青海高原产纤维素酶菌的选育

从 11株分离自青海省东部森林的产纤维素酶真菌中 ,筛选出产纤维素酶性能优良的0 14 3菌株 ,根据其形态学特征及培养特性 ,鉴定为康氏木霉 (Trichodermakoningii ) ,该菌湿固体发酵物的滤纸酶活力 (FPA)为 15 μmol/min。 0 14 3菌株经亚硝基胍诱变后 ,获得突变株 0 14 3p ,其湿固体发酵物FPA为 2 0 μmol/min ,是原菌株的 1.33倍。该菌无毒副作用 ,可应用于饲料中 ,作为饲料用酶源菌。     

空肠弯曲菌质粒与其生物学特性的关系

对不同来源的空肠弯曲菌的质粒及其与菌株来源、生物型、致病性和耐药性的关系进行了研究。共检出大小分别为 1.9、2 .3、2 .6、5 .6、12 .6、33.0、82 .0和 10 8.0kb的 8种CCC型质粒 ,构成 7种质粒谱型。健康鸡源菌的质粒阳性率为 0 ;患病鸡源菌为 1.96 % ;患病猪源菌为 4 5 .8% ;健康羔羊源菌为 0 ;患病人源菌为 0。空肠弯曲菌的质粒用EcoRⅠ酶切后 ,1.9和 2 .3kb质粒的酶切谱随菌株来源的不同而异 ,其他 6种质粒的酶切谱没有差异。统计分析表明 ,空肠弯曲菌质粒的质粒谱型和酶切谱型与菌株来源、Lior生物型、致病性相关 (P <0 .0 0 1) ;也与对链霉素 (P <0 .0 0 1)、萘啶酸 (P <0 .0 5 )的耐药性相关 ;空肠弯曲菌对链霉素的耐药性与 2 .3kb的质粒有关 (P<0 .0 5 )。     

不同硒添加剂对仔猪生长肝脱碘酶Ⅰ活性和血清甲状腺激素水平的影响

将 2 34头杜×长×大断奶仔猪分为 13组 ,分别以纳米硒和亚硒酸钠 2种硒源 ,0 .1、0 .2、0 .3、0 .4、0 .5、1.0mg/kg 6个硒水平添加到基础日粮中 ,研究了纳米硒和亚硒酸钠对仔猪生长、肝脱碘酶Ⅰ活性和血清甲状腺激素的影响。结果显示 :亚硒酸钠硒水平 0 .1mg/kg组仔猪的生长性能趋于平台 ,0 .3～ 1.0mg/kg组仔猪的生长性能随着硒添加浓度的增加而下降 ,1.0mg/kg组仔猪的生长性能显著低于 0 .2～ 0 .4mg/kg组仔猪。纳米硒水平 1.0mg/kg组仔猪的生长性能保持在高峰平台。硒添加浓度为 0 .1～ 0 .3mg/kg时 ,亚硒酸钠和纳米硒对仔猪生长性能的影响无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;硒添加浓度为 0 .4～ 1.0mg/kg时 ,纳米硒组仔猪生长性能显著高于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 )。硒添加浓度为 0 .1～ 0 .2mg/kg时 ,两种硒源对脱碘酶Ⅰ活性、血清T3、T4 的影响无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;硒添加浓度为 0 .3～ 1.0mg/kg时 ,纳米硒组脱碘酶Ⅰ活性和血清T3水平显著高于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 ) ,血清T4 水平显著低于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 )。纳米硒的Weinberg剂量 效应的最适剂量范围宽于亚硒酸钠。     

β-葡聚糖酶对马岗鹅T淋巴细胞数及免疫器官的影响

取 1日龄马岗鹅 15 0只 ,随机分为 2组 ,试验组用 β 葡聚糖酶拌料饲喂 ,对照组喂不含 β 葡聚糖酶的饲料 ,于不同日龄检测各免疫器官的器官指数 ,应用酸性α 醋酸萘酯酶 (ANAE)染色法检测T淋巴细胞数目。探讨 β 葡聚糖酶对马岗鹅的免疫器官及T淋巴细胞ANAE 的影响。结果 ,β 葡聚糖酶能显著增加T淋巴细胞数量 ,在第 2、8周时试验组与对照组差异显著 (P <0 .0 5 ) ,在 12周时差异极显著 (P <0 .0 1) ;而对免疫器官没有明显的影响。     

新生仔猪大肠埃希氏菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗生产工艺的研究

以实验室工艺为基础,用发酵罐培养,对培养基、诱导剂及诱导条件、通气量、菌液灭活条件等进行了筛选优化。结果表明,重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)培养的最适培养基为改良LB培养基;乳糖为适合于工业化生产的诱导剂,其最适浓度为100 mmol/L,诱导时间不低于6 h;2×105mL发酵罐培养的最佳通气量为500 L/min;培养菌液的灭活条件为按菌液总量加入4 mL/L甲醛溶液,37℃灭活48 h。按上述工业化生产条件生产疫苗5批,检验结果均安全有效。     

日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性

分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I-R-R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn2+、Ni2+、Mg2+、Ca2+)、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响.结果显示,rSiPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽,具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶活性.rSjPP酶活性的最适温度为60℃,最适pH值为8.0.1～4 mmol/L Ni2+对rSjPP酶活力有促进作用,但Mn2+、Mg2+、Ca2+等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大.     

接种温度对破伤风梭菌产毒的影响

将破伤风梭菌罗马TL 64 0 0 8株经 2次扩菌后 ,接种于预先设置的 15、2 0、2 5、3 0和 3 5℃双胨培养基上 ,然后均置于 3 5℃培养 13 2h。结果 ,在 3批破伤风类毒素生产的试验中 ,其平均毒力 (絮凝单位 ,Lf)依次为 89.3、84.3、85 .0、91.7和 10 1.7Lf/mL ,表明接种时温度以 3 5℃产毒结果最佳 ,并以接种时温度下降而依次递减     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立及临床应用

为建立直接检测可疑病料中胸膜肺炎放线杆菌(APP)的PCR诊断方法,对用以扩增apxⅣA毒力基因3′端长约442 bp的核苷酸片段的引物、模板、TaqDNA聚合酶、dNTPs的最适剂量及退火温度进行了优化筛选,并进行了特异性及重复性试验;以筛选出的优化条件,对临床可疑病料进行了PCR检测。结果,在25μL体系中,以5 pmol/μL引物、0.25μLTaqDNA聚合酶、2 mmol/L dNTPs、56℃退火温度对APP标准菌株apxⅣA毒力基因的扩增效果最好,重复性和稳定性高;而对类症菌株的扩增结果则为阴性,表明其特异性强。对分离到APP的病料PCR阳性率为100%(5/5);未分离到APP的纤维渗出性病料中,新鲜与陈旧病料PCR阳性率分别为70.59%(12/17)、50.00%(4/8),而非纤维渗出性病料的PCR结果均为阴性(0/45、0/9)。结果表明,建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感,优于细菌学方法,它可作为APP可疑病料的理想诊断方法。     

实验性免疫应激对雏鸡细胞免疫功能的影响

用NDⅠ系疫苗大剂量肌肉注射 2周龄雏鸡的方法建立实验性免疫应激模型 ,探讨应激状态下细胞免疫功能受到的影响。将 2 0 0只 2周龄健康雏鸡随机分成 4组 ,检测免疫器官中CD4 、CD8 T淋巴细胞变化。结果 ,试验 2、3组CD4 T淋巴细胞数从第 3d开始下降 ,第 5d最低 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 ) ;CD8 T淋巴细胞数的特征性变化为从第 3d开始上升 ,第 5d最高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。     

葛根素通过激活p38 MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖的研究

为研究葛根素(PUE)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的作用及其所关联的信号通路。通过培养MC3T3-E1细胞,运用CCK-8法对比加入不同浓度葛根素后细胞的增殖能力;通过CCK-8法检测最适浓度葛根素在不同时间对细胞增殖的影响;通过pNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)的活性以检测不同浓度葛根素对细胞分化的影响;通过向p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated proteinkinase,p38 MAPK)信号通路中加入p38抑制剂SB203580分析细胞分化水平;通过蛋白质免疫印迹技术检测p38磷酸化蛋白(P-p38)表达水平;通过ELISA检测Ⅰ型胶原分泌水平。结果显示,不同浓度葛根素作用于MC3T3-E1细胞,可以不同程度促进细胞的增殖和分化,其中浓度为1×10~(-6)mol/L葛根素组的促进作用显著高于其他组。最适浓度葛根素在不同时间对细胞增殖作用有明显差异,其中48 h对细胞增殖作用最为显著。葛根素可以激活ALP,促进Ⅰ型胶原分泌,诱导细胞的分化。使用抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号通路后,相比于对照组,细胞增殖、ALP活力以及P-p38蛋白的表达水平明显降低。结果表明,葛根素可以通过激活p38 MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖和分化。