基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物

目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。     

STR遗传多态性调查中样本量和采样方式选择初探

目的对STR基因座进行遗传学调查时样本量大小和采样方式进行考察分析。方法用DNA Typer~(TM)19试剂盒对血卡样本进行直扩,ABI3730型遗传分析仪电泳检测,Genemapper ID v3.2软件进行等位基因分型,根据公式计算群体遗传学参数。计算样本量在50、100、150、200、250、300、350、400、450、500十个水平上遗传多态性水平,并评估与总体的差异。计算常见的四种采样方法(整群采样、随机采样、系统采样、分层采样)所抽取样本遗传多态性水平,并评估抽样误差。结果 18个STR基因座在河北地区16 058份随机样本共检出317种等位基因,基因频率分布在3.114e-5~0.515。18个STR基因座在河北群体水平上PM为6.04e-14,TDP为0.999 999 999 999 94,CEP为0.999 999 987 514 828。PM值、CEP值在样本量大于200后中值基本稳定。四种抽样方法的抽样误差大小是:整群抽样≥单纯随机抽样≥系统抽样≥分层抽样。结论 DNATyper~(TM)19试剂盒的18个STR基因座在河北地区具有较高的遗传多态性水平。在小范围内进行人群频率调查时,可随机选择200份样本代表当地遗传多态性水平。在相对较大范围或遗传背景复杂的区域,可采用分层抽样的方法降低抽样误差。     

DNATyper^TM21试剂盒的法医学验证

目的测试DNATyper^TM21试剂盒的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法从灵敏度、种属特异性、准确性、耐受性、适应性、一致性、均衡性、混合样本、稳定性等九个方面对该试剂盒进行测试。结果DNATyper^TM21具有良好的种属特异性、准确性、适应性、均衡性和稳定性,试剂盒的灵敏度达到0.125ng,能检测案件中常见的不同类型的检材,对降解检材及抑制剂具有一定的耐受性,能检测4:1比例的混合DNA样本并得到正确分型。结论DNATyper^TM21试剂盒的性能指标达到了STR检测试剂盒的技术水平,可用于个体识别、亲权鉴定及法医遗传学分析。     

26个Y-STR基因座遗传多态性及突变调查

目的调查26个Y-STR基因座的突变率和遗传多态性,研究其法医学应用效能。方法本文以575对蒙古族父子对为模板,统计26个Y-STR基因座的突变率,并且研究26个Y-STR基因座在黑龙江省蒙古族、江西省汉族及福州市汉族等3个地区777个无关男性个体中的遗传多态性,评估该试剂盒的法医学应用价值。结果26个Y-STR基因座在575个蒙古族父子对中观察到52次突变,在46个父子对中观察到突变现象,平均突变速率为1.93×10^-3。遗传多态性研究中,黑龙江236名蒙古族检出235种分型,单倍型多样性为0.999964;323名福建汉族检测出320种分型,单倍型多样性为0.999942;218名江西汉族检测出217种分型,单倍型多样性为0.999958。结论快速突变基因座可以帮助增加系统的识别能力,但在Y-STR数据库家系查询应注意突变的影响。系统中所选择分析的基因座对该系统在法医学应用中的分辨能力至关重要,实验结果表明该体系在案件检验及数据库建设中具有良好的应用价值。     

10个Y-STR基因座复合扩增体系建立及应用

目的建立DYF404S1a/b、DYF399S1 a/b/c、DYF403S1 a1-3/b、DYS576、DYS570、DYS627、DYS588、DYS447、DYS446、DYS449共10个Y-STR基因座的四色荧光复合扩增体系,调查河南汉族群体中的遗传多态性,评价其法医学应用价值。方法采集500名河南汉族男性个体血液样本,用6-FAM、HEX和TAMRA荧光染料分组标记10个Y-STR基因座,PCR扩增产物采用ABI3130XL遗传分析仪进行分离,Gene Mapper ID v3.2软件分型。结果采用本文方法,检测的最低基因组DNA量为0.05ng;群体调查在上述10个Y-STR基因座分别检测出8~28个等位基因,GD值在0.472 0~0.999 0范围之间,DP值在0.471 1~0.997 0之间。10个基因座所组成的单体型共观察到497种,其中仅出现1次的单体型有494种,HD值达到0.999 908 75,DC值为0.994 0。结论建立的10个Y-STR基因座荧光复合扩增体系灵敏度较高,在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性,可以在相关研究和应用中选择使用。     

同时鉴定9种肉源种属的复合检测体系的建立及其应用

目的建立一种可以同时鉴定猪、牛、羊、鸡、鸭、猫、狗、鼠和鲤鱼的多重PCR检测方法,并测试其技术性能指标,评估其在法医学或食品安全事件中的应用价值。方法根据上述9种动物的线粒体细胞色素b基因,利用其片段中种间特异性强的序列设计引物,采用毛细管电泳检测平台对各种属PCR扩增产物进行检测,依据扩增片段长度的差异与标记的荧光对初始模板的肉源种属进行鉴别;并通过扩增特异性、实际样本测试、混合样本检测灵敏度等指标评价该方法在实际法医学或食品安全案件中的应用价值。结果经过验证,建立的同时鉴定9种肉源种属的复合检测体系对其中任意一个种属的检测特异性均较高,且灵敏度较强,能够满足绝大多数法医学或食品安全案件中的检测要求。结论本研究建立的肉源种属复合检测体系可以在法医学未知种属样本的鉴定及食品安全肉类掺假等案件中提供帮助。     

新疆和田地区维吾尔族人群18个STR基因座遗传多态性

本文使用DNATyperTM15 Plus试剂盒,对中国新疆和田地区维吾尔族300个健康无关个体进行18个常染色体STR基因座遗传多态性调查。结果 18个基因座共检出206个等位基因,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。基因频率分布在0.002~0.343之间,H值在0.68~0.91之间,DP值在0.812~0.986之间,PIC值在0.59~0.92之间。该系统在所调查的人群中具有较好识别能力。     

广西京族和汉族群体18个STR基因座遗传多态性

本文对中国广西壮族自治区京族和汉族共158名健康无关个体18个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查,采用QIAampDNA Blood Midi试剂盒提取DNA,用TyperTM15plus试剂盒进行PCR扩增和检测,结果在18个STR基因座共检出350个等位基因和875种基因型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的广西京族和汉族人群18个STR基因座均具有较好识别能力。     

四川泸州汉族人群21个Y-STR基因座遗传多态性

本文对中国四川泸州地区汉族457个健康无关男性个体进行21个Y-STR基因座遗传多态性调查。采用血卡作模板,用DNATyper Y21试剂盒进行扩增及检测。结果在21个STR基因座共检出288个等位基因和455种基因型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。21个Y-STR基因座对所调查的四川泸州汉族人群具有较好识别能力。