Intermedin在大鼠急性心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Intermedin（IMD）对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的作用。方法72只健康雄性sD大鼠随机分为3组：对照组;缺血再灌注组（缺血1h再灌30min）;IMD预处理组（缺血再灌注前30min静脉注射10^-7mol／LIMD）。检测血清中LDH、心肌中MDA和SOD活性;半定量实时荧光PCR法检测心肌降钙素受体样受体（ealcitonin receptor like receptor,CRLR）、受体活性修饰蛋白（receptor activity modiying protein,RAMP）1／2／3的mRNA表达水平;酶联免疫吸附法（ELISA）测定心肌cAMP含量,SABC法检测Bcl-2／Bax蛋白表达及比值。结果与对照组比较,缺血再灌注组大鼠LDH、MDA分别升高87％和189％,SOD活性下降84％,IMD预处理组LDH、MDA均降低41％,SOD活性升高38％（均P〈0．01）;实验组心肌CRLR、RAMPl／2／3的mRNA水平均明显上调（P〈0．05或P〈0．01）,与对照组心肌cAMP相比,缺血再灌注组和IMD预处理组分别升高1．36、2．90倍（P〈0．05）。Bcl-2／Bax表达比值,缺血再灌注组较对照组降低,IMD预处理组亦低于对照组但高于缺血再灌注组2．225倍。结论IMD对大鼠急性缺血再灌注损伤的心肌有一定保护作用,减少缺血再灌所致的氧化应激,抑制心肌细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

血浆中组织蛋白酶L在大鼠急性心肌缺血及缺血再灌注后的表达

目的 检验大鼠心肌缺血及缺血再灌注后组织蛋白酶L在血浆中的表达,探讨其能否作为心肌缺血标记物.方法 建立大鼠急性心肌缺血模型（心肌缺血30 min、1h、2h组）、缺血再灌注模型（缺血再灌注组）以及异氟烷预处理后的缺血再灌注模型（异氟烷预处理组）.同时设有正常对照组、假手术组以作对照.用ELISA法检验血浆中组织蛋白酶L的含量,同时用TTC染色测量心肌梗死面积. 结果 大鼠急性心肌缺血后,各组血浆中的组织蛋白酶L含量与正常对照组、假手术组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.缺血再灌注组,血浆中组织蛋白酶L的表达增多到正常对照组2.37倍（P＜0.05）.异氟烷预处理组血浆组织蛋白酶L和心肌梗死面积都较缺血再灌注组降低（P＜0.05）.结论 血浆中组织蛋白酶L不适合作为单纯急性心肌缺血的早期血浆标记物,异氟烷预处理可以降低缺血再灌注造成的血浆组织蛋白酶L高表达.     

急性酒精中毒对大鼠溺死后肺组织硅藻检出的影响

目的急性酒精中毒对大鼠溺死后肺组织硅藻检出的影响。方法将40只大鼠随机分为5组,进行酒精灌胃,灌注量分别为:正常组(0m L/kg)、低剂量组(7m L/kg)、中剂量组(15m L/kg)、高剂量组(22m L/kg)、死后抛尸组(0m L/kg)。观察各组大鼠行为变化、溺水时生存能力及死后肺组织中硅藻检出量。结果高剂量组呼吸出现浅慢,呼吸停止时间减少(P0.05)。酒精灌注各组大鼠攀附时间均减少(P0.05),肺组织硅藻检出量均减少(P0.05)。结论急性酒精中毒可以导致大鼠溺死后肺组织硅藻检出量减少。     

实验性急性心肌梗死心肌K~+/Na~+、Mg~(2+)/Ca/~(2+)Zn~(2+)/Cu~(2+)比值变化的研究

用结扎家免左冠状动脉建立急性心肌梗死区的模型,探讨梗死区心肌中K~+/Na~+、Mg~(2+)/Ca/~(2+)、Zn~(2+)/Cu~(2+)比值的变化与急性心肌梗死发生时间的规律。结果提示:(1)K~+/Na~+、Mg~(2+)/Ca/~(2+)比值随心肌缺血时间延长呈进行性下降。K~+/Na~+比值在60min、120min实验组与对照组比较有显著性差异(P<0.01);(2)Zn~(2+)/Cu~(2+)比值各实验组与对照组比较无显著性差异(P>0.05),但实验组随缺血时间延长,Zn~(2+)/Cu~(2+)比值呈下降趋势,120min组比15min、30min、60min组降低约1/2(PC<0.01)。测定心肌梗死区K~+/Na~+、Mg~(2+)/Ca/~(2+)比值可以作为显示和判定急性心肌梗死的重要指标。     

大鼠死后心肌骨骼肌细胞肌动蛋白变化及与死亡时间的关系

目的　探讨大鼠死后心肌骨骼肌细胞肌动蛋白的变化及其与死亡时间的关系。方法　采用免疫组化S P法和IBSA图像分析系统 ,观测大鼠死后不同时间心肌骨骼肌抗肌动蛋白单克隆抗体 (HHF3 5 )染色变化。结果　在大鼠死后 5 4h内 ,心肌骨骼肌呈不同程度的HHF3 5缺染 ,其面积随死后时间的延长而增大。经对IBSA图像分析数据进行方差分析 (F心肌 =5 88 2 7,F骨骼肌 =3 5 1 2 5 ,P <0 0 5 ) ,具有显著性差异 ;经逐步回归分析 (r心肌 =0 943 ,r骨骼肌 =0 95 8,P <0 0 5 ) ,具有正相关关系。所建方程y心肌 =-3 0 5 68+1 0 0 3x1,y骨骼肌 =-2 4 897+0 986x2 (X为HHF3 5缺染面积均数 )具有统计学意义。结论　在一定时间内 ,大鼠死后不同时间心肌骨骼肌细胞HHF3 5缺染面积 ,随死后时间的延长而增大。     

硫化氢对创伤应激引起大鼠急性肝损伤的作用

目的探讨硫化氢(H_2S)在挤压大鼠后肢致急性肝损伤过程中的作用。方法将大鼠随机分为对照组、挤压组、H_2S供体硫氢化钠(Na HS)+挤压组、H_2S生成抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PAG)+挤压组。用标准重物挤压大鼠后肢建立急性肝损伤模型,分别于挤压结束后30、120 min处死大鼠。比色法检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,化学法检测大鼠血浆H_2S、肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、蛋白质羰基、谷胱甘肽(glutathion,GSH)含量和H_2S生成酶胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CSE)活性,RT-PCR半定量检测肝组织CSE m RNA的表达。结果挤压大鼠后肢可引起血清AST、ALT活性增高,肝组织MDA、蛋白质羰基含量增加及GSH含量降低,血浆H_2S含量减少,肝组织CSE活性降低、CSE m RNA表达下降。预先给予Na HS可显著减轻、而PAG明显加剧挤压后肢所致上述肝损伤改变。结论 H_2S生成减少参与介导创伤应激引起的大鼠急性肝损伤。     

淡水溺死大鼠肺组织与血清中IL-1α、IL-1β和IL-13mRNA表达

目的检测溺死大鼠肺组织和血清中白细胞介素(interleukin,IL)-1α、IL-1β、IL-13 m RNA的变化,探讨其在法医学溺死诊断鉴定中的潜在价值。方法 18只SD大鼠随机分为溺死组、空白对照组和心肌梗死组(对照)。分别收集各组大鼠右心室血清及右肺下叶、心肌,应用Taq Man探针法检测肺组织及右心室血清IL-1α、IL-1β、IL-13 m RNA的表达情况。结果与空白对照组及心肌梗死组比较,溺死组大鼠肺组织IL-1α、IL-1β及IL-13 m RNA表达差异均无统计学意义(P0.05),右心室血清IL-1β、IL-13 m RNA表达升高(P0.05)。空白对照组与心肌梗死组比较,血清中IL-1α、IL-1β及IL-13 m RNA表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论细胞因子IL-1β及IL-13 m RNA在溺死后大鼠右心室血清中表达量均有改变,表明其变化与溺死密切相关。     

HMGB1在创伤引起大鼠肺组织内质网应激中的作用

目的探讨高迁移率族B1(high mobility group B1,HMGB1)蛋白在创伤引起大鼠肺组织内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)变化中的作用。方法用标准重物挤压大鼠双后肢建立创伤应激致大鼠急性肺损伤模型。第一部分实验将大鼠随机分为体位对照组和挤压后6 h、18 h和30 h组,第二部分实验分为体位对照组、挤压后18 h组、HMGB1抑制剂正丁酸钠组和挤压后18 h+抑制剂组。用蛋白质印迹法检测肺组织HMGB1以及ERS相关蛋白(GRP78、caspase-12、CHOP和IRE1α)的表达变化。同时,常规HE染色观察肺组织病理学改变。结果与体位对照组比较,挤压大鼠后肢可引起肺组织中ERS相关蛋白(GRP78、caspase-12、CHOP和IRE1α)以及HMGB1蛋白表达明显增高,挤压后30 h时上述蛋白表达降低但仍高于体位对照组,同时大鼠出现明显肺损伤病理变化。与挤压后18 h组比较,挤压后18 h+抑制剂组大鼠肺组织中上述ERS相关蛋白及HMGB1蛋白表达降低,大鼠肺损伤病理变化减轻。结论创伤应激能启动HMGB1-ERS通路导致大鼠急性肺损伤。     

判别函数在同胞鉴定中的应用

目的探讨判别函数法在全同胞与半同胞鉴定中的应用价值。方法根据360对全同胞、90对半同胞及360对无关个体的15个STR基因座分型结果,计算全不同(X0)、半相同(X1)和完全相同(X2)的基因座数目,分别根据DFS1=3.898X0+3.973X1-19.481,DHS1=5.687X0+5.300X1-35.112及DR1=7.309X0+5.533X1-44.941的全同胞/半同胞/无关个体判别函数、DFS2=3.872X0+3.931X1-18.895及DR2=7.303X0+5.473X1-44.298全同胞/无关个体判别函数和DHS3=10.227X0+10.436X1-66.102及DR3=11.863X0+11.089X1-79.494半同胞/无关个体判别函数进行判别。结果判别准确率:①用全同胞/半同胞/无关个体判别函数,全同胞组为83.61%,半同胞组为81.11%,无关个体组为83.06%;②用全同胞/无关个体判别函数,全同胞组为96.39%,无关个体组为98.61%;③用半同胞/无关个体判别函数,半同胞组为88.89%,无关个体组为85.00%。结论本文3种判别函数可应用于同胞鉴定,尤其运用全同胞/无关个体判别函数判断同胞关系准确率高,有较高的应用价值。     

急性心肌缺血再灌注HSP70及c-Fos的免疫组织化学研究

运用免疫组织化学方法 ,观察心肌缺血后不同时间再灌注HSP70及Fos蛋白在心肌组织不同区域表达的规律 ,为心肌缺血 /再灌注损伤所致心性猝死的法医学诊断提供形态学依据。结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血 /再灌注模型 ,取缺血区域 (左冠脉前降支供血区 )及非缺血区 (右心室 )心肌组织。结果显示 :对照组正常心肌组织无Fos蛋白及HSP70表达。Fos蛋白在心肌缺血 15min再灌注 0 5h后即在缺血区域表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域 1h始有表达 ,缺血区域表达明显强于非缺血区域。HSP70在心肌缺血区域再灌注 1h后始有表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域心肌 2h始有表达 ,且明显弱于缺血区域。同时发现再灌注早期HSP70及Fos均先于心肌内层表达 ,随着时间延长其表达向心肌外层扩展。Fos在再灌注 0 5h时主要在心肌内层表达 ,1h时已扩展到心肌全层 ,4h时其心肌外层表达明显强于心肌内层。HSP70在再灌注 1、 2h时主要在心肌内层表达 ,4、 6h时表达扩展至全层心肌。心肌缺血 /再灌注早期不同时间HSP70及Fos表达有不同的区域性及强度 ,此可为心肌缺血 /再灌注的早期诊断提供一项新的辅助诊断依据     

4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕DNA效果的比较

目的探讨4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕样本DNA的效果。方法含有1μL静脉血的滤纸血痕180份,分为4组,每组45份。分别采用4种固相颗粒吸附法(DNAIQ~(TM)系统、D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规的硅珠法)对上述样本进行DNA提取,对比各组DNA溶液的浓度及STR分型检验结果。结果 D盾超敏DNA提取试剂盒[(3.764±1.790)μg/mL]、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒(3.634±1.112)及常规硅珠法(3.350±1.250)提取到DNA溶液的浓度无统计学差异(P0.05),但均高于DNA IQ~(TM)系统(1.864±1.207)(P0.001);D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法样本图谱峰高大于DNA IQ~(TM)系统(P0.001),超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠法样本图谱峰高大于D盾超敏DNA提取试剂盒(P0.01)。结论 D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法对于滤纸血痕的DNA提取效率高于DNA IQ~(TM)系统;超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠提取到的DNA溶液可能具有更高的质量。     

颅内出血患者血清IL-6、TNF-α变化在法医临床鉴定中的意义

目的探讨颅内出血患者血清IL-6、TNF-α的水平变化及在法医学的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对颅内出血患者住院后不同时间段血清IL-6、TNF-α水平进行检测,并与正常对照组的健康受试者进行比较分析。结果研究组重型与轻型患者后第1、3、5、7天血清IL-6、TNF-α水平较正常对照组明显增加,重型患者入院第5、7天的血清IL-6、TNF-α较轻型患者明显增加,差异有统计学意义(P0.05);根据患者最后结果(死亡组和存活组),发现死亡组随着时间延长,在第5、7天时IL-6、TNF-α水平显著高于存活组(P0.05)。此外,血清IL-6和TNF-α水平呈正性显著相关(r=0.721,P0.05)。结论检测颅内出血患者血清IL-6、TNF-α水平对观察其病情变化有重要意义,可作为法医学鉴定的辅助手段。     

致命室性快速心律失常心室肌能量的代谢改变与氧化损伤

目的探讨致命室性快速型心律失常(LVTA)能量代谢相关变化及氧化损伤。方法建立以乌头碱(ACO)注射和冠脉结扎(CAL)心肌缺血诱导的LVTA-心脏性猝死(SCD)SD大鼠模型,以过度麻醉(PI)及冠脉结扎心衰致死(CAL-B)为各自对照,检测心室肌线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、磷酸肌酸(PCr)及血清肌钙蛋白I(cTnI)含量,并进行比较。结果成功制备ACO-LVTA及CAL-LVTA大鼠14只及6只。与各自的同行对照比较,ACO-LVTA组及CAL-LVTA组心室肌的ROS及MDA呈升高的趋势,PCr呈下降的趋势,其中CAL-LTVA的MDA显著高于其同行对照(P0.05)。ACO-LVTA组心室肌的MMP低于对照组,但高于CAL处理的两组。CAL-LVTA组血清cTnI高于对照组,且显著高于ACO-LVTA组及其对照与处理前(P0.01),ACO-LVTA组血清cTnI高于对照组与处理前。心肌ROS水平与VT及VF持续时间相关(P0.05),相关系数分别为0.44、0.46。结论发生LVTA后,心室肌MMP及PCr下降、ROS、MDA升高,血清cTnI升高,表明LVTA可导致能量代谢改变及氧化损伤,可能与线粒体功能异常相关。     

家兔低压电击伤后血清LDH和HBDH活性变化

目的研究家兔非热低压电击伤后不同时间乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和羟丁酸脱氢酶（hydroxybutyrate dehydrogenase,HBDH）活性的变化．为I临床和法医学非热电击伤提供诊断依据。方法健康新西兰大白兔40只,随机分为对照组和电击伤后7个时间点的实验组,每组5只。实验组使用本室已建立的非热低压电击伤方法处理,电击后各实验组动物按照预定时间点麻醉后抽取5mL心室血．测定血清LDH,HBDH酶活性。结果在非热低压电击伤后家兔目标血清酶活性发生了动态变化,有一定规律性,其中LDH活性在电击伤后4、12h和1、2、3d明显升高（4、12h和1d P〈0．01;2和3d P〈0．05）;HBDH活性在电击伤后2和3d明显升高（P〈0．05）;电击组HBD肌DH比值在2、4和12h与对照组比较显著降低（P〈0．01）。结论动态监测LDH、HBDH活性,可为非热电击损伤的诊断,损伤时间推断提供理论依据。     

H2O2诱导PC12细胞凋亡前后miRNA的变化及探讨

目的用微小RNA(miRNA)基因芯片技术检测H2O2诱导凋亡的PC12细胞和正常PC12细胞miR-NA的表达谱差异。方法分别以不同浓度的H2O2处理PC12细胞12h,用MTT和流式细胞仪检测处理后细胞的生长活力和凋亡情况;分别提取A(0浓度H2O2处理组)和B(400nmol/LH2O2处理组)PC12细胞的miRNA做miRNA基因芯片检测。结果以A组作为对照,30、50、100、200、400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞生存率分别为(92±9.80)%、(90±14.70)%、(80±13.85)%、(54±12.33)%、(22±7.35)%(P<0.01);0、30、50、100、200和400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞早期凋亡率分别为2.6%、5.2%、7.2%、10.4%、16.6%、72.2%;在样品A中共筛选出68个有效表达的miRNA分子数据,在样品B中筛选出46个有效表达的miRNA分子数据,两者样品中均检测到有效表达的miRNA分子有39个,其中与样品A相比,在样品B中显著性下调表达的有6个。结论为脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡的机制和治疗的研究提供了理论依据和新的研究思路。     

创伤致休克和多器官功能不全综合征中的细胞凋亡研究

研究创伤致休克和多器官功能不全综合征中的细胞凋亡 ,探讨细胞凋亡在创伤性休克和多器官功能不全综合征中的发生机理及其在法医学上的应用。用TUNEL末端标记、流式细胞仪等方法 ,对广泛软组织挫伤死亡尸解15例的肝、肾、心、脑等组织进行凋亡检测。其中因创伤性休克死亡 10例 ;因MODS死亡 5例。TUNEL末端标记法检测 :创伤休克组肝、肾、心、脑的细胞凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ;创伤MODS组肝、肾、心、脑的细胞凋亡指数 (AI)明显高于创伤休克组和对照组 ,经统计学处理有显著性差异 (P <0 0 1)。流式细胞仪检测 :创伤休克组肝、肾、心、脑的凋亡峰值分别为 2 0 3 %、 19 1%、 18 6 %、 30 0 % ;创伤MODS组肝、肾、心、脑的凋亡峰值分别为 42 2 %、 45 1%、 39 7%、 6 2 9%。创伤致休克和MODS死亡人体尸解器官中细胞凋亡增多。     

LC-MS/MS analysis of pholedrine in a fatal intoxication case

Pholedrine (4'-hydroxymethamphetamine) is a cardiovascular agent exerting hypertensive and adrenergic effects. High doses may cause a drop in the peripheral circulation blood flow and increase blood pressure, heart rate and body temperature up to a state of central respiratory paralysis. A 15-year-old girl who suffered from heavy agitation and hallucinations was admitted to the intensive care unit in a comatose state. The clinical findings included a maximum heart rate of 170 bpm and a body temperature of 43.8 degrees C. Resuscitation measures were in vain and abandoned after approximately 2h. A toxicological emergency analysis using GC/MS revealed a considerable amount of pholedrine in blood and urine. A method for determining pholedrine in human body fluids utilizing high-performance liquid chromatography (HPLC)/tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) with a turbo ion-spray source was developed, using D11-methamphetamine and D5-methylenedioxymethamphetamine as internal standards. Samples were prepared by SPE extraction using SPEC-C18AR/MP3((R)) columns, which yielded the best extraction recovery (67%). Chromatographic separation was achieved at pH 5 on an RP-18 stationary phase applying gradient elution from 50 to 70% of B (methanol/acetonitrile 3/1 (v/v), 0.02% acetic acid) in A (5mM ammonium acetate/acetonitrile 95/5 (v/v), 0.02% acetic acid). Supra-pure acetic acid was added to the post-column effluent with a flow rate of 0.2 microl/min to optimize ionization. Detection was carried out in the positive ionization, multiple reaction monitoring (MRM) mode. The chromatograms showed no interference from other substances. The limit of detection (LOD, S/N=3) of pholedrine was 0.8 ng/ml and its lower limit of quantification (LLOQ, S/N=10) 3ng/ml. The calibration curve was linear (r=0.999) in the range 1-100 ng/ml. Samples with higher concentrations were diluted to suit the working range. The intra-day R.S.D. between 5 and 80 ng/ml were 3.8-8.7% and the inter-day R.S.D. between 5 and 100 ng/ml were 6.7-10.7%. The pholedrine concentrations in blood and urine collected when the girl was still alive were 16.1 microg/ml (R.S.D. 10.5%) and 1120 microg/ml (R.S.D. 8%), respectively. In post-mortem samples, they were 23.0 microg/ml (R.S.D. 5.1%) in heart blood and 27.3 microg/g (R.S.D. 6.6%) in the liver.     

河南汉族群体20个常用STR基因座突变分析

目的观察20个常染色体STR基因座突变在河南汉族人群中的分布情况。方法从3011例确认亲子关系的亲子鉴定案例中筛查基因突变事件,确定突变来源,统计各STR基因座的突变率,分析突变规律并与部分不同地区的人群STR基因座突变情况进行比较分析。结果在20个STR基因座中观察到19个基因座的发生的76次突变事件,平均突变率为0.08%累计突变率达到1.662 9%;父、母源性突变的比率大致为8:1;河南汉族人群在Penta E和D12S391基因座突变率明显低于北方汉族人群(P0.05);在D6S1043、CSF1PO和D12S391基因座突变率明显低于广东人群(P0.05);在CSF1PO基因座突变率明显低于云南汉族人群(P0.05)。结论 STR基因座突变现象较为常见,不同基因座的突变率存在着明显的地区差异。