组织RNA检测用于死亡时间推断的研究进展

近几年来利用RNA的降解程度来推断死亡时间已逐渐成为法医学研究热点.本文复习相关研究文献,对大鼠不同组织(脑组织、心脏组织、肝脏组织和肾组织等)中RNA在推断死亡时间的具体应用方法做出总结,归纳出不同组织中的各类RNA在推断死亡时间方面的适用范围,以及对此种方法在推断死亡时间的过程中产生的问题及可行性的解决方法.     

脑组织中ATP含量变化与死亡时间关系的初步研究

本文报道用生物发光法测定不同死亡时间狗脑组织中ATP含量的变化．结果表明：随着死亡时间的延长，脑组织中ATP浓度逐渐下降，这对法医在实际检案工作中推断死亡时间有一定的应用价值。     

新西兰白兔死亡后颅脑CT检查与死亡时间关系的研究

目的采用CT扫描动态观察新西兰白兔死亡后脑组织变化,建立利用CT值、脑组织/颅腔面积比,推断死亡时间(PM I)的研究方法。方法通过耳缘静脉注射空气,建立新西兰白兔死亡模型;于死亡后0~120h,运用CT进行头颅平描;选取颅顶面层测定脑组织CT值、脑组织/颅腔面积比。结果死亡后兔脑组织CT值呈双峰样上升、脑组织/颅腔面积比呈不断下降趋势;建立与死亡时间的回归方程:CT值=47.4780-0.1768T+0.0049T2(T/h,CT值/HU)、面积比=99.7368+0.3098T-0.0118T2/100(T/h)。结论CT扫描检查可准确显示兔脑的死后变化;脑组织消失之前,综合运用CT检查指标可用于准确推断死亡时间。     

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立推断早期死亡时间的线性回归方程。结果随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显。各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系。结论大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间。     

脑组织与其相关分析推断死亡时间的研究进展

推断死后间隔时间(postmortem interval, PMI)一直是法医学鉴定中需要解决的重要问题之一。可用于推断PMI的尸体检材有很多种,脑组织因其独特的解剖学位置与生理功能,是推断PMI的重要检材之一。本文从三个方面将根据脑组织推断PMI的方法进行综述,包括了通过脑组织的温度、形态特点等尸体现象推断PMI;通过死后脑脊液、脑组织的成分,如简单元素、小分子物质、蛋白质、DNA、RNA变化规律等生化改变推断PMI;通过脑组织、硬脑膜的生物力学特征、电学特性等物理特征推断PMI。虽然根据脑组织推断PMI的研究取得了较好的成果,但是由于PMI受到多种因素的影响,应用时仍需结合现场环境、案情等运用多种指标综合判断。本文综述了根据脑组织推断PMI的方法,旨在为法医学PMI推断提供参考。     

水通道蛋白-4研究进展及法医学意义

头颅创伤、脑卒中、脑肿瘤、缺血性脑损伤、出血性脑损伤均伴有脑水肿的发生，严重者可危及患者生命甚至造成死亡。水通道蛋白-4（Aquaporin-4）作为主要在脑组织中表达的水通道蛋白，起着调节脑内水转运的重要功能，参与脑水肿的病理生理过程，提示研究水通道蛋白-4表达水平可能为法医学外伤性脑损伤时间推断提供新的依据。     

死后眼组织变化与死亡时间推断

眼组织推断死亡时间一直是国内外法医学界的研究热点之一,从肉眼观到镜下观,从细胞水平到分子水平,不断有新的研究成果和报告出现。大量研究资料表明,随着死亡时间的延长,眼角膜、视网膜、玻璃体液及房水等均出现规律性的变化,并与死亡时间高度相关,可用于死亡时间推断。本文对其在法医学领域的研究进展作以综述。     

应用法医微生物学推断死亡时间研究进展

死亡时间推断一直是法医学领域的重点和难点问题。研究发现尸体微生物群落演替规律与死亡时间之间呈现高度相关,其可为死亡时间推断提供新方法。近年来,国内外学者利用法医微生物学理论与方法对存在于不同环境中的尸体死亡时间推断进行了大量研究,丰富了死亡时间推断方法,提高了死亡时间推断的准确性。本文就暴露、埋藏和水中三种环境下尸体菌群演替规律的异同进展作简要综述,以期探讨不同环境下利用法医微生物学推断死亡时间的研究现状、所面临的问题及应用前景。     

死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性研究

目的研究死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性,评价其用于死亡时间推断的价值。方法SD大鼠20只分为死后0、1、3、5、7d共5组,脊椎脱臼法处死大鼠,提取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织,在相应时间段提取RNA,应用一步法RT-PCR技术检测各组织中看家基因GAPDHmRNA和β-actinmRNA的水平,Vilber凝胶图像分析系统测定扩增产物IOD值,SPSS10．0统计软件对数据进行方差分析。结果GAPDHmRNA、β—actinmRNA扩增产物相对灰度与积分光密度值随死后经过时间的延长而逐渐减小,且与死亡时间显著相关,大鼠脾脏和脑组织GAPDHmRNA和β-actinmRNA在死后5d内可检出,心脏和肾脏在死后3d内可检出,而肝脏和肺脏GAPDHmRNA和β-actin mRNA降解较快,仅在死后1d内可检出。结论脑组织和脾脏中mRNA稳定性较好,适用于PMI特别是晚期PMI的推断。除环境温度外,环境湿度也是死亡时间推断中的重要影响因素。     

晚期尸体现象与死亡时间68例

死亡时间推断一直是法医学的重点和难点，且死亡时间越长，推断精确性越差。随着科技发展，可以通过蛋白质、mRNA的变化等方法为死亡时间的推断带来了无限精确的可能性，但在实际检案中实用性不强。在多数情况下，法医需要在案件现场通过对尸体变化的肉眼观察对死亡时间做出推断。为了提高现场推断死亡时间的准确性，通过查阅文献及所受理案件的方式收集到死亡时间明确的尸体68例，从所处环境及尸体因素等方面分析讨论实际案例中尸体现象与死亡时间的关系。     

大鼠脑细胞DNA含量与死亡时间关系的图像分析

应用计算机图像分析技术 ,测定 15只大鼠死后 48h内不同时间点大鼠脑细胞核DNA含量的面积(Area)、等效直径 (Mean Dia ,MD)、异形指数 (Indexofdensity ,ID)、平均光度 (Averageopticaldensity ,AOD)、积分光度 (Integralopticaldensity ,IOD)、密度变化数 (L Den Coe ,LDC)和平均灰度 (Averagegray ,AG)等七项参数的变化值。结果证明 ,在大鼠死亡后 2 8h内 ,其脑细胞核DNA降解速率与PMI具有一定相关性。将每个参数的测量值进行多项式运算 ,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程。其结果表明 ,应用计算机图像分析技术 ,测量机体死后DNA含量变化 ,将会成为推断PMI精确、客观的新方法。     

大鼠脑、骨髓细胞核DNA降解推断死后间隔时间的研究

目的检测大鼠死后不同温度下脑、骨髓细胞核DNA降解规律，寻找推断早期死亡间隔时间（PMI）的新参数。方法10℃和20℃下，大鼠死后0～40h内，每隔4h取材脑组织和骨髓，单细胞凝胶电泳（SCGE）检测DNA降解程度，线性回归分析比较彗星参数HeadDNA％、尾长（TL）、Olive尾矩（TM）与PMI的关系。结果大鼠死后早期脑细胞、骨髓细胞核Head DNA％随着PMI逐渐下降的程度不同，20℃脑细胞核Head DNA％降解速率较快。与骨髓细胞相比，脑细胞核Head DNA％与PMI线性关系较好。与TL、TM相比，Head DNA％与PMI的线性关系较好。结论脑组织是利用SCGE检测DNA降解推断PMI的合适检材。Head DNA％较TL、TM推断PMI的价值更高。     

Estimation of postmortem interval from hypoxic inducible levels of vascular endothelial growth factor

Estimation of the postmortem interval (PMI) is one of the most important tasks in forensic medicine. Five autopsy organ tissues such as brain, lungs, heart, liver, and kidneys were taken at the time of forensic autopsy from 19 known PMI cases with a range of postmortem intervals ranging from 1 to 120 h (the mean was 25.81 h), and the time-course of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression was measured. The human hepatoma-derived Hep 3B cell line was used as a control. The levels of VEGF increased linearly with the PMI up to 20 h in lung (r = 0.95 and in kidney (r = 0.89), and up to 15 h PMI in liver (r = 0.88). The VEGF levels fell after 24 h PMI, and then remained stable. In brain, the levels of VEGF started to increase after 24 h PMI and increased linearly with PMI up to 40 h in brain (r = 0.94) and then begin to fall. In heart, there was no clear correlation between the PMI and VEGF level. Some variations occurred in selected cases, such as the infant and asphyxial deaths. In conclusion, measurement of hypoxia-inducible levels of VEGF in various body organs appears to be a useful method of estimating the PMI up to 24 h in forensic medicine and pathophysiology. This method is also probably applicable in ischaemia in clinical and basic medicine.     

大鼠死后肌肉总腺苷酸及腺苷酸能荷的时序性变化

目的测定大鼠死后不同时间双后肢肌肉嘌呤腺苷酸[三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)]含量,计算总腺苷酸(total adenine nucleotide,TAN)含量和腺苷酸能荷(adenylic-acid energy charge,AEC)的变化值并探究其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法健康大鼠颈部脱臼处死后,20℃恒温保存,分别于死后0、24、48、72、96、120、144、168 h提取大鼠双后肢肌肉,利用反相高效液相色谱法测定嘌呤腺苷酸含量,计算双后肢肌肉组织的TAN和AEC,并分别建立其与PMI关系的相关回归方程。结果大鼠死亡168h内,ATP、ADP变化趋势不同,AMP的含量持续增加;TAN值随PMI的延长而逐渐增加,而AEC在死后168h内,整体呈现下降趋势。AEC随PMI变化规律明显,决定系数较高(R2为0.903),曲线拟合关系较好;ATP、ADP、AMP、TAN与PMI拟合关系不佳(R2为0.198~0.754)。结论AEC的死后变化规律为法医学PMI推断提供了新的研究思路。     

Citrate Content of Bone as a Measure of Postmortem Interval: An External Validation Study

The postmortem interval (PMI) of skeletal remains is a crucial piece of information that can help establish the time dimension in criminal cases. Unfortunately, the accurate and reliable determination of PMI from bone continues to evade forensic investigators despite concerted efforts over the past decades to develop suitable qualitative and quantitative methods. A relatively new PMI method based on the analysis of citrate content of bone was developed by Schwarcz et al. The main objective of our research was to determine whether this work could be externally validated. Thirty‐one bone samples were obtained from the Forensic Anthropology Center, University of Tennessee, Knoxville, and the Onondaga County Medical Examiner's Office. Results from analyzing samples with PMI greater than 2 years suggest that the hypothetical relationship between the citrate content of bone and PMI is much weaker than reported. It was also observed that the average absolute error between the PMI value estimated using the equation proposed by Schwarcz et al. and the actual (“true”) PMI of the sample was negative indicating an underestimation in PMI. These findings are identical to those reported by Kanz et al. Despite these results this method may still serve as a technique to sort ancient from more recent skeletal cases, after further, similar validation studies have been conducted.     

大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究

目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d、4d、8d、16d、24d),分别在各时间点取大鼠胫骨前肌及脑组织约50mg,提取各组织总RNA,利用RT-q PCR技术检测9种管家基因的m RNA相对表达量。运用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件对基因稳定性进行评价,利用spss软件对内参标准化的m RNA指标进行回归分析。结果脑组织及骨骼肌中均为HPRT稳定性最高,适合用于本研究的内参基因。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种指标的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系。骨骼肌中m RNA指标相对表达量与PMI之间没有显著的相关性。结论脑组织及骨骼肌是较适宜推断晚期死亡时间的检材。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种m RNA的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系,有望成为推断PMI的辅助指标。     

牙髓细胞DNA含量与死后经过时间的相关性

目的探讨死后不同环境温度下离体牙的牙髓细胞平均DNA含量变化与死后时间(PM I)的相关性。方法采用细胞图像分析系统(PIPS-2020),测定离体即刻至15d牙齿在低温环境(10~15℃)和高温(30~35℃)环境下牙髓细胞DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果在不同的环境温度下,牙髓细胞DNA降解的速度有所不同,温度的升高有加速牙髓细胞DNA降解的趋势,且DNA降解存在一个平台期。低温组牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间的相关系数r=0.953,相关指数R2=0.917;高温组的相关系数r=0.991,相关指数R2=0.971。结论牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间具有高度相关性,测定牙髓细胞的DNA变化情况对推断3d(高温环境)或6d(低温环境)后的PM I有参考价值。     

大鼠死后肌动蛋白降解与死亡时间的相关性

目的观察大鼠死后不同时间心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌肌动蛋白（actin）的降解规律,为晚期死亡时间（postmortem interval,PMI）的推断寻找客观指标。方法28只SD大鼠随机分为7组,经机械性窒息致死后．分别置于20℃恒温箱内,于0、24、48、72、96、120和168h后剖取以上器官,应用免疫印迹技术检测各组织内actin的含量,SPSS11．5软件对所得数据进行方差分析。结果大鼠死后上述各器官actin含量均随PMI的延长而逐渐下降,与PMI相关,决定系数（R2）均在0．75以上。但actin在上述各器官内的降解速度有显著差异（P〈O．05）,在脑组织中降解速度最快,其余依次为肺、脾、肝、肾、心肌和骨骼肌。结论尽管大鼠死后心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌actin的降解规律具有组织差异性,但是actin在上述组织中的含量变化与PMI相关．有助于较晚期PMI的推断。     

The changes of fourier transform infrared spectrum in rat brain

Estimation of the time since death (postmortem interval [PMI]) is one of the most difficult problems in forensic investigations, and many methods currently are utilized to estimate the PMI. The goal of this study was to investigate the changes of attenuated total reflection-Fourier transform infrared (ATR-FTIR) spectra of rat brain from postmortem time 0-144 h. The intensity ratios of major absorbance bands were examined (I(1066)/I(1392), I(1168)/I(1392), I(1234)/I(1454), I(1301)/I(1392), I(1647)/I(2956), I(2921)/I(2850), and I(1647)/I(1539)). The spectra of rat brain displayed prominent changes with increasing PMI. The band at 2871 and 1737 per cm became weak with the time increasing and even disappeared at postmortem 96 and 72 h, respectively. A close linear correlation was shown between the relative absorption intensity and the PMI, and the I(1234) /I(1454) offered a stronger correlation (r = 0.973). Our results indicate that ATR-FTIR spectroscopy may be a useful technique for estimating the PMI.