大鼠脑细胞DNA含量与死亡时间关系的图像分析

应用计算机图像分析技术 ,测定 15只大鼠死后 48h内不同时间点大鼠脑细胞核DNA含量的面积(Area)、等效直径 (Mean Dia ,MD)、异形指数 (Indexofdensity ,ID)、平均光度 (Averageopticaldensity ,AOD)、积分光度 (Integralopticaldensity ,IOD)、密度变化数 (L Den Coe ,LDC)和平均灰度 (Averagegray ,AG)等七项参数的变化值。结果证明 ,在大鼠死亡后 2 8h内 ,其脑细胞核DNA降解速率与PMI具有一定相关性。将每个参数的测量值进行多项式运算 ,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程。其结果表明 ,应用计算机图像分析技术 ,测量机体死后DNA含量变化 ,将会成为推断PMI精确、客观的新方法。     

大鼠死后心肌细胞DNA含量与死亡时间关系的进一步研究

目的研究机体的细胞核内DNA含量与死亡时间的关系。方法本实验通过计算机图像系统,选择核面积、积分光密度等7种参数,研究了15只大鼠心肌细胞在死后25～49h细胞核DNA含量的变化规律。结果心肌细胞DNA含量测定适合相对较长死亡时间的推断。结论应用计算机图像分析技术测量机体死后心肌细胞DNA含量将有可能成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

大鼠死后视网膜细胞核DNA含量变化的图像分析

目的分析死后不同时间大鼠视网膜细胞核DNA含量变化图像,探讨视网膜细胞核DNA降解与死亡时间（PMI）的关系。方法90只成年健康雌性SD大鼠,随机分成15组,死后0—28h内（20℃）,每2h提取视网膜细胞进行Feulgen-Vans染色;采用图像分析系统检测视网膜细胞核的异形指数（ID）、积分光密度（IOD）和平均光密度（AOD）,并运用SPSS12．0软件对测量数据进行线性回归分析。结果视网膜细胞核AOD和IOD随死亡时间的延长逐渐下降,ID则呈上升趋势。28h内各参数变化的回归方程如下：YAOD=-0．009XAOD＋0．590,R^2=0．949,Y100=-0．097X。＋18．903,R^2=0．968,Y10=0．122X10＋2．246,R^2=0．951。结论大鼠死后视网膜细胞核DNA含量随着死亡时间的延长而呈规律性降解,并与PMI具有良好的相关性。     

小鼠心肌细胞核DNA变化与死亡时间的关系

目的监测小鼠死后细胞核DNA降解的情况,探讨死后细胞核DNA降解的一般规律。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠心肌组织细胞头半径、尾长度、头DNA含量比例、尾DNA含量比例、尾矩、Olive矩、头面积、尾面积八项参数的变化值。结果在个体死亡72h内,测定的八项参数指标均显示细胞核DNA降解速率和程度与死亡时间具有高度的相关性,并获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程和多元回归方程,均具有高度的统计学意义。结论应用72h内心肌组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,可为法医学推断死后经过时间提供一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

单细胞凝胶电泳分析死后小鼠骨骼肌细胞核DNA降解

目的研究小鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解与死亡时间的关系。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点骨骼肌细胞核DNA电泳形状的8项参数值,所得数据进行统计学分析。结果在个体死亡72h内,“彗星”的尾DNA含量比例、尾长、尾矩、O live矩、尾面积数值随时间的延长而增大;而“彗星”的头半径,头DNA含量比例和头面积数值则随时间的延长而减小。经对每个参数的测量值进行多项式运算,获得DNA降解趋势的二项式回归方程(P<0.001)和多元回归方程(P<0.0001),且均具有极显著性意义。结论在死后一定时间内,小鼠骨骼肌组织核DNA降解随死后经过时间的变化而呈一定规律性变化,DNA降解与死亡时间之间呈线性相关。     

DNA降解与腐败尸体死亡时间的相关性

目的探讨骨髓细胞核DNA含量变化与腐败尸体死亡时间的关系。方法应用DNA高度特异性染色方法Feulgen改良法结合计算机图像分析技术对死后不同时间(0～14d)胸骨骨髓细胞核DNA含量变化进行分析。结果胸骨骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈缓慢而规律下降,直至死后两周仍未完全降解。结论死后DNA降解速率与死亡时间呈线性关系,测定死后骨髓细胞核DNA含量可望成为腐败尸体死亡时间推断的新方法。     

大鼠死后肋软骨细胞核DNA含量随死亡时间的变化

目的研究大鼠死后肋软骨细胞核DNA含量与晚期死亡时间的相关性。方法应用改良的Feu lgen法结合计算机图像分析技术对死后大鼠35d内肋软骨细胞核DNA含量变化进行观测分析。结果死后1~28d,细胞核染色逐渐变淡,至35d时已观察不到,死后肋软骨细胞核DNA含量与死亡时间呈直线相关。结论大鼠肋软骨细胞核DNA含量随死亡时间延长呈线性规律下降。     

大鼠死后不同时间坐骨神经雪旺氏细胞核DNA的变化

目的探讨大鼠死后不同时间坐骨神经雪旺氏细胞核DNA的变化及其与死亡时间的关系。方法应用Feulgen染色法及计算机图像分析技术,观测大鼠死后即刻至9d坐骨神经雪旺氏细胞核DNA染色变化及其图像分析参数,所得数据进行统计学分析。结果雪旺氏细胞核在死后6-18h细胞核呈紫红色、长椭圆形,轮廓清晰,其长轴方向与坐骨神经走向一致,死后24h着色变淡、着色面积变小,最终完全消失;在6h-9d内目标面积和积分光密度随死亡时间的延长而逐渐减小,且其均值均与死亡时间明显相关,并得出对应的回归方程。结论大鼠死后9d内,其坐骨神经雪旺氏细胞核DNA变化与死亡时间有一定的相关性。     

死后小鼠脑组织细胞核DNA变化规律的研究

目的研究DNA降解变化与死亡时间的关系,为法医学推断死亡时间提供一种比较准确可靠的新方法。方法应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定了111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠脑组织细胞核头半径（HeadRadius,HR）、尾长度（Tail Length,TL）、头DNA（HeadDNA）含量比例、尾DNA（Tail DNA）含量比例、尾矩（Tail Moment,TM）、Olive矩（Olive Moment,OM）、头面积（Head Area,HA）、尾面积（Tail Area,TA）8项参数的变化值。结果在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径,头DNA含量比例,头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程（P〈0．001）和多元回归方程（P〈0．001）,均具有高度的统计学意义。结论应用本研究提供的72h内脑组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,为法医学推断死后经过时间提供了一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

大鼠骨骼肌细胞DNA含量变化与死亡时间关系的研究

目的大鼠骨骼肌细胞DNA的定量研究及其方法探讨。方法使用DNA特殊组化染色和计算机图象分析技术 ,对死后不同时间 (0～ 96h)、不同环境温度下的大鼠骨骼肌细胞核DNA含量变化进行分析。结果骨骼肌细胞在死后 12h出现核着色变淡、着色面积变小 ,并随死后时间延长呈持续性下降 ,最终完全消失。结论死后DNA降解率与死后时间呈线性规律关系。图像分析技术对骨骼肌DNA含量测定具有良好的实际应用前景     

兔死后角膜内皮细胞核DNA降解随死亡时间变化规律

目的研究兔死后角膜内皮细胞核DNA降解与死亡时间的关系。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,检测27只家兔死后48h内不同时间点角膜内皮细胞核DNA降解情况。结果家兔死后角膜内皮细胞产生彗星现象,彗星样细胞出现率于兔死后6h开始逐渐增加。死后6～18h彗星样细胞出现率增加缓慢,死后24～36h出现率上升较快;死后36～48h彗星样细胞出现率上升缓慢,但仍始终保持在较高的水平上(M185.4%),其回归方程为y=-0.0096x2+2.4548x+5.7964,与死亡时间呈正相关(R2=0.9743)。结论家兔死后角膜内皮细胞彗星样细胞出现率随死亡时间增加而逐渐增加。     

大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解的彗星电泳检测

目的探讨彗星电泳检测大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解碎片与死后时间的关系。方法建立SD大鼠死亡模型,18只雌性大鼠断颈处死,在25.1℃分别于死后6、12、24、36、48、60提取大鼠骨骼肌组织进行彗星电泳,荧光显微成像系统采集图像,同时获取多个分析参数(Comet4.0),并进行统计学处理。结果在死后6～48h,彗星尾长(TL)在死后各时间点的均数依次为11.56±0.10、17.76±0.18、18.82±0.21、21.68±0.18和23.33±0.07;Oliver尾矩(TM)在各时间点的均数依次为1.63±0.46;2.12±0.90;2.15±1.03;2.22±0.76;3.35±0.80;尾DNA(TDNA)在各时间点的均数依次为29.57±8.42;32.36±10.92;30.11±12.55;37.81±12.03;54.76±8.60。结论细胞DNA降解随着死后时间的延长而增加;彗星尾长用于推断死后时间优于Oliver尾矩和尾DNA。     

失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白死后降解的检测

目的探讨失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白含量变化与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克死亡后，分别于死亡即刻和死后1、2、3、5和7d剖取脾脏、肝脏及肾脏组织，应用western—blot技术检测微管蛋白含量，SPSS11．5软件对结果进行统计学分析。结果大鼠肝肾脾细胞内微管蛋白含量随PMI的延长而逐渐降低，至死后7d仅可见很淡的微管蛋白印记谱带，其中微管蛋白在肝脏内降解速率最快。3种组织内微管蛋白含量变化的同归方程及相关系数（r）分别为：肝脏Y=-2221．1X＋14844，r=0．9823；脾脏Y=-1871．1X＋11344，r=0．9749；肾脏Y=-1878．1X＋13715，r=0．9629。结论大鼠死后肝肾脾细胞内微管蛋白降解规律与PMI之间具有相关性，并存在组织差异性。     

人体死后肝细胞DNA含量与死亡时间关系的研究

目的研究人体死后肝脏细胞DNA含量变化与死亡时间的关系及影响因素。方法选取46例已知死亡时间的人体肝脏,根据离体肝脏所处的环境温度分为12—19％（A组）和20—27％（B组）两组,每组23例。在死后24～72h内每隔4h穿刺取肝组织1次,制成细胞悬液,经RNA酶消化,PI染色后,用流式细胞仪测定被检测细胞中含不完整DNA的细胞数所占百分比,所得数据经Exp032V1．2软件计算N值。结果死后24～72h肝细胞N平均值,A组从10．91％增至49．72％,B组从16．22％增至69．63％。两组N平均值随死亡时间的延长均逐渐增高,与死亡时间有相关性,A组r值为：0．598,B组r值为0．77357。并且建立了不同环境温度对应的回归方程。结论在不同环境温度下,死后24～72h内人体肝脏细胞DNA降解均随死亡时间的延长和环境温度的升高而逐渐加快,相关数据可望为死亡时间推断提供一定参考依据。     

组织细胞DNA含量变化与死亡时间的相关性研究

目的研究人死后各器官组织细胞DNA降解变化规律,探讨其在推断死亡时间方面的应用价值,为推断死亡时间提供科学依据。方法已知死亡时间人尸体的心、肝、脾、肾,按死后6,12,24和48h四个时间段取材,制成石蜡切片,经Feulgen染色并图像分析;同时将各器官组织按不同时间段取材,制成单细胞悬液,应用流式细胞仪检测DNA含量。结果(1)人体各器官组织细胞经FCM检测,脾细胞核DNA随死亡时间延长呈现较好的下降梯度,而心、肝、肾,则由于自溶较快,死后6h细胞核DNA含量已很低,其变化情况与死亡时间的相关性不佳;(2)各器官组织细胞核DNA染色强度指数均随死亡时间的延长而下降。结论(1)机体死亡后,各器官组织细胞核DNA含量随死亡时间延长逐渐减少,具有一定的变化规律,其中以脾细胞核DNA含量的变化趋势与死亡时间最具相关性,肝、肾次之,而心最差;(2)方法学分析,图像分析技术(IAT)与流式细胞术(FCM)两种检测方法在研究组织细胞DNA含量变化方面,各有利弊,可互补不足。