应用酶联免疫吸附试验检测羊衣原体性流产抗体的研究

免疫酶技术是一项新兴的免疫化学测定技术。而ELISA(酶联免疫吸附试验)用于人和畜禽的衣原体抗体的检测,只是近几年来才开展研究。自Lewis(1977年)报道了用ELISA法检测衣原体抗体以来。Evans(1982年)和Nancy J.(1983年)又分别报道了用ELISA检测人血清中衣原体抗体的试验,之后Evans(1983年)又发表了用ELISA法检测鸭血清中衣原体抗体的试验报告。他们通过ELISA与CF(补体结合反应)和MIF微量荧光试验)比较,认为ELISA是一种简单、方便、敏感的试验方法。用ELISA法检测羊衣原体抗体,在国内还未见报道。为此,我们进行了ELISA法检测羊衣原体抗体的试验。其结果:免疫及强毒感染山羊95％表现ELISA阳性;健康对照山羊均表现为阴性反应;从送检的流产山羊血清样品中,有61％查出了衣原体抗体。     

口蹄疫血清抗体三区分类法意义

最近McCullough,K.C等(1992)通过一系列方法检测了免疫后的动物血清抗体,进而与攻毒试验进行比较观察,同时纵观了其他学者的试验,提出了血清抗体的“三区”分类法。 对口蹄疫保护性免疫反应很大程度上取决于体液反应。当特异性抗体作用于口蹄疫病毒后就会增强吞噬作用,通过免疫系统的吞噬细胞来摧毁病毒。因此探索动物抗口蹄疫病毒的抗体反应和抗感染的关系是疫苗研究必不可少的一项内容。McC-ullough等通过一系列ELISA试验(夹心ELISA、液相ELISA、夹心竞争性ELISA、液相竞争ELISA及阻断性ELISA)和经典的中和试验逐一测定了免疫接种后的牛血清,所有这些体外免疫测     

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及检测PPV抗体的间接ELISA的建立

利用大肠杆菌表达51ku的猪细小病毒(PPV)VP2蛋白主要抗原表位区,通过Western-blot检测,表达蛋白具有良好的反应原性。利用此表达蛋白建立了检测PPV抗体的间接ELISA。通过检测32份阴性血清最终确定本ELISA的判定标准为:血清抗体效价0.18,判为PPV血清抗体阳性;血清抗体效价≤0.18,判为血清抗体阴性。此ELISA的批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%。用此ELISA与商品化PPV IgG检测试剂盒做符合性比较试验;结果,感染猪血清抗体检测符合率为100%,免疫猪血清抗体检测符合率为82%,非免疫健康猪血清抗体检测符合率为78%,样本总体检测符合率为80%。用建立的ELISA检测田间猪血清的PPV抗体,阳性率介于28.8%~37.5%之间,提示上述地区可能存在不同程度的PPV感染情况。本研究为PPV免疫或感染状况的检测提供了一种有用的定性诊断方法。     

ELISA检测鸭病毒性肝炎抗体的研究

本文报道用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鸭病毒性肝炎(DVH)抗体,并与琼脂免疫扩散试验(AGDP)进行了比较。ELISA的特异性与AGDP相一致;而在敏感性方面,ELISA的检出率为100％,而AGDP为60％。在ELISA抗体效价判定上,本文采用阳/阴血清OD值(P/N)≥2.1及阳性血清OD值不得小于0.4的综合阳性判定标准,减少了假阳性反应。研究表明,DVH抗体的ELISA检测法是一种快速、敏感,简便实用而准确的检测方法。     

PRRSV M蛋白基因片段的原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

利用PCR方法获得PRRSV M基因,使用原核表达系统p ET-28a(+)-BL21(DE3)诱导表达M蛋白。用表达的M蛋白建立检测PRRSV抗体的间接ELISA。通过特异性试验、阻断试验和重复性试验考查基于重组M蛋白建立的ELISA(M-ELISA)的实用性,同时使用M-ELISA和IDEXX Herd Chek ELISA for PRRSV试剂盒检测收集的400份临床血清样品。结果,用PCR扩增到了PRRSV M基因,获得了重组M蛋白,建立了用于检测PRRSV抗体的间接ELISA(M-ELISA);该M-ELISA具有良好的特异性和重复性。400份临床血清的检测结果与IDEXX试剂盒的检测结果的符合率为95.3%。上述结果表明,本研究基于表达的重组M蛋白,成功建立了检测RRSV抗体的间接ELISA。     

水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。     

仔猪副伤寒血清抗体水平与其保护力的相关性研究

用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot PPA ELISA ,对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组 14头仔猪和对照组 4头仔猪进行了血清抗体效价测定 ,并以沙门菌强毒攻击受试猪 ,测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明 ,以Dot PPA ELISA检测的仔猪副伤寒血清抗体几何平均效价不低于 2 8.2 时 ,85 .7%的猪能够抵抗沙门菌强毒的攻击。试验初步确定以Dot PPA ELISA进行猪群免疫监测时 ,血清抗体的几何平均效价 2 8.0 为仔猪副伤寒的保护临界标准 ,该标准的确定为集约化猪场用Dot PPA ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体 ,进行仔猪副伤寒的诊断、免疫监测及流行病学调查提供了科学依据     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法,监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5.0μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为D490 nm≥0.219,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性,适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。     

非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立

为建立一种能检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究以真核表达后纯化的ASFV p30重组蛋白作为包被抗原,以特异性单抗作为阻断抗体,经条件优化、特异性试验和敏感性试验,建立了一种检测血清中ASFV抗体的阻断ELISA方法.结果 显示,纯化后...     

新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法.通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET =0.201×P/N+4.632.应用该ELISA方法对表达NDV F基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关.攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性.     

检测猪睾丸细胞蛋白残留量的间接ELISA的建立

为建立猪睾丸细胞疫苗生物制品中宿主细胞蛋白残留量的ELISA检测方法,制备了猪睾丸细胞多克隆抗体,优化了间接ELISA试验条件,建立了ELISA检测方法。Western-blot结果显示,制备的猪睾丸细胞蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,抗体经过纯化后效价达1∶10 000。猪睾丸细胞蛋白的质量浓度为25~400ng/mL时线性关系良好。结果表明,用猪睾丸细胞蛋白建立的间接ELISA定量检测方法具有良好的线性关系、特异性和重复性。     

ELISA检测人工感染牛白血病毒绵羊抗体的研究

本病抗体检测方法以往多用补体结合反应和琼脂扩散试验,这些方法的敏感性有限,使对试验结果的分析不够深入,有时难以达到预期目的,为此,我们在牛白血病研究中,建立了检测绵羊BLV抗体的ELISA方法。     

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验,并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示,用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品,第1周抗体阳性检出率为50%,从第2周起抗体阳性检出率均为100%,而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好,-20℃保存18个月稳定,与其他病毒参考血清无交叉反应,与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83.3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测,结果,4个猪场阳性率高达90%以上,仅有2个猪场为阴性,其余猪场阳性率为10%~57%。     

酶联免疫吸附试验检测人工感染羊脑脊髓丝虫病抗体的研究

自从Voller等应用酶联免疫吸附试验(ELlSA)检测寄生虫病抗体以来,ELISA作为一种特异性强,灵敏度高的免疫学技术,已广泛应用于寄生虫病的诊断研究。 羊脑脊髓丝虫病是一种由牛腹腔丝虫感染期幼虫侵袭,而引起患羊中枢神经系统机能失调的寄生虫病。对于该病的免疫学诊断研究,相继有琼脂糖凝胶双向扩散试验和皮肤变态反应。应用ELISA检测羊脑脊髓丝虫病抗体的研究,尚未见有报道。本文应用微量间接ELISA,对21只人工感染羊的攻虫后系列血清进行检测,结果较满意。     

间接ELISA检测鸡大肠埃希氏菌菌毛抗体方法的建立

用大肠埃希氏菌O1、O2、O3、O78和O89株制备ELISA抗原,与抗鸡Ig单抗1B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法.经交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高;确立了将鸡血清100倍稀释检测ELISA效价(ET)的回归方法y=2.453+0.131x(P＞0.05),可用于定量测定.用IH与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比IH法敏感性高4-100倍.     

猪生殖与呼吸综合征血清抗体重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

以纯化的猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)重组N蛋白作为包被抗原 ,通过对各项试验条件的优化 ,建立起检测PRRS血清抗体的重组N蛋白间接ELISA检测方法。用此方法检测了2 0 0份血清样品 ,并与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测结果相比较 ,敏感性和特异性分别为 93%和95 % ,总符合率达 91%。 2种检测方法的结果之间差异不显著 (P >0 .0 5 )。试验表明 ,建立的间接ELISA检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于PRRS血清抗体的检测。     

粪肠球菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用超声波裂解法制备粪肠球菌的裂解物作为抗原包被酶标反应板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,成功地建立了检测致羔羊脑炎粪肠球菌抗体的间接ELISA.在此间接ELISA中,抗原最佳包被浓度为37.57μg/mL,被检血清的最佳稀释度为1100.建立的间接ELISA的灵敏度是微量凝集反应的25～100倍.交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法具有重复性好、特异性强、操作简便快速等特点.确立的检测ELISA效价的回归方程lg[1/ET]=1.275 2.730 D405mm,可用于抗体定量测定.利用此方法检测了来自未免疫绵羊场的50份成年绵羊的血清和50份羔羊的血清;结果,2份成年绵羊的血清为阳性,其他样品均为阴性.     

基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的阻断ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究以真核表达的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为包被抗原,以抗ASFV p72蛋白的特异性单克隆抗体为检测抗体,经条件优化,建立了特异性检测ASFV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,最佳抗原包被量为100 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶2,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000。该阻断ELISA方法的结果判定标准:当血清样品的PI≥41.84%时,判定为阳性;当血清样品的PI41.84%时,判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能与非洲猪瘟病毒阳性血清反应,与PRV、PCV2、PRRSV、CSFV和PPV等猪病疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检出1∶128稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒的对比检测结果表明,两种方法的符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法可以应用于ASFV抗体的检测,为ASFV流行病学调查及疫情监测提供了有效的检测手段。     

鹅副黏病毒NP蛋白间接ELISA检测方法的建立及免疫鹅抗体水平的检测

以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法 ,用该法检测 2 0份人工感染鸡血清样品 ,抗体阳性率为 10 0 % ,康复期鸡群血清抗体阳性率为 4 3% ,人工接种弱毒疫苗 6 5d和 170d鸡群血清抗体的阳性率分别为 6 0 %、70 %。经反复试验 ,确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件 ,即抗原包被浓度 10 .8μg/孔 ,待测血清最佳稀释度为 1∶10 0。