口蹄疫病毒O型和A型交互反应性单克隆抗体的筛选与鉴定

不同血清型口蹄疫病毒(FMDV)之间不能产生交叉免疫保护,但是血清学的交叉反应确实存在。本研究旨在建立一种筛选型间交互反应性抗体的方法,以期为解析FMDV血清型间保守的抗原结构奠定基础。本方法主要依据单个B细胞抗体技术,首先采用两种不同的荧光染料FluoProbes 647H和Pacific Blue分别标记O型与A型FMDV 146S灭活抗原,然后利用流式细胞分选技术,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出结合两种抗原的特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,并将可变区基因插入含有牛IgG抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建IgG抗体的重链与轻链表达质粒。将重链与轻链表达质粒共转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行完整抗体表达。结果显示,通过该方法获得了5株FMDV特异性单克隆抗体,其中4株(H64、R82、I16、R29)经间接免疫荧光(IFA)检测都可特异性识别O和A型FMDV;ELISA结果显示,H64、R82、I16与O、A型抗原均具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,I16可特异性结合O、A型FMDV结构蛋白VP2中的线性表位,说明在衣壳蛋白VP2上存在血清型间保守的抗原表位,通过本研究进一步加深了对FMDV抗原结构的认识。     

传代细胞支原体污染的快速检查

近年来国外报道支原体对细胞的污染相当普遍。有人提出,在引用已有文献结果时,都应考虑和分析所用的细胞是否存在支原体污染,如存在支原体污染,则相应实验结果的可靠性要重新加以考虑。     

不同牛血清培养BHK-21细胞系的试验

细胞培养技术已广泛应用于疫苗生产。本试验用不同品种不同年龄牛血清培养BHK-21细胞系,定期检测细胞的生长速率、形态、微生物污染及染色体变化等指标,以明确生产生物制品所用细胞的选择标准,进一步提高疫苗质量。(一)材料和方法1.试验材料:(1)BHK-21细胞系:代号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,其中Ⅰ、Ⅱ分别于1986年、1987年由中国兽药监察所购回,Ⅲ为1988年本所疫苗车间提供。     

浅谈家畜口蹄疫及其防制

口蹄疫（ＦＭＤ）是由口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）引起的牛、羊、猪等偶蹄动物以口腔粘膜及蹄部的特征性水泡病变为特征的急性流行性传染病,在一些国家零星散发或呈地方性流行,造成了巨大的经济损失。这些经济损失不仅表现在动物生产的性能方面,而且影响着国际间的动物及畜...     

双峰驼诱导排卵因子氨基酸组成的分析

分别测定了纯化的公驼精清诱导排卵因子７的活性和固定部分肽类的小肽氨基酸组成,证明活性位序易降解,这一特性与其所含的丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸等有关。     

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及检测PPV抗体的间接ELISA的建立

利用大肠杆菌表达51ku的猪细小病毒(PPV)VP2蛋白主要抗原表位区,通过Western-blot检测,表达蛋白具有良好的反应原性。利用此表达蛋白建立了检测PPV抗体的间接ELISA。通过检测32份阴性血清最终确定本ELISA的判定标准为:血清抗体效价0.18,判为PPV血清抗体阳性;血清抗体效价≤0.18,判为血清抗体阴性。此ELISA的批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%。用此ELISA与商品化PPV IgG检测试剂盒做符合性比较试验;结果,感染猪血清抗体检测符合率为100%,免疫猪血清抗体检测符合率为82%,非免疫健康猪血清抗体检测符合率为78%,样本总体检测符合率为80%。用建立的ELISA检测田间猪血清的PPV抗体,阳性率介于28.8%~37.5%之间,提示上述地区可能存在不同程度的PPV感染情况。本研究为PPV免疫或感染状况的检测提供了一种有用的定性诊断方法。     

口蹄疫联合免疫的研究进展

理想的疫苗应具有良好的免疫原性，一次接种则可产生巩固的终生免疫力，且无副作用。现在我们离这种“理想疫苗”的要求尚很远。除少数疫苗外，大多数疫苗都需要注射若干次，才能获得持久免疫力。在实际生产过程中，每头家畜都要接种多种疫苗，不仅接种次数繁多，而且容易...     

口蹄疫病毒Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型比较分析

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与2个牛源毒株之间具有21个特异性的氨基酸置换位点,分散在ORF范围内。猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S1具有与牛源毒株大量相似的氨基酸位点,并且与2株牛源毒株一样,都显示为小斑的蚀斑显型,而猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2在蚀斑试验中显示为大小斑混合存在。结果表明,猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2的变异位点对病毒蚀斑显型的改变具有重要意义。     

口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响

将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化 ,并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明 ,FMDDNA疫苗与 3D蛋白共同免疫豚鼠后 ,抗体水平没有明显提高 ,攻毒后的保护率为 2 5 %。     

改性壳聚糖缓释微球的制备及对口蹄疫病毒吸附力的初步观察

改性壳聚糖缓释微球的制备及对口蹄疫病毒吸附力的初步观察１）李冬肖昭彭陈志田陈应理宋明兰王宗子潘光武谢庆阁（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）辛嘉英（中国科学院兰州化学物理研究所）甲壳素（ｃｈｉｔｉｎ）是许多低等动物特别是节肢动物外壳的主要成分...