的种类与地理分布

采用布旗法与家畜体表捕捉法 ,在甘肃省 6个不同地理区划内的部分县、市、区采集硬蜱标本 ,共发现了 2 0种硬蜱 :河西走廊有草原革蜱 (Dermacentornuttalli)、银盾革蜱 (D .niveus)、亚洲璃眼蜱 (Hyalommaasiaticumasiaticum)、麻点璃眼蜱 (H .rufipes)、小亚璃眼蜱 (H .anatolicum )、亚东璃眼蜱 (H .asiaticum ) ;河西走廊南山地有草原革蜱、嗜驼璃眼蜱 (H .dromedarri)、小亚璃眼蜱、亚东璃眼蜱 ;河西荒漠高原有草原革蜱和残缘璃眼蜱 (H .detritum ) ;中部黄土高原有草原革蜱、森林革蜱 (D .silvarum )、日本血蜱 (H .japonica)、长角血蜱 (H .longicornis)、青海血蜱 (H .ginghaiensis)、卵形硬蜱 (Ixodesovatus) ;陇南山地有草原革蜱、长角血蜱、刻点血蜱 (H .puncta ta)、卵形硬蜱、全沟硬蜱 (I .persulcatus)、血红扇头蜱 (Rhipicephalussanguineus)、微小牛蜱(Boophilusmicroplus) ;甘南山地山原地区有草原革蜱、草原硬蜱 (I .crenulatus)、全沟硬蜱、钝跗硬蜱 (I .pomerantzevi)、青海血蜱、草原血蜱 (H .verticalis)。草原革蜱分布于甘肃省 6个地理区划 ,其他 19种硬蜱的分布具有明显的地理特征     

森林革蜱寄生于刺猬体表报道

森林革蜱寄生于刺猬体表报道杨芷云，王宗仪，金东航（河北农业大学保定０７１００１）１９９４年４月３０日在保定市某家属院发现一只体重约４５０ｇ的刺猖，其体表有２２只硬蟀寄生。刺猬表现高度贫血、消瘦，检查后不久死亡。收集的蜱经鉴定，确定为森林革蜱（Ｄｅｒｍ...     

小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达

根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8.测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%.将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性.结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别.     

长角血蜱三种miRNAs在不同发育阶段和器官中的表达分析

为了研究长角血蜱体内miRNAs的生物学功能,本研究从饱血后差异表达的miRNAs中筛选了3种miRNAs(mi R-278,Let-7和Bantam),采用荧光定量PCR方法检测了3种miRNAs在蜱的各个发育阶段和成蜱四种不同器官中的表达量;经miRNAs化学拮抗剂的注射,进行相应miRNAs的干扰试验。结果显示,在蜱体内获得了miRNA-278,Let-7和Bantam的前体序列,三种miRNAs的表达量在饱血后存在差异,在若蜱和成蜱的脂肪体中表达量最高,但Bantam表达量在各个阶段均较miR-278和Let-7低。结果表明,3种miRNAs的表达具有阶段和器官特异性,miR-278对长角血蜱成蜱的上体率和致死率影响显著。本研究可为抗蜱新药或疫苗的研发提供新的途径。     

草原革蜱和森林革蜱形态结构与分子标记的比较

为了比较草原革蜱(采自内蒙古呼伦贝尔)和森林革蜱(采自宁夏固原)的形态结构与分子标记异同点,借助体视显微镜超景深系统观察了这2种蜱的形态结构;通过分子生物学技术,测定了这2种蜱COX1、ITS2及16S rDNA基因序列,并通过比对这3种基因的同源性、构建系统发生树,分析了这2种蜱的分子标记差异。结果显示,这2种蜱均具有珐琅斑,须肢粗短,缘垛整齐等革蜱属的典型特征。草原革蜱珐琅彩浓厚且色浅呈银白色,刻点小且分布均匀、夹杂少数大刻点,背突直而短,缘垛分布均匀;森林革蜱珐琅彩覆盖大部分盾板且色深呈深褐色,刻点粗细混杂、分布较为稠密,背突向背方弯曲,尾部缘垛较其他缘垛窄;两者具有显著的形态学差异。草原革蜱COX1、ITS2、16S rDNA基因序列与GenBank中已知草原革蜱基因序列的相似度分别为99.88%、99.90%、97.58%;森林革蜱COX1、ITS2、16S rDNA基因序列与GenBank中已知森林革蜱基因序列的相似度分别为98.64%、98.60%、99.53%。进一步对比这2种蜱的COX1、ITS2、16S rDNA基因序列,发现其相似度分别为99.76%、99.75%、98.29%。结果提示:虽然草原革蜱和森林革蜱形态学差异显著,但COX1、ITS2、16S rDNA基因序列相似度极高,两者可能为同一种的不同亚种或COX1、ITS2、16S rDNA基因不适用于革蜱属的种间鉴定。