丹皮酚对ox-LDL诱导的大鼠血管内皮细胞黏附功能的抑制作用

目的:研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的大鼠单核细胞(MC)与大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)黏附的影响及丹皮酚(Pae)含药血清对其的抑制作用.方法:制备Pae含药血清并用RP-HPLC测定血清中Pae含量;改良沉淀法分离大鼠血清低密度脂蛋白(LDL),Cu2 氧化制备ox-LDL;组织块预消化贴壁法培养RAECs;大鼠淋巴细胞分离液分离单核细胞;孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定MC与RAECs的黏附功能.结果:ox-LDL在25～400 mg/L时呈剂量依赖性地诱导MC与RAECs的黏附,100 mg/L时促MC与RAECs黏附达最大值;ox-LDL与RAECs共育1 h即可明显促进黏附作用,3 h时达最大诱导效应.Pae含药血清在浓度为1.8～4.2 mg/L时,呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的黏附作用;4.2 mg/L孵育24 h时抑制作用最明显.结论:Pae对ox-LDL诱导的大鼠MC与RAECs黏附功能有抑制效应,Pae对ox-LDL介导的血管内皮细胞炎症环节的影响是其抗AS的作用机制之一.     

丹皮酚对脂多糖诱导的大鼠血管内皮细胞VCAM-1、TNF-α释放及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的观察丹皮酚(Paeonol,Pae)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)释放血管内皮细胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及Toll样受体-4(toll-like receptor,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路的影响,以阐明Pae抑制VECs黏附功能的分子机制。方法组织块预消化贴壁法分离培养VECs,采用LPS诱导VECs炎性损伤;健康大鼠灌胃给予Pae制备含药血清,反相高效液相色谱法测定血清Pae的含量;RT-PCR法检测TLR4mRNA的表达;凝胶迁移试验检测NF-κB蛋白的表达;免疫组织化学检测VCAM-1的表达;放射免疫法检测TNF-α的表达。结果 Pae含药血清(2.5,5,10μg/mL)作用于LPS诱导的VECs 24h,可抑制VECs中TLR4mRNA和NF-κB蛋白表达,以及VCAM-1和TNF-α分泌,呈现一定的剂量依赖性,其中Pae 10μg/mL的抑制作用均具有统计学意义(P0.05)。结论 Pae降低TNF-α的释放和VCAM-1水平,可能是通过下调LPS诱导的TLR4/NF-κB信号通路的活化而实现的。     

丹皮酚通过抑制线粒体氧化应激防止1-甲基-4-苯基吡啶离子损伤SH-SY5Y细胞

目的 探究丹皮酚（Paeonol，Pae）防止1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenyl pyridine, MPP+）损伤神经细胞的机制。方法 采用MPP+作用于人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y建立神经细胞损伤模型。采用甲基噻唑基四唑染色法检测细胞活力，采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，采用罗丹明123染色流式细胞仪分析SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的改变，采用Western blot法分析线粒体细胞色素C的表达。结果 0.1~10 μmol/L Pae可以剂量依赖性地抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡；10 μmol/L Pae能够升高细胞线粒体膜电位，减少MPP+引起的细胞内ROS的产生，降低细胞色素C的表达。结论 Pae可防止MPP+损伤SH-SY5Y细胞，其保护作用可能与减少SH-SY5Y细胞内ROS生成，增强SH-SY5Y细胞清除自由基的能力以及提高SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位水平有关。     

丹皮酚通过miR-21介导的p38 MAPK信号通路下调氧化低密度脂蛋白诱导的大鼠血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α释放

目的 观察微RNA-21（microRNA-21，miR-21）对p38丝裂原活化的蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase, p38-MAPK）信号通路的调控作用，探究丹皮酚（paeonol, Pae）抑制血管内皮细胞（vascular endothelial cell, VEC）损伤的机制。方法 组织块预消化贴壁法培养大鼠VEC；氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导VEC的损伤；用HiPerFect试剂将miR-21模拟物或抑制剂转染进入VEC；免疫印迹法检测p38 MAPK信号通路相关蛋白的表达；酶联免疫吸附试验检测VEC中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平。结果 ox-LDL明显提高VEC中Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平，并诱导VEC分泌TNF-α；miR-21高表达可升高TNF-α水平及Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平；Pae明显降低损伤的VEC分泌TNF-α水平，且抑制由miR-21高表达引起的TNF-α水平上升及p38 MAPK信号通路的激活。结论 Pae可抑制miR-21介导的p38 MAPK信号通路，减少ox-LDL诱导的VEC中TNF-α的分泌。     

加味四逆散对皮质酮、谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:观察中药加味四逆散(Jiawei Sinisan,JWSNS)对皮质酮(corticOSterone,Cort)、谷氨酸(glutamate,Glu)致PC12细胞损伤的保护作用.方法:以100,200,400 μmol/L Cort和10,50,100 μmol/L Glu以及50,100 ml/L JWSNS含药血清分别与PC12细胞共同孵育24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态,以甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率.选取200 μmol/L Cort和50 μmol/L Glu建立PC12细胞损伤模型,以MTT法观察50,100ml/L JWSNS含药血清各组对Cort和Glu所致PC12细胞损伤的保护作用.结果:不同浓度的Cort和Glu对PC12细胞的生长均具有抑制作用,随着浓度的升高,细胞损伤程度加重.各浓度的JWSNS含药血清对正常PC12细胞无毒性和不良反应.对Cort和Glu所致的PC12细胞模型,50ml/L JWSNS含药血清各组无明显抗损伤作用;Cort,Glu 100 ml/L JWSNS含药血清低、中、高各组细胞存活率分别为72.58%、87.11%、75.81%、69.35%、82.25%和70.97%,与Cort、Glu损伤模型组及正常血清组相比,细胞存活率明显升高,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:100ml/L JWSNS含药血清对Cort、Glu所致PC12细胞的损伤具有保护作用.     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 研究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.方法 以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1～100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达.结论 在0.1～100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关.     

苓桂术甘汤含药血清对过氧化氢诱导的乳鼠原代心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的 观察苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响。方法 建立H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型，将心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2模型组、空白大鼠血清（20%）组、苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）组，用苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%），分别预处理心肌细胞12 h后，加入100 μmol/L H2O2继续培养6 h，用MTT法测定心肌细胞存活率，比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase ，GSH- Px）活性及丙二醛（malonic dialdehyde，MDA）水平，用荧光核染色法观察细胞凋亡形态学变化，流式细胞术（Annexin Ⅴ- FITC/PI）检测细胞凋亡率，荧光探针法测定氧自由基水平。结果 与正常组比较，模型组心肌细胞活力明显降低（P<0.05），氧自由基、LDH活性及MDA水平均显著升高（P<0.05），SOD及GSH- Px活性均显著降低（P<0.05），细胞核浓染数目增加，细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，苓桂术甘汤含药血清组心肌细胞活力明显升高（P<0.05），GSH- Px、SOD活性均显著升高（P<0.05），LDH活性，氧自由基、MDA水平均显著降低（P<0.05），心肌细胞核浓染减少，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤能够清除细胞内氧自由基，抑制心肌细胞凋亡，增强细胞活性，对心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用。     

桃红四物汤保护2型糖尿病模型大鼠血管损伤的实验研究

目的 观察桃红四物汤对2型糖尿病模型大鼠胸主动脉的保护作用，并探究其作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型，桃红四物汤连续干预模型大鼠8周，观察模型大鼠胸主动脉的病理学变化，Western blot法检测胸主动脉核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）蛋白表达，RT-qPCR技术检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）mRNA表达，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量。结果 桃红四物汤可显著改善模型大鼠胸主动脉损伤；显著抑制模型大鼠胸主动脉NF-κBp65蛋白和MCP-1、VCAM-1 mRNA的表达（P<0.05），显著降低血清TNF-α、TGF-β1的含量（P<0.05）。结论 桃红四物汤可有效保护模型大鼠胸主动脉病理损伤，其作用机制与干预NF-κB信号通路，抑制MCP-1、VCAM-1、TNF-α和TGF-β1表达有关。     

丹皮酚对高脂血症大鼠肝脏脂质代谢及自噬的影响

目的 探讨丹皮酚（Paeonol,Pae）对高脂血症大鼠肝脏脂质代谢及自噬的影响,为揭示Pae抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）早期病变的作用机制提供依据。方法 采用维生素D2及高脂饲料联合应用法复制大鼠高脂血症模型,将大鼠分成Pae高剂量（300 mg/kg）、中剂量（150 mg/kg）、低剂量（75 mg/kg）组,雷帕霉素组（0.2 mg/kg）,阿托伐他汀组（5 mg/kg）,分别每天灌胃一次,连续6周,模型组和正常组给予等容量溶媒灌胃。采用全自动生化分析仪检测血脂和肝脂水平,光镜下对肝脏脂肪变性程度进行评分,电镜下观察自噬小体,免疫组织化学法观察肝脏中自噬相关因子微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型（microtubule-associated protein 1 light 3, type 2,LC3Ⅱ）、p62及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）的表达。结果 Pae可以降低血清和肝脏中甘油三酯、总胆固醇水平及肝系数,减轻肝脏脂肪变性程度,减少脂滴数量,促进自噬小体的产生,上调肝细胞中LC3Ⅱ、PPARγ表达,下调p62表达。结论 Pae可以促进脂质代谢并升高肝脏自噬小体形成及相关因子表达。     

雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株LP-1凋亡的诱导作用

目的 研究雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞LP 1凋亡的诱导作用及可能机制。方法 通过雷公藤红素体外作用于多发性骨髓瘤LP-1细胞，研究其对于细胞增殖及细胞凋亡的影响。采用EnoGeneCellTM细胞计数试剂盒 8(cell counting kit-8,CCK-8)研究雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响，采用膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ）-增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞株凋亡的诱导作用，采用级联酶底物显色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞Caspase-3酶原活化状态的影响。结果 雷公藤红素能明显抑制LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖，其半数抑制浓度（half inhibitory concentration, IC50）为0.881 7 μmol/L。雷公藤红素可诱导LP-1细胞发生细胞凋亡，此效应具有剂量依赖性，雷公藤红素60.0 μmol/L作用于LP-1细胞24 h可诱导细胞凋亡百分率达到80.7%。雷公藤红素可引起LP 1细胞Caspase 3酶原活化。结论 雷公藤红素可抑制多发性骨髓瘤细胞株增殖，诱导其凋亡，此作用可能通过Caspase 3酶原活化途径而实现。     

芪白平肺胶囊通过抑制PI3K/Akt通路促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的 从细胞水平探讨芪白平肺胶囊通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-ki-nasePI3K/蛋白激酶B(protein kinas B,Akt)通路对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmona-ry arterial smooth muscle cells,PASMCs)凋亡的影响....     

丹皮酚非离子表面活性剂囊泡的制备及其体外释放研究

目的 研究非离子表面活性囊泡对丹皮酚的包封作用及其体外释放行为的影响，为丹皮酚体内给药提供一种新的剂型，以期改善丹皮酚水溶性差、稳定性低等缺陷。方法 采用改进的乙醇注入法，利用非离子表面活性剂Span60、胆固醇、PEG- SA为囊材，以丹皮酚为模型药物，制备非离子表面活性剂载药囊泡，通过包封率、粒径和电位的测定等优化出最佳的工艺，采用正交试验确定最佳处方，研究表面活性剂囊泡在模拟体液中的释放行为。结果 表面活性剂囊泡的最佳处方为：Span60 80 mg，胆固醇30 mg，PEG15- SA 30 mg，丹皮酚30 mg，水合介质磷酸盐缓冲液（pH值＝7.4）60 mL。体外释放行为表明，表面活性剂囊泡具有明显的缓释作用。结论 该方法制备的PEG化丹皮酚非离子表面活性剂囊泡具有较高的包封率以及很高的稳定性，PEG化泡囊作为丹皮酚载体有着潜在的应用价值。     

珍灵口服液的主要药效与毒性研究

目的：对珍灵口服液进行主要药效及毒性研究。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）测定小鼠血清中IgG含量，采用植物血凝素（PHA）刺激淋巴细胞转化－－小鼠体内诱导法测定淋巴细胞转化率；用TBA反应比色法测定小鼠血清中脂质过氧化物（LPO）的含量，用NBT法（四氮唑蓝法）测定超氧化物歧化酶（SOD）的含量；并进行了急性和长期毒性试验。结果：小鼠血清IgG含量、淋巴细胞数、红细胞内SOD含量明显升高（P＜0．05或P＜0．01）；血清中LPO含量明显降低（P＜0．05）；未见毒性反应。结论：珍灵口服液能增强机体免疫力，并具有降低机体损伤的功能，是安全有效的保健药品。     

脑络欣通药物血清与胎牛血清诱导大鼠胚胎神经干细胞分化的比较

目的:比较脑络欣通药物血清与胎牛血清诱导大鼠胚胎神经干细胞分化的差异。方法:分别采用脑络欣通药物血清和胎牛血清诱导大鼠胚胎神经干细胞分化,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察。结果:脑络欣通药物血清和胎牛血清均可诱导绝大多数神经干细胞分化成神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。此外,脑络欣通药物血清还能在一定程度上促进培养的神经干细胞的增殖。前者诱导干细胞分化的进程比后者要慢,但其分化的神经细胞在细胞形态学上与发育成熟的神经细胞更为接近。结论:脑络欣通药物血清能够诱导神经干细胞分化,并使其分化更加成熟,且在一定程度上促进培养的神经干细胞的增殖。     

益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响

目的观察益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2表达的效应。方法制备接种肿瘤细胞的绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)模型,采用血清药理学方法制备益气养阴方含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与9.0 g/L氯化钠注射液(normal saline,NS)血清组对照。另外,用U14子宫颈癌细胞悬液经肌肉接种小鼠,观察小鼠实体瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF和MMP2在肿瘤细胞中的表达进行研究。结果益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与NS组比较差异具有显著性。益气养阴方组肺部转移结节较模型组明显减少,VEGF和MMP2的表达均明显低于对照组,差异有显著性。结论益气养阴方对肿瘤血管形成有明显抑制作用,降低VEGF和MMP2的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

软肝饮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢水平的影响

目的：建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方软肝饮对血清层粘;连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、血清Ⅲ型前胶原(Precollagen typeⅢ,PCⅢ)、肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,软肝饮小剂量(1g／kg),大剂量(2g／kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药;放射性免疫方法测定大鼠血清中HA、LN、PCⅢ含量;化学法测定肝脏羟脯氨酸含量。结果：软肝饮两个剂量组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中HA、LN、PCⅢ的含量,同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。结论：软肝饮通过对肝脏胶原物质代谢的影响而产生抗肝纤维化的治疗作用。     

山楂不同极性提取物对高脂血症大鼠血脂及血液流变性的影响

目的:观察山楂不同极性提取物对高脂血症大鼠血脂及血液流变学指标的影响.方法:采用大鼠高脂乳剂灌胃复制高脂血症大鼠模型,山楂分别用水、500 ml/L乙醇和950 ml/L乙醇提取浓缩制成提取物,在模型复制同时给予,给药5周后测定血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量和血流变学指标.结果:模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C明显高于正常对照组;山楂950 ml/L乙醇提取物组能明显降低TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平;山楂500 ml/L乙醇提取物组能明显降低TG水平和升高HDL-C水平;山楂水提物组仅明显升高HDL-C水平.山楂醇提取物对中、低切全血比黏度有显著降低作用.结论:山楂不同极性提取物具有不同的降脂效果,其中以醇溶性成分的降脂效果较为明显.     

电针大脑中动脉闭塞模型大鼠血清减轻体外新生乳鼠神经细胞的缺糖低氧损伤的作用研究

目的 观察"电针血清"对新生乳鼠皮质神经细胞糖氧剥夺/复氧(oxygen-glucose depriva-tion and reoxygenation,OGD/R)损伤的作用.方法 将成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组,采用电凝法复制大脑中动脉闭塞模型;7d后对各组大鼠进行腹主动脉取血,离心,抽取上清,分离新生...     

针刀疗法对腰椎间盘突出症根性神经痛大鼠血清IL-1和IL-6的影响

目的 观察针刀疗法对腰椎间盘突出症根性神经痛大鼠血清白细胞介素- 1（interleukin- 1, IL- 1）和白细胞介素- 6（interleukin- 6, IL- 6）含量的影响,探讨针刀疗法治疗腰椎间盘突出症根性神经痛的机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、针刀组,每组10只。采用非压迫性髓核突出模型,用热痛测试仪检测各组大鼠模型复制前后缩爪潜伏期;模型复制后第8天,采用双抗夹心ELISA法检测各组血清IL- 1、IL- 6含量。结果 与正常组和假手术组比较,模型组缩爪潜伏期差值显著升高（P<0.01）;与模型组比较,针刀组缩爪潜伏期差值显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组血清IL- 1、IL- 6含量明显增加（P<0.01）;与模型组比较,针刀组IL- 1、IL- 6含量明显减少（P<0.01）。针刀组大鼠神经根的髓鞘、轴突和雪旺细胞的病理变化较模型组明显减轻。结论 针刀疗法减轻腰椎间盘突出症根性神经痛的机制与其降低血清炎性细胞因子IL- 1和IL- 6有关。