TCF-β1在皮肤创伤的表达变化与损伤时间关系

<正> 损伤时间推断历来是法医病理学研究和检案工作中的重点和难点。近年来,人们发现细胞因子及其受体在创伤修复中表达变化的规律与损伤时间相关,使其用于损伤时间的早期推断成为可能。来源于血小板、巨噬细胞、T淋巴细胞、增殖的上二皮细胞、成纤维细胞等的转化生长因子β     

大鼠挫伤骨骼肌中M1/M2型巨噬细胞时间相关性研究

目的研究大鼠骨骼肌挫伤后M1/M2型巨噬细胞浸润的动态变化规律结合组织学改变建立损伤时间推断方法。方法建立大鼠骨骼肌挫伤模型,挫伤后6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h、96h、144h、216h、336h为实验组,对照组不进行任何处理。采用HE染色法和免疫荧光多重染色方法观察骨骼肌挫伤后修复规律,运用全景组织细胞定量分析系统检测损伤区内单位面积细胞核数量、M1及M2型巨噬细胞数量和比例变化规律并建立与损伤时间的关系。结果在0.5mm×0.5mm范围内,M1型巨噬细胞比例在0.05±0.02~0.18±0.12且M2型巨噬细胞比例在0.02±0.01~0.04±0.02范围内时,推断该组织的损伤时间为伤后6h~48h;M1型巨噬细胞比例0.22±0.02且M2型巨噬细胞比例在0.09±0.02范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后60h;M1型巨噬细胞比例0.1±0.02且M2型巨噬细胞比例在0.16±0.07范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后144h;M1型巨噬细胞比例0.05±0.01~0.09±0.02且M2型巨噬细胞比例在0.07±0.02~0.09±0.01范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后216h~336h。结论大鼠挫伤骨骼肌中M1/M2型巨噬细胞时间相关性表达规律可作为损伤时间推断的新依据,结合病理组织学改变可进一步提高损伤时间推断的准确性。     

巨噬细胞在损伤修复过程中的作用及其法医学意义

损伤时间推定,一直是法医学领域研究的重要课题。为了寻找准确推定损伤时间的方法,本文综述了巨噬细胞在损伤修复过程中的作用机理、伤后巨噬细胞源性细胞因子的表达和巨噬细胞吞噬物的演化与损伤时间的关系。认为进一步研究巨噬细胞在损伤修复中的特征性变化,有望成为推定损伤时间的方法之一。     

皮肤切创愈合过程中TLR2、TLR4表达及其法医学意义

目的探讨皮肤切创组织中单核-巨噬细胞TLR2和TLR4阳性表达与损伤时间的相关性,以寻找损伤时间推断的新方法。方法应用免疫组织化学技术研究45例不同损伤时间小鼠皮肤切创组织中TLR2、TLR4的表达情况,同时以3例正常小鼠皮肤组织作对照。结果皮肤切创组织中单核-巨噬细胞TLR2和TLR4阳性表达与损伤时间具有相关性。单核-巨噬细胞TLR2、TLR4阳性细胞比率(单核-巨噬细胞阳性细胞数与中性粒细胞、单核-巨噬细胞及成纤维细胞三种阳性细胞总数之比率)与损伤时间的回归方程分别为y=23.8099 0.9572x-0.0077x2 1.5×10-5x3(R2=0.872);y=25.2256 0.7893x-0.0059x2 1.0×10-5x3(R2=0.879)。结论TLR2、TLR4在小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区内单核-巨噬细胞阳性表达比率与损伤时间相关;检测损伤区单核-巨噬细胞TLR2、TLR4的表达可望成为推断损伤时间的新方法。     

TGF-β1在皮肤创伤的表达变化与损伤时间关系

损伤时间推断历来是法医病理学研究和检案工作中的重点和难点.近年来,人们发现细胞因子及其受体在创伤修复中表达变化的规律与损伤时间相关,使其用于损伤时间的早期推断成为可能[1,2].     

大鼠骨骼肌损伤后不同时间中性粒细胞及巨噬细胞比率的变化

目的观察大鼠骨骼肌损伤后不同时间点中性粒细胞和巨噬细胞比率的变化情况,探讨其在损伤时间推断上的应用价值。方法健康SD大鼠随机分为伤后6h、12h、1d、3d、7d、10d、14d及正常对照组,建立大鼠骨骼肌损伤动物模型,取损伤区肌肉组织制作切片,应用免疫组织化学染色和图像分析法,观察并计数伤后不同时间点中性粒细胞及巨噬细胞数量和占总细胞数量的比率。结果伤后6~12h,损伤区内可见大量中性粒细胞浸润,其比率达到高峰;伤后1d,损伤区内主要以巨噬细胞浸润为主,其比率达到高峰,中性粒细胞比率则开始下降;伤后3~14d,两种细胞比率均逐渐下降。伤后12h所有样本中性粒细胞的比率均大于75%,而其他各组比率均低于75%;伤后1d所有样本巨噬细胞比率均大于50%,而其他各组比率则明显低于50%。结论大鼠骨骼肌损伤区中性粒细胞和巨噬细胞比率在伤后6h至伤后14d呈现规律性变化。中性粒细胞和巨噬细胞比率分别大于75%、50%时,可分别提示损伤时间为12h、1d。     

PDGF-β,PDGFR-β,TGF-β1,bFGF在创伤愈合过程中的表达变化与损伤时间关系的研究

目的研究细胞因子在创伤及修复过程中的表达变化与损伤时间 ( 伤口年龄 ) 的关系 . 方法用免疫组织化学技术和图像分析技术 , 对实验大鼠不同损伤时间的生前伤 ( 0.5～ 168h am) 及死后伤 ( 0.5～ 6h pm) 皮肤创缘组织中细胞因子和受体的表达变化进行了研究 . 结果在生前伤 , PDGF- β , PDGFR- β , TGF- β 1, bFGF等细胞因子在上皮细胞的表达于损伤后 0.5h am 即开始增强 , 其中以 24～ 96h am反应最强 . TGF- β 1, bFGF 以及 PDGF- β除了在上皮细胞的表达外 , 还大量出现在肉芽组织的巨噬细胞和成纤维细胞内 , 亦以 24～ 96h am 最明显 , 而死后损伤组上述因子仅在 0.5～ 3h以内有弱表达 , 3h后则均无任何表达 . 结论 PDGF- β , PDGFR- β , TGF- β 1, bFGF在创伤愈合过程中的变化及特点与损伤时间的关系可作为推断损伤时间的免疫病理学标志 .     

在大鼠皮肤切创愈合过程中TGF-β_1基因及蛋白表达变化与损伤时间关系的实验研究

了解细胞因子在创伤及修复过程中的表达变化与损伤时间的关系。初步调查生前不同造创时间 ( 0 5h～16 8h)皮肤创缘组织在修复过程中TGF β1mRNA和蛋白质表达变化 ,并与死后伤 ( 0 5h～ 6h)上述变化进行比较。结果表明 ,在生前伤 ,TGF β1在上皮细胞的表达于损伤后 0 5h开始增强 ,以 2 4h～ 96h反应最强 ,除上皮细胞内表达外 ,还在肉芽组织的巨噬细胞和成纤维细胞表达。TGF β1的免疫印迹 (WesternBlot)分析表明 ,TGF β1蛋白表达的峰值在 16 8h ;TGF β1斑点杂交和原位杂交结果显示 ,mRNA的表达在伤后 3h开始 ,6h后明显 ,96h达峰值。死后损伤组在 0 5～ 3h内有免疫组化的弱～中度表达 ,但无mRNA的表达 ,3h后则均无任何表达。TGF β1在修复过程中的一些规律性变化及特点反映了与损伤时间的关系 ,可作为精确推断损伤时间的分子生物学标志。     

蛋白因子与皮肤损伤时间的相关性研究

皮肤创伤愈合是一个复杂的过程,黏附分子、细胞因子等蛋白因子在该过程中发挥重要作用,常随损伤时间的延长呈现规律性表达。对这些蛋白因子在皮肤损伤后的表达变化进行深入研究,可以为法医学皮肤损伤时间推断以及临床皮肤损伤的修复提供新思路。本文对黏附分子、细胞因子等蛋白因子应用于皮肤损伤时间推断研究的国内外研究现状进行了综述,以供今后检案及研究借鉴。     

突触体素在弥漫性脑损伤后的表达水平变化

目的根据突触体素在脑损伤后的变化规律,研究其与弥漫性脑损伤后损伤时间之间的关系。方法垂直撞击SD大鼠造成脑损伤模型,在不同时间点处死大鼠,取脑组织冠状断面进行突触体素染色,将染色结果进行灰度值测定,并用SPSS软件对灰度值进行分析,从而推断损伤后随时间变化的突触体素变化情况。结果突触体素在损伤后一段时间内,随时间的变化呈现双拐曲线,显示突触体素表达与脑损伤及其修复过程密切相关。结论根据脑组织内突触体素的含量变化在一定范围内可以用于推断脑损伤时间。     

A preliminary study on the changes of expression of PDGF-beta,PDGFR-beta,TGF-beta 1, TGFR,bFGF and its relationship with the wound age in wound healing

OBJECTIVE: To explore the relationship between the expression change of cytokines and the wound age during the healing process of rats skin wound. METHODS: Immunohistochemical and image-analysis methods were performed on vital skin wounds(after incision 0.5-168 h am) and postmortem damage(after incision 0.5-6 h pm). RESULTS: The expression of the cytokines PDGF-beta, PDGFR-beta, TGF-beta 1, and bFGF in the epithelial cells was already enhanced since 0.5 h am after damage and their strongest expression reaction was seen at 24-96 h am. In addition, the expression of PDGF-beta, PDGFR-beta, TGF-beta 1 and bFGF was also found in the macrophages and the fibroblasts of the granulation tissue, and the expression changes in the postmortem damage group showed that the skin tissue within 0.5-3 h after incision showed immunohistochemical changes but weakly expression and 3 h thereafter no any change was found. CONCLUSION: The expression characteristics of the above mentioned cytokines in wound repair should be related to the wound age and it reminds therefore that they may be used as immunohistochemical criteria for accurate determining the wound age.     

小鼠皮肤切创细胞因子的基因表达变化及其与损伤时间关系

目的 观察细胞因子在小鼠皮肤切创组织不同时间的基因表达变化及其与损伤时间的关系。方法用免疫组织化学染色法和RT-PCR法,检测小鼠皮肤切创组织中不同时间的白细胞介素-1α和-1β(IL-1α、-1βB),以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、吞噬细胞炎性蛋白-1α和-2(MIP-1α、-2)的基因表达变化。结果 皮肤切创后在早期可诱导IL-1α和IL-1β的基因表达,6h达第一次高峰,24h下降,第3d再次出现高峰后,第6d下降至正常水平;而MCP-1、MIP-1α和MIP-2则在损伤后6h左右开始出现,3d达高峰,然后呈下降趋势。在这些被检因子中,以IL-1α、IL-1β、MIP-1α和MIP-2的变化幅度较大,而MCP-1的变化相对较小。结论 切创组织中IL-1α、-1β和MCP-1,以及MIP-1α、-2的基因表达随伤后不同时间呈现一定规律性变化;同时对同一组织多种细胞因子检查推测损伤时间完全可行。     

The informative aspects of the wound surface for determining vitality and wound age in skin cuts

A histological study was carried out on skin cut wounds of guinea pigs at various time intervals during the first day after infliction of the cut. At the same time intervals, blood cells were obtained from the wound surface prints and analyzed cytologically and cytochemically. Histological examination showed that a central and peripheral zone formed in the wound area, demonstrating that necrobiotic and inflammatory processes were even occurring in the early hours after injury. However, changes in the quantitative relationships between individual kinds of cells were much more differentiated cytologically and reflected much more precisely. Functional and structural macrophage and lymphocyte changes in the wound region during inflammation were also revealed. In correlation, cytochemical analysis confirmed the concept concerning the development of the inflammatory process in the wound area, as enzyme-activity changes clearly detectable, which reflected the rapid, energetic, plastic cellular processes on the wound surface. Our combined results suggest that the wound surface is a zone of vital processes, but that it is not a "dead," "necrobiotic" area. The dynamics of the cellular alterations in the wound surface, reflecting the vital processes developing there, can be successfully used when the problem of vitality, especially the time lapse after the skin injury, is to be resolved.     

IL-33在小鼠皮肤创伤后损伤时间推断中的作用

目的通过观察白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)在皮肤创伤后的时序性变化规律,探讨IL-33在法医学实践中用于损伤时间推断的应用价值。方法利用直径为5mm的圆形锉刀在小鼠背部建造皮肤损伤模型,于伤后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d取损伤处组织,对照组在与创伤组小鼠相同部位取同等大小的皮肤样本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察皮肤创伤后愈合过程中的形态学变化,通过Western印迹法、免疫组织化学染色和双重免疫荧光染色法检测皮肤创伤样本IL-33的表达变化。结果Western印迹法结果显示,伤后3h,IL-33蛋白表达稍有下降,6h后IL-33蛋白表达逐渐增加,于伤后3d达峰值,随后逐渐减少。免疫组织化学染色结果显示,在对照组皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及真皮中固有细胞有少量IL-33阳性表达,伤后3h,IL-33阳性细胞率开始增加,伤后3d达到峰值,随后逐渐减少。双重免疫荧光染色结果显示,伤后1~3d,IL-33阳性表达细胞主要为巨噬细胞,伤后5~7d,IL-33阳性表达细胞主要为肌成纤维细胞。HE染色结果显示该皮肤损伤模型创口愈合过程符合炎症的病理学发展规律。结论IL-33有望成为法医学推断皮肤损伤时间的参考指标。     

大鼠骨骼肌挫伤愈合过程中caspase-3的表达及时间规律

目的观察大鼠骨骼肌挫伤愈合过程中,caspase-3的表达及其变化规律。方法制作大鼠右小腿骨骼肌挫伤模型,应用免疫组织化学法、Western blot法及caspase-3活性测定法对不同时间段大鼠骨骼肌挫伤后caspase-3表达进行检测。结果免疫组织化学及Western blot均显示,挫伤周边区caspase-3的活性随时间延长逐渐升高,5d时达最高峰,随后活性逐渐下降。免疫组织化学染色结果显示,伤后3～5d挫伤处坏死的骨骼肌细胞被清除干净,新形成的肌细胞大量增生,且新形成的肌细胞胞浆内有caspase-3表达;损伤后7～14d,新形成的肌细胞内仍然有caspase-3的阳性表达。结论大鼠骨骼肌挫伤后,挫伤周边骨骼肌表达caspase-3有一定的时间规律性,可望作为推断骨骼肌挫伤时间的指标之一;大鼠骨骼肌挫伤后,新形成的肌细胞表达caspase-3,提示caspase-3可能在骨骼肌分化过程中起重要作用。     

创缘周围血管生成在皮肤损伤时间推断中的应用

皮肤损伤时间推断一直以来都是法医病理学者所需解决的重要问题,免疫组织化学技术具有方便、敏感的特性,它的应用大大提高了皮肤损伤时间推断研究的发展。然而,有效指标的缺乏却限制了免疫组织化学技术的应用。血管生成在皮肤损伤愈合过程中发挥着非常重要的作用,因此,血管生成相关因子可能在皮肤损伤时间推断方面具有重要价值。     

Caspase与皮肤损伤

Caspase家族,目前已知至少由14个成员组成,该家族成员在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。实验研究表明,在皮肤损伤及愈合过程中,伴随着Caspase的活化和表达,这可能与Caspase诱导细胞凋亡的发生有关。深入研究Caspase在皮肤损伤及愈合过程中的作用机制,有望为皮肤损伤的治疗和法医学损伤时间的推断提供新的方法。本文综述了Caspase家族的生物学特性以及Caspase在皮肤损伤及愈合过程中的研究进展,认为Caspase在皮肤损伤及愈合过程中发挥重要作用,具有深入研究的必要。     

Demands on scientific studies: vitality of wounds and wound age estimation

Research on vitality and wound age estimation belongs to the classic fields in forensic medicine. Despite large literature data there is still considerable demand of further research and practical transfer of knowledge and techniques to daily casework. Scientific studies must fulfil basic criteria as to appropriate methods, selection of case material, analysis of results and quality control. Nowadays, immunohistochemistry, biochemical tests and molecular biological techniques are mainly used studying questions of vitality and wound age. Investigations can be based on human tissue samples (autopsy material, vital specimens) or animal experiments. The possibilities, advantages and disadvantages of these study designs are described. Indispensable is the use of appropriate control groups or control samples and a sufficient case number which permits statistical analysis. Main strategy is to minimize variations due to methods and investigators as the unavoidable biological variation of vitality processes and wound repair is large enough.     

皮肤切创愈合中caspase-3表达的免疫组化研究

目的探讨皮肤切创损伤愈合过程中,caspase-3在损伤区内的表达以及不同损伤时间caspase-3的变化规律。方法应用免疫组织化学技术对33例不同损伤时间小鼠皮肤切创组织中caspase-3的表达进行研究。同时以3例非切创小鼠皮肤组织做对照。结果伤后6h的损伤皮肤组织中可见少量中性粒细胞表达caspase-3,伤后12～24h,大部分浸润的中性粒细胞及部分单核细胞为caspase-3阳性。随伤后时间延长,caspase-3阳性细胞以单核细胞及成纤维细胞为主。伤后0～3h,caspase-3阳性细胞比率较低,为(4.53±6.53)%,12h后逐渐增加,伤后3d达高峰,为(62.66±4.84)%,其后逐渐下降。结论小鼠皮肤损伤愈合过程中,caspase-3可能在诱导损伤区内中性粒细胞、单核巨噬细胞及成纤维细胞发生凋亡过程中发挥重要作用,同时,caspase-3的规律性表达可用于损伤时间的推断。