肋软骨及牙髓细胞DNA含量与PMI的相关性

目的探讨人死后肋软骨及牙髓细胞平均DNA含量与死亡时间(PMI)的相关性,寻求推断PMI的新方法。方法应用细胞图像分析技术分析高温(30～35℃)及低温(15～20℃)环境下人死后0～15d两种组织细胞平均DNA含量的降解情况。结果两种组织细胞平均DNA含量随死后时间的延长而逐步降解,其中低温组牙髓细胞平均DNA含量的降解在死后0～4d内有一个降解平台期。统计分析两组温度下两种组织细胞平均DNA含量与PMI有显著的负相关性(P<0.01)。结论依据两种组织细胞平均DNA含量的降解可进行PMI推断。     

不同温度下离体人脾细胞DNA降解的差异性研究

目的研究不同温度下离体人脾细胞DNA降解的差异性。方法应用Feu lgen染色及计算机图像分析技术,测量并分析在不同温度下死后早期(36h内)各个时间点离体人脾细胞DNA含量的差异性情况。结查人死后7~36h内代表DNA含量的参数中,异形指数(ID)、密度变化数(LDC)、积分光密度(IOD)、平均光密度(AOD)及平均灰度(AG)在不同温度下其测量值具有统计学差异性(P<0.05),其中密度变化数(LDC)、平均光密度(AOD)和平均灰度(AG)具有显著统计学差异性(P<0.01)。结论温度对死后DNA降解有明显影响,进行温度对死亡时间(PM I)推断的影响的研究有重要的法医学意义。     

组织中三甲胺-氮浓度变化与晚期PMI关系初探

目的探索死后尸体组织中三甲胺-氮(TMA-N)浓度变化规律及其与晚期死亡时间的关系。方法健康SD大鼠66只,颈椎脱臼法处死,随机分成11组,分别于死后即刻、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10d取大鼠肌肉、肝脏和肾脏组织,用分光光度法检测TMA-N浓度,所得数据用方差分析比较组间差异性,并进行回归方程拟合。结果3种组织中TMA-N含量随死后时间延长而增加,肌肉于死后7d、肝脏和肾脏于死后8d达到高峰,之后有所下降,并均于死后10d再次升高,肝、肾组织之间TMA-N含量比较无统计学差异性。死后2~7d内,PM I与肌肉TMA-N浓度变化拟合度最高(R2=0.969);死后3~8d内,与肝肾中TMA-N浓度变化拟合度最高(R2=0.953)。结论死后组织中TMA-N含量变化与PM I有相关性,可望为晚期PM I推断提供参考,但肌肉与肝肾TMA-N含量变化规律存在一定差异,需选择最适时段以提高PM I推断的准确性。     

尸体甲状腺球蛋白降解及其与死亡时间的关系

目的探讨尸体甲状腺球蛋白降解程度与死亡时间(PM I)的关系。方法死后21d内尸体的甲状腺组织,经免疫组化(EPOS)法染色,观察甲状腺球蛋白的染色反应;对63例阳性染色的甲状腺组织(PM I≤5d)进行计算机图像分析,并对所得图像参数的数据进行统计学分析。结果PM I≤5d的甲状腺组织,甲状腺腺泡上皮细胞胞浆及甲状腺胶质中均显示了不同程度的免疫反应阳性;PM I超过12d,免疫反应阴性;经图像分析及统计学处理,其积分光密度、分布密度和目标面积与PM I之间的确定系数(R2)分别达0.9794,0.9732及0.9884。结论尸体甲状腺组织的甲状腺球蛋白降解程度随PM I不同而变化,二者呈现较强的相关性。     

大鼠死后视网膜细胞mRNA降解与死亡时间的关系研究

目的检测死后大鼠视网膜细胞mRNA的降解和死亡时间(PM I)的关系,为死亡时间推断提供新方法。方法应用复合荧光RT-PCR技术,检测死后不同时间(2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28h)大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1和Rp l 4 mRNA水平,以立即处死大鼠作为对照。方差检验比较组间差异,并对所得数据进行回归分析。结果死后28h内,大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1、Rp l 4 mRNA水平均随死亡时间的延长而下降。3个管家基因mRNA的降解与死亡时间的线性拟合回归方程分别为:Yβ-actin=-4436.205Xβ-actin+127581.7(r2=0.976),YPgk1=-1993.884XPgk1+57651.54(r2=0.973),YRp l 4=-1189.791XRp l 4+34533.46(r2=0.955)。结论大鼠死后视网膜细胞mRNA的含量随着死亡时间的延长而逐渐降解,与死亡时间具有相关性。     

免疫印迹检测人胸大肌肌钙蛋白I推断较晚期死后经过时间

目的研究人死后骨骼肌肌钙蛋白I(Skeletal troponn in I,sTnI)的变化规律,探讨较晚期死后经过时间推断方法。方法以人胸大肌为研究对象,利用免疫印迹(W estern b lot)结合图象分析技术半定量检测不同离体时间内人胸大肌sTnI的含量,观察其与离体时间的关系。结果人胸大肌sTnI含量随离体时间延长而逐渐下降,与离体时间的对数值呈近似的线性关系:Y=11 972.5-4 761.9 lgX,相关系数r=0.989;离体5d的人胸大肌仍可检出sTnI。结论检验人死后骨骼肌(胸大肌)sTnI的含量有望成为用于推断人体较晚期死后经过时间的新技术。     

失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白死后降解的检测

目的探讨失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白含量变化与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克死亡后，分别于死亡即刻和死后1、2、3、5和7d剖取脾脏、肝脏及肾脏组织，应用western—blot技术检测微管蛋白含量，SPSS11．5软件对结果进行统计学分析。结果大鼠肝肾脾细胞内微管蛋白含量随PMI的延长而逐渐降低，至死后7d仅可见很淡的微管蛋白印记谱带，其中微管蛋白在肝脏内降解速率最快。3种组织内微管蛋白含量变化的同归方程及相关系数（r）分别为：肝脏Y=-2221．1X＋14844，r=0．9823；脾脏Y=-1871．1X＋11344，r=0．9749；肾脏Y=-1878．1X＋13715，r=0．9629。结论大鼠死后肝肾脾细胞内微管蛋白降解规律与PMI之间具有相关性，并存在组织差异性。     

甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量与死亡时间的相关性

目的探讨甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化与死亡时间(PMI)的相关性。方法采用甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术,测定尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量随死后经过时间的延长而加速降解。平均DNA含量各指标(平均灰度、目标面积、目标面积比)与PMI之间的决定系数R2分别为0.960、0.987、0.988和0.990(P<0.001)。结论尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量与PMI之间具有明显相关性,甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术测定在研究甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量变化方面具有一定优势。     

大鼠骨骼肌细胞DNA含量变化与死亡时间关系的研究

目的大鼠骨骼肌细胞DNA的定量研究及其方法探讨。方法使用DNA特殊组化染色和计算机图象分析技术 ,对死后不同时间 (0～ 96h)、不同环境温度下的大鼠骨骼肌细胞核DNA含量变化进行分析。结果骨骼肌细胞在死后 12h出现核着色变淡、着色面积变小 ,并随死后时间延长呈持续性下降 ,最终完全消失。结论死后DNA降解率与死后时间呈线性规律关系。图像分析技术对骨骼肌DNA含量测定具有良好的实际应用前景     

人体死后肝细胞DNA含量与死亡时间关系的研究

目的研究人体死后肝脏细胞DNA含量变化与死亡时间的关系及影响因素。方法选取46例已知死亡时间的人体肝脏,根据离体肝脏所处的环境温度分为12—19％（A组）和20—27％（B组）两组,每组23例。在死后24～72h内每隔4h穿刺取肝组织1次,制成细胞悬液,经RNA酶消化,PI染色后,用流式细胞仪测定被检测细胞中含不完整DNA的细胞数所占百分比,所得数据经Exp032V1．2软件计算N值。结果死后24～72h肝细胞N平均值,A组从10．91％增至49．72％,B组从16．22％增至69．63％。两组N平均值随死亡时间的延长均逐渐增高,与死亡时间有相关性,A组r值为：0．598,B组r值为0．77357。并且建立了不同环境温度对应的回归方程。结论在不同环境温度下,死后24～72h内人体肝脏细胞DNA降解均随死亡时间的延长和环境温度的升高而逐渐加快,相关数据可望为死亡时间推断提供一定参考依据。     

大鼠脑、骨髓细胞核DNA降解推断死后间隔时间的研究

目的检测大鼠死后不同温度下脑、骨髓细胞核DNA降解规律，寻找推断早期死亡间隔时间（PMI）的新参数。方法10℃和20℃下，大鼠死后0～40h内，每隔4h取材脑组织和骨髓，单细胞凝胶电泳（SCGE）检测DNA降解程度，线性回归分析比较彗星参数HeadDNA％、尾长（TL）、Olive尾矩（TM）与PMI的关系。结果大鼠死后早期脑细胞、骨髓细胞核Head DNA％随着PMI逐渐下降的程度不同，20℃脑细胞核Head DNA％降解速率较快。与骨髓细胞相比，脑细胞核Head DNA％与PMI线性关系较好。与TL、TM相比，Head DNA％与PMI的线性关系较好。结论脑组织是利用SCGE检测DNA降解推断PMI的合适检材。Head DNA％较TL、TM推断PMI的价值更高。     

家兔玻璃体液2种酶活性变化与死亡时间的相关性

目的探讨死后家兔玻璃体液胆碱脂酶(CHE)和谷草转氨酶(GOT)活性与死后经过时间(PM I)的相关性。方法应用光度法检测在25~30℃和10~15℃下死后即刻至54h之间玻璃体液CHE和GOT活性。结果死后即刻至54h之间,ChE、GOT活性分别由约850U/L、220U/L逐步降解趋于零。死后6h内,两种酶活性降解存在平台期。统计分析,得出相应的单元和多元回归方程,相关系数或决定系数均在0.896以上,P<0.01。结论两种酶活性的降解规律可作为较为客观的推断PM I的参考指标。     

小鼠死后脑RNA降解与死亡时间的相关性

目的 探讨小鼠死后不同时间和温度下脑组织β-actin mRNA、18S rRNA的降解规律与死亡时间的关系.方法 将24只健康成年C57BL/6小鼠随机分为2组,每组12只,断颈法处死后分别置于不同的环境温度中(4℃、37℃),恒定环境湿度为80%.分别于死后即刻和0.5、2、6、24、48h取小鼠脑组织进行总RNA...     

不同温度下离体人静脉血ATP含量与死亡时间的关系

目的探讨在环境温度变化条件下,人体静脉血ATP降解与死亡时间的关系。方法健康志愿者48名,随机分为6组,肱静脉取静脉血,置于10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃下保存;每4h应用ATP检测仪对不同温度下的ATP含量进行检测;应用SPSS统计软件进行回归分析,MATLAB软件进行差值函数分析拟合。结果各温度组ATP值随死亡时间延长均呈下降趋势,从取血即刻的1 573.683 E-13mol/L,降至6.00 E-13mol/L左右,所经历的时间分别为236h(10℃)、163h(15℃)、124h(20℃)、92h(25℃)、72h(30℃)和64h(35℃),对所得数据进行回归分析,得到各温度组下ATP含量变化与PMI关系的二元三次曲线方程(R2范围为0.976～0.990);进行差值拟合,得到10～35℃范围内ATP含量变化与PMI关系的三元四次曲面方程。结论在不同温度下,人体静脉血ATP降解与PMI关系符合三元四次方程分布,利用差值函数拟合的方法可在温度变化条件下进行死亡时间推断。     

大鼠死后视网膜细胞核DNA含量变化的图像分析

目的分析死后不同时间大鼠视网膜细胞核DNA含量变化图像,探讨视网膜细胞核DNA降解与死亡时间（PMI）的关系。方法90只成年健康雌性SD大鼠,随机分成15组,死后0—28h内（20℃）,每2h提取视网膜细胞进行Feulgen-Vans染色;采用图像分析系统检测视网膜细胞核的异形指数（ID）、积分光密度（IOD）和平均光密度（AOD）,并运用SPSS12．0软件对测量数据进行线性回归分析。结果视网膜细胞核AOD和IOD随死亡时间的延长逐渐下降,ID则呈上升趋势。28h内各参数变化的回归方程如下：YAOD=-0．009XAOD＋0．590,R^2=0．949,Y100=-0．097X。＋18．903,R^2=0．968,Y10=0．122X10＋2．246,R^2=0．951。结论大鼠死后视网膜细胞核DNA含量随着死亡时间的延长而呈规律性降解,并与PMI具有良好的相关性。     

不同温度下兔玻璃体液K~+浓度与死亡时间的关系研究

目的探索在不同环境温度条件下,玻璃体液中钾离子浓度变化规律与死亡时间的关系。方法家兔处死后分别置于5℃、15℃、25℃和35℃温度下保存,在0~120h内每12h双眼交替微量提取玻璃体液80~100μL;应用罗氏DPPI生化分析仪检测玻璃体液中K~+的浓度;应用插值函数进行分析拟合,建立死亡时间推断方程。结果各温度组家兔玻璃体液中K~+浓度随死亡时间延长均呈上升趋势,对所得数据进行插值拟合,在5℃~35℃的温度变化区间内,K~+浓度变化与PMI关系的三元五次曲面方程:f(x,y)=-1.998e~(14)+1.345e~(12)x+5.902e~(13)y+0.005 585x~2-4.509e~(11)xy-3.876e~(12)y~2-0.000 286 8x~3+0.003 545x~2y+4.406e~(10)xy~2-1.746e~(10)y~3+2.669e~(-6)x~4-1.568e~(-5)x~3y-0.000 177 1x~2y~2-1.64e~9xy~3+6.669e~9y~4-8.672e~(-9)x~5+4.467e~(-8)x~4y+2.354e~(-7)x~3y~2+2.459e~(-6)x~2y~3+2.05e~7xy~4-1.214e~8y~5(R~2=0.995 6),其中温度为自变量x,K~+浓度值为自变量y,PMI为因变量f(x,y)。结论在5℃~35℃的环境温度区间内,家兔眼玻璃体液中K~+浓度变化与死亡时间关系符合三元五次方程分布,利用插值函数拟合的方法可将环境温度作为参数,实现在环境温度变化条件下进行死亡时间推断。     

单细胞凝胶电泳检测大鼠死后肝细胞核DNA降解

目的应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测大鼠死后肝细胞核DNA降解规律,分析与死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断提供新的方法。方法在大鼠死后30h内,每隔3h取肝组织样本进行单细胞凝胶电泳,用共聚焦显微镜摄取彗星图像,应用彗星图像分析软件(IM I1.0)进行图像分析,并作统计学分析。结果死后大鼠的肝细胞在电泳图像上出现明显的彗星形拖尾,其尾长(TL)、尾矩(TM)在一定的时间范围内(0~18h)随死亡时间的延长而逐渐增大,二者均与死亡时间(PM I)呈现一定的相关回归关系。结论单细胞凝胶电泳技术可应用于早期死亡时间的推断。