三等位基因的遗传关系分析1例

1案例资料 魏某（疑父）、妻子卢某（母）和儿子（子）因出国公证要求进行亲子鉴定,确定父子亲子关系。1.1 DNA分型检验采用Chelex-100法分别提取上述3人新鲜血液、疑父与子的头发和口腔拭子的DNA,采用Identifiler复合扩增试剂盒（ABI公司,美国）、PowerplexTM16system（Promega公司,美国）荧光标记复合扩增试剂盒和STR-Typer 10G（科登公司,珠海）荧光复合扩增试剂盒进行检测。     

D12S391基因座检出四等位基因1例

正1案例1.1简要案情1例父子关系鉴定中采集被鉴定人的末梢血进行检测,发现被检父D12S391基因座STR分型为20,21,22,23,后单独采集被检父带毛囊的毛发样本进行验证。1.2DNA检验采用Chelex-100法提取样本基因组DNA。采用Goldeneye誖20A试剂盒[基点认知技术(北京)有限公司]对被鉴定人血样进行扩增,后用EX22试剂盒(无     

国内首次发现及确认D1S1656基因座等位基因7鉴定1例

1案例1.1简要案情因申报北京户口,母亲王某与孩子需进行亲子鉴定。采集二人指尖血备检。1.2 DNA提取用DNA IQ^TM试剂盒(美国Promega公司)在工作站(美国Beckman公司NX)上提取上述两人血样DNA。1.3常规检验采用PowerPlex^■21 System(美国Promega公司)进行PCR复合扩增,PCR反应体系和循环参数按说明书要求。使用3130XL型遗传分析仪(美国AB公司)电泳分离扩增产物。GeneMapper ID v3.2软件进行基因座分型。     

导致D5S818等位基因丢失的突变确认1例

正1案例资料1.1简要案情在日常一例二联体父女鉴定的检案中,我们采用Power Plex~?21试剂盒(Promega公司,美国)进行亲子鉴定过程中,发现D5S818基因座存在等位基因丢失情况。1.2实验方法采用常规Chelex-100法提取争议父和孩子的基因组DNA;分别使用Power Plex~?21试剂盒、Golden Eye~(TM)20A试剂盒(北京基点认知技术有限公司)和AGCU Expressmarker 22试剂盒(无锡中德美联公司)进行STR复合扩增;扩增产物通过3130型遗传分析仪(Applied Biosystems公司,美国)进行毛细管电泳,Gene Mapper ID v3.2.1软件分析各基因座的基因型。     

X-STR分型在特殊二联体亲子鉴定中的应用1例

1 案例 1.1简要案情 两名男子委托本鉴定所对他们与1名女孩是否存在亲生血缘关系进行鉴定. 1.2检验过程 本鉴定所采集3人指血,Chelex-100法提取DNA,采用PowerPlex(R) 21系统(美国Promega公司)检测20个常染色体STR基因座以及1个性别基因座,采用Investigator Argus X-12试剂盒(德国QIAGEN公司)检测12个X-STR基因座,以上扩增均在9700型基因扩增仪(美国AB公司)上完成,扩增体系和条件均按照使用说明书操作,扩增产物在3130遗传分析仪(美国AB公司)上进行毛细管电泳,用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型.     

常染色体InDel基因座判定疑难单亲鉴定1例

<正>1案例资料1.1案例来源王某,28岁,要求对其与女儿进行亲权鉴定。1.2检验方法DNA提取采用常规Chelex-100法提取基因组DNA。STR分型采用Goldeneye?20A试剂盒、AGCU EX22试剂盒及AGCU 21+1试剂盒在AB公司9700型PCR仪扩增,进行常染色体的STR分型检测,采用Investigator DIPplex kit(Qiagen,     

常染色体STR基因座三带型5例

正1材料和方法1.1材料材料为本物证鉴定室受理的8172例健康无关个体血斑样本。1.2主要仪器和试剂使用Goldeneye?Duplex试剂盒(基点认知技术有限公司)、Power Plex~?21(Promega)、Global FilerTM试剂盒(美国AB公司)进行常染色体STR分型检测。采用血卡直接扩增的方法在9700型PCR仪(美国AB公司)进行复合扩增,扩增体系10μl。使用3500基因分析仪(美国AB公司)和GeneMapper~?ID-X 1.4软件进行电泳和数据分析。     

二代测序在二联体亲子鉴定中的应用3例

正1案例和方法1.1简要案情我中心接收的案件中需进行二联体亲子鉴定情况3例(1号父,1号子;2号父,2号子;3号父,3号女)。1.2检验方法1.2.1毛细管电泳STR分型检测使用AGCU EX22试剂盒(无锡中德美联生物技术有限公司)进行STR复合扩增,使用3500XL基因分析仪(Thermo Fisher公司)和GeneMapper~?ID-X v1.5软件进行电泳和数据分析。     

男性Y染色体Amelogenin Y、DYS570及DYS576缺失1例

正1案例1.1简要案情某水域发现1具高度腐败未知名尸体,法医初步判断死者为男性,提取死者肋软骨进行DNA检测。1.2检验方法使用AutoMate Express~(TM)核酸提取系统(美国Thermo Fisher Scientific公司)及配套试剂进行DNA提取,使用Power Plex~? 21系统(美国Promega公司)和GlobalFiler~(TM) PCR扩增试剂盒(美国Thermo FisherScientific公司)进行常染色体STR复合扩增。     

MiniFiler及Yfiler试剂盒无创产前亲子鉴定的可能性探究

目的采用Mini Filer~(TM)及YFiler~(TM)试剂盒对孕妇血浆进行STR分型,评估上述试剂盒进行无创产前亲子鉴定的可行性。方法采用Mini Filer~(TM)及YFiler~(TM)试剂盒,对2例成人男性的全血及血浆进行STR分型,评估血浆检材的分型准确率及适用性;对8组已知亲子关系的孕妇家系(4组非父,4组亲父,均为男胎样本)采用Mini Filer~(TM)及YFiler~(TM)试剂盒进行STR分型,对STR分型图谱直接观察,总结归纳孕妇血浆STR图谱的特征,探讨进行无创产前亲子鉴定的可行性。结果血浆检材的STR分型结果与全血STR分型结果 100%一致,且等位基因峰高接近,表明血浆是一类可以进行STR分型的检材;观察8组孕妇血浆检材的STR分型图谱,可获得2~5个可用(含胎儿STR信息)Mini-STR位点,1~8个可用Y-STR位点,且在位点充足的情况下(6个),肯定父权家系可计算累计父权指数达192 653,否定父权家系中有3~7个位点支持否定父权。结论采用Mini Filer~(TM)及Yfiler~(TM)试剂盒对孕妇血浆进行STR分型,存在进行无创产前亲子鉴定的可能性。     

AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒快速直接PCR扩增初探

目的 探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率.方法 联合运用AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较.结果 AmpF(l)fSTR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min.结论 采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高.     

荧光定量PCR技术验证Sinofiler试剂盒的适宜模板量

目的探讨Sinofiler试剂盒适合扩增的模板DNA用量。方法选取经Sinofiler试剂盒基因分型且图谱完整、扩增均衡性好的DNA样本,进行荧光定量PCR检测。结果实验结果表明,在12.5μL体系中,1.29～1.51ng的模板DNA能够获得理想的分型结果。结论应用荧光定量PCR技术检测不同试剂盒适合扩增的模板DNA用量是一种准确、有效的方法。     

多重置换扩增技术用于法医学微量DNA检测效果

目的探讨多重置换扩增(MDA)技术对法医学微量DNA样品STR检测分型的效果。方法用MDA技术对不同模板量DNA进行全基因组扩增(WGA),扩增产物用实时荧光定量PCR技术定量、用Profiler PlusTM试剂盒检测基因型。结果该方法可对模板DNA增加104～106倍。1ng样品DNA的MDA产物可获得9个STR基因座和Amelogenin性别基因座的准确分型结果;低于0.1ng的样品DNA经MDA扩增后,基因座检出数增加,但可见等位基因不平衡或丢失现象。结论MDA技术可有效增加DNA模板量和提高微量DNA分型效果。但样品DNA量低于0.1ng时,MDA产物的STR分型结果判读须慎重。     

亲子鉴定中46,XX性发育异常1例

正1案例1.1简要案情自称父亲的男子(假定父)以给孩子落户为名,携妻子(假定母)和女儿及有效证件来本鉴定中心进行亲子鉴定。根据知情同意原则,采集血样备检。1.2检验方法1.2.1 DNA检验采用常规Chelex-100法分别提取假定父母和孩子待检血样的DNA,使用Power Plex~21试剂盒(美国Promega公司)进行PCR复合扩增,对三人进行基     

多手段联合亲子鉴定1例

1案例 某地公安机关送检一案件中可疑父母血样和死者（男性）肋软骨,要求进行亲子鉴定：用Chelex-100法提取可疑父母血样和死者肋软骨DNA．分别用美国AB公司Identifile^TM。试剂盒、Yfile^TM试剂盒和北京基点认知技术有限公司Goldeneye^TM 16BTDNA身份鉴定试剂盒复合扩增,扩增产物用3100遗传分析仪进行电泳分离,得到STR分型结果：     

Differex~(TM)系统在混合斑精子DNA分离提取中的应用

叶某,女,7岁。某日放学途中被诱骗奸杀,3日后发现其尸体,且已高度腐败。提取阴道内容物送检。阴道拭子浸出液沉淀经涂片,检见少量精子和阴道上皮细胞。用传统差异裂解法[1]分离提取混合斑精子DNA,扩增分型效果不佳(照片1)。本文作者应用D ifferexTM系统分离提取混合斑精子DNA,取得扩增分型的满意结果。现报道如下。1 D ifferexTM系统分离提取精子DNA1.1主要仪器与试剂D ifferexTM试剂盒(含消化缓冲液、分离液、无核酸酶水)、DNA IQTM纯化系统、PowerPlexTM16试剂盒为美国Promega公司产品;金牌酶、AB I3100遗传分析仪、9700PC…     

PCR扩增循环数与低拷贝模板DNA的STR分型

目的探讨PCR扩增循环数对低拷贝模板DNA的STR分型的影响。方法模板DNA(9947A)的不同扩增用量(含低拷贝模板量),采用ProfilerPlus试剂盒,扩增循环数分别为28、30、32、34、38次,3100型基因分析仪(ABI,美国)检测结果。结果循环数从28次增至38次,模板DNA量最低检出量可从0.25ng减少至0.0312ng;先循环28次后,每反应加0.3μlAmpliTaqGoldDNA聚合酶,再循环6次较1次34个循环的检测灵敏度高,相当于1次38个循环的效果。结论增加PCR扩增循环数,可能影响低拷贝模板DNA的STR分型。     

Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学验证

目的：对Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学参数进行验证和分析。方法根据DNA分析方法科学工作组（Scientific Working Group on DNA Analysis Methods,SWGDAM）对试剂盒的法医学验证要求,从PCR扩增体系的测试、重复性、准确性、灵敏度等多个角度对该试剂盒进行检测评估。应用该试剂盒对华东地区517名汉族健康无关个体进行Y-STR基因座分型检测,检测单倍型分布状况及频率信息,并评估该试剂盒的法医学参数。结果该试剂盒对6.25μL扩增体系、DNA量低至125 pg时仍然可以得到准确的分型结果。特异性检测发现该试剂盒对常见的动物DNA和微生物DNA无有效的扩增结果。男性混合样本（1∶19和19∶1）中,较少样本的等位基因检出率可以达到70%以上;在男女混合样本中,女性DNA背景的存在不影响试剂盒的灵敏度。结论 Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒灵敏度高、特异性好,且可以应用于混合物的检测。试剂盒所包含的26个Y-STR基因座多态性良好,可满足法医学实际应用。     

STR-typer 10G/F试剂在单亲鉴定中的应用

目的观察和分析STR-typer 10G/F试剂盒在单亲鉴定中的作用。方法随机抽样湖北地区汉族个体206人静脉血样,Chelex-100法提取基因组DNA。采用STR-typer 10G/F试剂盒进行复合扩增,分型并计数基因型并计算基因频率、基因座杂合度(H)、标准三联体非父排除率(PE3)和二联体非父排除率(PE2)。结果 9个STR基因座等位基因数9～14个,基因型分布观察值与Hardy-Weinberg平衡理论值的差异均无显著性(P>0.05),杂合度在0.75以上,平均非父排除率0.57～0.75;STR-typer 10G/F试剂盒累积非父排除率(PE3)0.999 973,合并使用Identifiler Plus系统,累积非父排除率可达0.999 999 967 6。结论 STR-typer 10G/F系统多态性程度基本接近Identifiler Plus系统,在单亲鉴定时,可作为Identifiler试剂盒的有效补充。     

两个X-STR基因座变异亲子鉴定1例

1案例资料 1.1 简要案情及DNA分型检验 因申报户口,需要鉴定某男与1名女孩是否存在亲生血缘关系.采集某男、女孩以及其生母的末梢血液.用Chelex-100法提取DNA,采用Identifiler试剂盒(AB公司)进行15个常染色体STR基因座检测,并使用Investigator Argus X-12试剂盒(QIAGEN公司)进行12个X-STR基因座检测.实验操作按照使用说明书进行,在ABI 9700型基因扩增仪进行复合扩增,产物在ABI 3130基因分析仪上进行毛细管电泳,分别采用LIZ 500及BT0 550分子量标准为内标,用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型.