国产NuHi-POP4与ABI POP-4在毛细管电泳分离效果的比较

目的比较国产基因分离胶NuHi-POP4与美国产商品ABI POP-4在法医鉴定应用中的分离性能。方法以国产基因分离胶NuHi-POP4和美国产的ABI POP-4为研究对象,分别考察其在毛细管电泳过程中对标准品LIZ500和实际样品的分离效果,并统计其电泳参数,包括电泳时间、电流、单碱基分辨率以及线性关系等,从而来比较两种胶的分离性能,评价其性能。结果 NuHi-POP4与ABI POP-4相比,不仅可以显著缩短内标和样品的分析时间,同时还表现出电流稳定、分辨率高、线性关系好等特点。结论国产NuHi-POP4与美国ABI POP-4相比,同样具有稳定、快速、高分辨等优势,结果准确可靠。     

用于DNA分离的毛细管电泳无胶筛分介质研究进展

毛细管电泳是一种在生命科学应用最为广泛的生物分子分离技术,目前已广泛应用于DNA测序,SNP检测,DNA片段分析等。筛分介质是毛细管电泳性能的关键因素,筛分介质的种类、结构、分子量及所形成的溶液决定着生物分子的迁移特性、分辨率、读出长度、重现性等参数,对分离结果有重大影响。本文对近年来用于DNA分离的无胶筛分介质的研究和应用情况进行综述,希望能对相关研究和鉴定提供参考和借鉴。     

国产去离子甲酰胺在法医DNA检测中的探讨

目前法医DNA检测中使用的变性辅助溶剂主要是美国AB公司生产的去离子甲酰胺。经调研，本实验选择了目前国内市场上纯度级别最高的实验室用甲酰胺，为AR级。将DNATyper15TM试剂盒分子量内标Typer500分别加入到购买的甲酰胺中，用3130xi遗传分析仪检测，以比较6个厂家生产的甲酰胺对DNA的变性效果，探讨了3家国产去离子甲酰胺用于法医DNA检测上样的可能性。     

国产法医DNA检验试剂耗材检测DNA标准品的准确性研究

目的利用法医DNA标准品对自主研发的法医DNA检验试剂耗材进行电泳检测准确性的实验考查。方法实验平台分为2个：平台1全部由美国AppliedBiosystems公司进口的3130xl遗传分析仪、16道电泳毛细管与甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶构成;平台2由AppliedBiosystems公司进口的3130xl遗传分析仪、16道电泳毛细管与本实验室研发的甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶构成。在实验平台上对allelicladder、内标等标准品以及阳性对照9947a的STR复合扩增产物进行电泳检测,利用GeneMapper软件对电泳结果进行分析。结果自主研发的法医DNA检验试剂耗材可与国外进口的3130xl遗传分析仪配套使用,构建的实验平台对法医DNA标准品的检测结果准确无误。结论自主研发的甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶等法医DNA检验试剂耗材检测准确性达到了国外同类产品水平。     

两个X-STR基因座变异亲子鉴定1例

1案例资料 1.1 简要案情及DNA分型检验 因申报户口,需要鉴定某男与1名女孩是否存在亲生血缘关系.采集某男、女孩以及其生母的末梢血液.用Chelex-100法提取DNA,采用Identifiler试剂盒(AB公司)进行15个常染色体STR基因座检测,并使用Investigator Argus X-12试剂盒(QIAGEN公司)进行12个X-STR基因座检测.实验操作按照使用说明书进行,在ABI 9700型基因扩增仪进行复合扩增,产物在ABI 3130基因分析仪上进行毛细管电泳,分别采用LIZ 500及BT0 550分子量标准为内标,用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型.     

基于国产遗传分析仪的毛细管电泳筛分介质的制备

目的制备一种毛细管电泳筛分介质,将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上。方法通过聚合反应、冷冻干燥得到白色固体聚丙烯酰胺(LPA),经溶胶缓冲液溶胀后获得所需的毛细管电泳筛分介质。对其分子量、结构等关键性能指标进行表征;并将其应用于GA118-16A型遗传分析仪上,根据空间校正、光谱校正及STR检测结果对其筛分性能进行评价。结果制备的筛分介质Mw 1.8×105Da,Mn 1.2×105Da,多分散性1.5;结构正确且纯度高;在GA118-16A型遗传分析仪上能够建立空间校正、光谱校正文件;能够有效分离相差1bp的DNA片段,峰型尖锐、无杂峰、无拖尾、无丢峰现象。结论该方法制备的筛分介质完全可应用于GA118-16A等国产遗传分析仪。     

直接进样气相色谱法测定全血中乙醇的含量

目的建立一种直接进样气相色谱法检测全血中的乙醇。方法全血经硫酸铝钾沉淀蛋白,加入内标异丙醇后,用直接进样气相色谱法进行检测,FID为检测器,用保留时间定性,内标标准曲线法定量。结果该方法线性范围为0.2-1.4mg/m L,相关系数R=0.999 3,总分析时间不超过5min,最低检测限为0.01mg/m L,相对标准偏差（RSD）〈5%,平均回收率为92.3%;所建立的方法与顶空气相色谱（HS-GC）法比较相对偏差（RD）〈10%。结论该方法可用于全血中乙醇的检测。     

顶空气相色谱法检测生物检材中乙醇及其相关物质

目的建立生物检材中乙醇及其相关物质的检测方法。方法生物检材加入内标异丙醇后用顶空气相色谱法进行检测（FID检测器）,以保留时间定性,内标法定量。结果该方法线性范围为0．05035-1．613mg／ml。相关系数r=0．9999,最低检测限（limit of detection,LOD）3．379μg／ml,分析方法平均回收率为98．24％～106．5％,日内精密度RSD〈2．2％,日间精密度RSD〈1．4％,总分析时间不超过18min。结论该方法可用于生物检材中乙醇及其相关物质的检测。     

萃取方式对海洛因滥用者毛发中代谢物分析的影晌

目的比较液相萃取和同相萃取对毛发中海洛因毒品代谢物分析的影响。方法对海洛因吸食者毛发和空白添加标准品毛发经甲醇超声后的提取液分别进行液相萃取、同相萃取,然后进行衍生化和GC／MS—SIM检测。结果利用同相萃取法对添加6-单乙酰吗啡的毛发进行萃取和测试,6-单乙酰吗啡的回收率为32．O％,相对标准偏差（RSD）为2．4％;而液相萃取回收率为52．6％,相对标准偏差（RSD）为4．6％。结论固相萃取较之液液萃取,有更好的重复性,更少的杂质干扰和有机溶剂消耗等优势,但甲醇超声液需要挥干后才能进行同相萃取,而且6-单乙酰吗啡的水解率高。     

毛细管电泳高频电导法检测饮料中γ-羟基丁酸

目的建立饮料中γ-羟基丁酸（GHB）的毛细管电泳高频电导法检测分析方法。方法样品经稀释后直接进样,采用反向分离模式,以0.5mmol/LNa3PO4＋1.5mmol/LNa2HPO4＋0.1mmol/LCTAB为电泳分离缓冲介质,分离电压为16kV,进样时间为20s进行电泳分离及高频电导检测。结果该实验条件下,6.5min内可实现样品快速分析。GHB在10.0～150μg/mL范围内线性关系良好,r=0.990,检出限为3.0μg/mL（S/N=3）。选择的3种饮料样本不同添加浓度日间和日内RSD均小于6%,回收率均在95%以上。结论采用本文方法,样品处理简单,方法快速、灵敏,操作方便,可作为饮料中GHB的一种快速筛选法在相关检测中选用。     

6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析体系的构建

目的为在310基因分析仪上进行6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光STR复合扩增分型建立基础条件。方法以pGEM载体作为靶DNA,设计引物扩增获得500~80bp的13个长度不等DNA片段,以这些片段纯化物作为模板DNA,分别扩增获得6FAM、HEX、TMR和ROX标记的M atrix标准物,用4种M atrix标准物在310基因分析仪上构建可用于6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析的M atrix文件。结果扩增所得的13个非标记片段,长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、260、300、340、400、500bp,在非变性聚丙烯酰胺凝胶连续电泳-银染凝胶上均表现为单条带,6FAM、HEX、TMR、ROX分别标记的片段通过310基因分析仪检测均为单峰。混合ROX标记的80、120、180、220、260、300bp的6个片段获得的内标,显示出良好的线性关系。结论建立了有效的6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析M atrix,为进行多个STR基因座荧光标记复合扩增检测奠定了基础。     

基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物

目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。     

血液乙醇检测内外标法比较研究

目的通过比较内标法和外标法对血液乙醇含量检测结果,探讨外标法在法医学实践中的应用价值。方法通过收集2005年10月~2006年12月间本中心符合检测要求的血液样品263例,每例分别采用内标法和外标法进行血液样品乙醇含量检测,比较其检测结果。结果外标法检测时间短(2.5min),用量0.5ml,而内标法检测时间长(6.5min),样品量1.0ml;外标法检测血乙醇平均浓度为89.30mg/100ml,内标法检测血乙醇平均浓度为92.37mg/100ml,P=0.001。结论外标法检测时间短(2.5min),用量少,节约检材,可作为大量待测血液样本的筛选检查手段。     

Evaluation of Internal Standards for the Analysis of Ignitable Liquids in Fire Debris

Abstract:  An evaluation of eight compounds for use as an internal standard in fire debris analysis was conducted. Tests were conducted on tetrachloroethylene, chlorobenzene, n-octylbenzene, 3-phenyltolune, and deuterated compounds toluene-d8, styrene-d8, naphthalene-d8, and diphenyl-d10 to measure the extraction efficiency of each compound in the presence of an interfering volatile compound (carbon disulfide). Other tests were conducted to evaluate whether or not the presence of an ignitable liquid or pyrolysis/combustion products from fire debris would interfere with the identification of these compounds when used as an internal standard. The results showed that while any of the eight compounds could be used as an internal standard in fire debris analysis, the more volatile compounds (toluene-d8, tetrachloroethylene, chlorobenzene, and styrene-d8) showed better extraction efficiencies at room temperature than when heated to 60°C. Each of the less volatile compounds (naphthalene-d8, diphenyl-d10, n-octylbenzene, and 3-phenyltolune) performed well during extraction at 60°C, while naphthalene-d8 showed better extraction efficiency in the presence of competing volatiles when extracted at room temperature.     

HS-GC内标曲线法测定血中乙醇含量的不确定度评估

目的建立自动顶空-气相色谱(HS-GC)内标曲线法测定血中乙醇含量的不确定评估方法。方法从分析测定程序着手,依据不确定度评定的指导性文件,分析不确定度来源,量化不确定度分量,计算检测结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。结果各相对不确定度来自于检材重复性检测为3.4%,乙醇标准溶液为0.71%,检材为0.61%,叔丁醇内标溶液为0.41%,标准曲线为1.1%,气相色谱仪为1.3%,血液中乙醇的相对扩展不确定度为3.9%。结论血液中乙醇含量的不确定度主要来源于检材重复性检测、气相色谱仪、乙醇标准曲线。     

行政许可标准的冲突及解决

行政许可标准,是对行政许可的法定条件、程序的解释和细化,在学理上属于许可的裁量基准,在功能上构成了许可获得的限制性条件,在形式上表现为一个自上而下的"阶梯式"规范体系。在相对集中行政许可视角下,市场准入过程往往是多个单一许可组成的复合许可过程,由此产生了不同部门间实体和程序标准的冲突现象。其发生的内在机理是行政权及许可背后的部门利益与家长主义规制,外在形式则表现为复数机关参与的异位规范间的冲突,性质上多属经验冲突而非逻辑冲突。由此,解决的路径在于:一是现行行政服务中心基础上不断修正的行政协调模式;二是具有共性效力之协调技术的提炼;三是通过基准制定和公布义务的规则治理。     

大鼠血液、尿液中阿米替林的气相色谱快速分析

目的建专：m液及尿液中阿米替林（AMTL）的气相色谱分析方法,、方法以正常大鼠m液及尿液为空F1样奉,分别添加AMTI-标准品和内标SKF525A。实验大鼠以AMTL2倍LD50灌胃,致大鼠急性中毒后提取血液及尿液。用乙醚提取样本中AMTL,采用GC／FID法进行定量分析,并考察实验条件,结果采用该方法,血液及尿液中AMTL线性池用分别为5～150μg／mL（r=0．993）和5～150μg／mL（r=0．998）;最低检测限（S／N／〉3）均为1．0陆g／mL;口内、口间精密度均小于6％,同收率存95.5％～105．6％之间。结论该方法方操作便捷、捧确度高,适用=fAMTL临床治疗中血药浓度快速监测和法医毒物分析鉴定。     

Detection and correction of a migration anomaly on a 310 genetic analyzer

During STR analysis on the 310 Genetic Analyzer, retarded migration of GS500ROX size standards and alleles in some samples was observed. The contribution of reagents, capillary and performance optimized polymer POP 4 to the observed anomaly was experimentally eliminated. Variation in electrophoresis temperature between 55 degrees C and 65 degrees C did not alter the rate of migration of GX500ROX size standard and sample alleles. An eroded connector for the cathode mounted on the heat plate assembly caused the abnormal migration. Hence, it is important to verify the mobility of all fragments in the size standard for each sample to avoid any erroneous allele calls by the automated data analysis software.     

盐酸曲玛多的检验

本文运用气相色谱和薄层层析建立了盐酸曲玛多的定性、定量检验方法,采用内标控制,并进行了回收率测算.