MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较CSCD

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

血痕中类粘蛋白型(ORM)分型方法的研究及基因频率的调查

本研究应用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦加免疫固定技术对人血痕进行类粘蛋白型(ORM)分型,并调查了264名北京地区无血缘关系健康献血员ORM表现型,结果ORMl F1 48.9％;ORM1 F1S 37.5％;ORM1 F1F2 3.0％;ORM1 S 9.8％;ORM1 F2S 0.8％;经吻合度检验符合Hardy-Weinberg氏定律。其基因频率F1为0.6913;F2为0.2897;S为0.0189。电泳图谱清晰;分辨力好,可清楚地辨认F1、F2带;灵敏度高,检材用量仅5×2mm(血纱布);室温保存的血痕检材检出时间可长达一年半。     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

应用免疫斑点法检验微量陈旧血痕种属的实验

检验血痕种属的方法很多。从古老的沉淀环到目前所应用的ELISA法、主要适用于比较新鲜的血痕，而对陈旧血痕及其它受物理因素影响的血痕效果不佳。本文提出一种用1／氨水液提取血痕，ELISA法检验种属的较佳方法。经反复试验，以肉眼观察颜色变化判断结果，可以测得长达33年陈旧血痕，而各种动物实验对照无非特异性反应，给种属检验提供一个新的途径。材料和方法l．试剂l％低脂奶粉；兔抗人IgG酶标抗体（北京生物制品所）PHg．6的CBS和PH74的TBS缓冲液；1％氟水溶液；O．85％生理盐水；国产硝酸纤维素膜（NC）。2．检材室温保存11…     

10起案件陈旧微量生物检材的DNA检验分析

正作者对濮阳市1992-2002年间未破命案进行了梳理,收集了其中10起命案的生物学检材,进行STR检验,得到较理想的结果,并侦破了4起命案,现报道如下。1材料与方法1.1样本来源10起未破命案检材30份。(1)精斑类检材10份(内衣4份、阴道擦拭物4份、床单2份);(2)血痕类检材11份(木质载体2份、金属载体3份、棉纱载体6份);(3)接触类检材9份(提包1个、手表5只、     

TH01基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料2010年,本市发生1起入室盗窃案,现场提取血痕2份、烟蒂1枚。采用Chelex法提取检材DNA,使用Identifiler试剂盒10μL体系在AB 9700型扩增仪上进行扩增;扩增产物经AB 3130型遗传分析仪检测,GeneMapperID V3.2软件进行分析。结果血痕、烟蒂为同一个体所留,其中TH01基因座为纯合子(7)。     

用引物Y_3,Y_4和DNA扩增技术作血液(痕)和毛根性别鉴定的研究

作者用引物Y_3、Y_4和DNA聚合酶链式反应(PCR)作微量人类血液(痕)和毛根的性别鉴定。扩增的靶序列位于Y染色体DNA特异3.4kb重复序列中,扩增产物为460bp。检材用量为:新鲜血液0.5μl、血痕纱纤维1mm、毛根单个。20例保存4个月的血痕与2例保存6年半的血痕性别判定结果均正确,无性别记载的保存9～11年的3例血痕显现了清晰的460bpY特异DNA扩增带。15例保存20天的自然脱落毛根性别判定结果均正确。本法省略了检材处理中的酚-氯仿抽提DNA等纯化步骤,既简化了实验操作,又减少了检验过程中外源DNA的污染机会和样品DNA的损耗,使这一性别鉴定方法更符合法医学实践的需要。     

利用犬STR基因座检验认定犬精斑1例

1　案情简介2 0 0 3年 7月 2 3日 ,某地发生一起恶性强奸案 ,犯罪嫌疑人万某将其前女友骗至其家中 ,将该女灌醉后强奸 ,随后万某将其所饲养的雄性大丹犬的生殖器插入该女的阴道 ,并推犬的臀部 ,直至该犬射精。2　检验情况收检的检材包括受害人、犯罪嫌疑人、血痕、大丹犬的血痕 ,受害人的阴道擦拭物。阴道擦拭物酸性磷酸酶试验阳性 ,镜检可见精子。采用二步消化法提取阴道擦拭物中的精子DNA ,用chelex - 10 0树脂法提取受害人、犯罪嫌疑人及犬的血痕DNA ,分别用ProfilerPlus(ABI)、CanineI ,Version 3.0 (ABI)两个试剂盒对上述检材进…     

一种改良Chelex地方法提取血痕DNA

对于新鲜或量足的血痕,采用文献报道的Chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得满意结果,但在日常检案过程中,陈旧而量少的血痕检材经常遇到,而且载体可能有泥沙、色素或吸附力强等PCR扩增抑制物的存在.这类检材DNA采用普通的Chelex-100快速提取法,有时很难奏效.针对以上问题,本文结合两例检案,对血痕DNA的Chelex-100快速提取法进行了一些改良,显著提高了检出率,使检案成功,报告如下:1 材料与方法1.1 材料:取自本实验室检验的两案例中的22份血痕.     

血痕载体对ABO血型检验的影响

在一些刑事案件中,由于受到案发现场与当时环境所限,有时还缺乏对血痕规范化提取的认识和把握,从而致使现场提取的血痕所用载体种类各异,不仅给检验过程带来了诸多不必要的麻烦,而且对检验结果的判定也会造成不同程度的影响。本文就检案过程中经常遇到的检材载体作一初步对比分析。1　检　材随机抽取既往办案过程中保留存放下来的检材138份:其中医用纱布为载体的检材77份;化纤类为载体的检材2 7份;脱脂棉为载体的检材16份;卫生纸为载体的检材18份。2　试剂及方法血清采用公安部物证鉴定中心制备的标准抗A、抗B、抗H血清。指示红细胞采用新…     

D20S161和D8S384两个基因座在法医学中的应用

评估D2 0S16 1和D8S384两个基因座在法医学中的应用价值。用自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒 ,对人血、人精液、人唾液、动物血、人血与动物血的混合检材和人血痕、人精液斑、人唾液斑、动物血痕、人血与动物血的混合斑痕检材 ,以及陈旧血痕检材进行检测分型 ,并用这两个基因座PCR引物序列与DNA数据库进行联网对比分析。自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血、人精液、人唾液、人血与动物血的混合检材分型 ,而动物血没有PCR产物 ;自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血痕、人精斑、人唾液斑和人血与动物血的混合斑痕检材正确分型 ,而动物血痕没有PCR产物 ;斑痕检材分型结果与对应体液检材分型结果无差异 ;5 0份陈旧血痕检材全部获得阳性分型结果。DNA数据库联网比较提示 ,D2 0S16 1和D8S384基因座引物除了能与各自的模板序列发生特异性扩增外 ,理论上不能与DNA数据库中 6 0 6 36 4种已知序列产生PCR产物。D2 0S16 1和D8S384两个基因座具有高度的种属特异性 ,抗污染能力强 ,不易受降解的影响 ,是解决法医现场生物检材个人识别和亲子鉴定的理想手段     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

混合精斑DNA三种提取方法的比较

在法医物证学上,对于混合斑检材,一般采用Chelex法[1,2]抽提DNA,由于得率和纯度较低,检测存在失败的可能。为了提高成功率,作者对检案过程中抽提DNA的步骤进行了优化,现报道如下。1材料与方法1.1检验材料1号检材为卫生巾,2号检材为卫生纸,3、4号检材均为蓝色内裤,其中3号检材较脏且混有血痕。分别剪取1～4号检材微量,涂片经伊红美兰染色,镜检,1、2、4号检材均检见人精子,3号检材检见大量上皮细胞及少量人精子。1.2仪器与试剂梯度PCR仪(德国,Eppendorf);DYY-Ⅲ-4型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);人STR六个双基因座复合扩增银染试剂…     

血痕HBsAg的检测在个人识别中的应用探讨

用乙肝表面抗原酶联免疫诊断盒检测ＨＢｓＡｇ携带者的血痕中ＨＢＳＡｇ，并采用盲法试验与血清检材进行比较．结果表明，本法检测血痕检材中ＨＢｓＡｇ与血清检材的结果一致，能准确检测出保存一个月的血痕中之ＨＢｓＡｇ．ＨＢｓＡｇ较相对稳定地存在于乙型肝炎患者和ＨＢｓＡｇ携带者血液中，通过检测其血痕中的ＨＢｓＡｇ能识别这种个体．在个人识别中具有重要意义．本方法操作简便，经济，省时，适合基层应用．     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

玻片法快速鉴定微量血痕种属的应用分析

采用杨军意报道方法[1]，笔者检测了1993年至1995年24例实际案件共75件血痕检材，获得满意的效果。现将应用情况作一回顾分析。案例应用1．案件性质24例实际破案，凶杀16例，抢劫2例，伤害2例，交通肇事4例。共提取可疑血痕检材75件。2．载体条件水泥墙上ZO件，石灰墙上10件，铁器上15件，木质上8件，衣服上Ic件，玻璃上2件，纸张上3件，橡胶上2件，皮革塑料上5件。3．血痕时间最短1天，最长1年，一般3天至2周。4．检村提取能直接提取的直接提取，不能直接提取的转移到脱脂纱线上。5．检验及结果按杨氏‘’文中介绍方法，配成聚乙二醇一抗…     

室外毛巾上腐败血痕STR分析1例报道

1材料与方法1.1案例2006年某日,深圳市某山顶发现一具高度腐败女尸,现场提取一块方形小毛巾(有灰黑色可疑血痕),送检做DNA检测。1.2方法1.2.1提取DNA方法一:常规Chelex-100法[1]提取方形小毛巾上可疑血痕。方法二:应用德国QIAGEN公司生产的BioRo-bot EZ1全自动核酸纯化仪[2](以下简称BioRobotEZ1)提取方形小毛巾上可疑血痕。(1)剪取适量检材,置0.5 ml Eppendorf管中,加入EZ1试剂盒(EZ1 DNA Tissue Kit(48)(Cat.No.953034))中试剂BufferG2 190μl,PK 10μl,56℃裂解30 min,去载体将裂解液转移置2.0 ml样本管中。(2)在BioRobo…     

50例强奸案混合斑中精子ABO基因分型

自 1990年Yamamoto[1] 报道了ABO基因的核苷酸序列以来 ,国内外学者们致力于建立ABO基因型的测定方法 ,如PCR RFLP法[2 ] 、PCR 直接测序[3] 、PCR SSCP法[4 ] 等。但由于ABO基因分型操作烦琐 ,个体识别率低 ,很少被应用于法庭科学实践。本研究对HerrinG[5] 方法进行改良 ,运用PCR RFLP技术 ,检测 5 0例经STR认定的强奸案混合斑中的精子ABO基因型和犯罪嫌疑人血痕的ABO基因型 ,并探讨ABO基因分型在实际检案中的可信性及应用价值。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　 5 0例强奸案中的混合斑检材和案犯血痕 (北京市公安…