FTA卡血样快速直接PCR扩增方法比较初探

目的探索FTA卡血样快速直接PCR扩增方法,比较相关方法的应用价值。方法将DNA TyperTM19试剂盒分别与3种快速试剂(Roche、TaKaRa、Fermentas)组合,以FTA卡血样为模板构建扩增体系,按照经优化的循环参数进行快速直接扩增,并与Typer19试剂盒常规方法相比较,对方法进行评价。结果 Typer19试剂盒分别与3种快速PCR检验试剂进行组合,均可实现快速直接扩增,STR分型结果均与常规方法一致,扩增用时60min,较常规扩增所需的215min缩短了约70%,但Typer19试剂盒与Roche试剂组合基因座间峰高有部分不平衡;与TaKaRa试剂组合扩增个别基因座出现双肩锋;与Fermentas试剂组合扩增峰高明显不平衡,且个别基因座存在双肩峰。结论应用DNA TyperTM19试剂盒与快速试剂组合直接PCR扩增方法,可有效缩短扩增时间,可根据效果在相关实践中选择使用。     

保存温度及保存时间对AmpFlSTR(R)Identifiler(R)Plus Kit PCR Reagents试剂盒PCR混合液效能影响的研究

目的 探讨AmpFlSTR(R) Identifiler(R) Plus Kit PCR Reagents混合液使用时间和温度的影响因素.方法 试剂盒PCR混合液依次在4℃、室温、-20℃下保存l周、2周至15周不等,用于样品STR分型检验.结果 4℃保存的PCR混合液在15周之内可以检验出标准品9947A的STR分型;室温保存在6周之内可以检出;-20℃保存至少在15周内可以检出.结论 由AmpFlSTR(R) Identifiler(R)Plus Kit PCR Reagents试剂盒各组分组成的试剂盒PCR混合液在一定的保存条件下使用是可行的,符合法庭科学人类荧光标记STR技术要求.     

快速PCR扩增体系的建立及法医学应用

目的建立快速PCR扩增体系,探讨其在法医实践中的应用价值。方法设置不同的缓冲液、酶浓度与Mg SO4浓度、热循环参数等,观察不同参数对扩增结果的影响,建立快速PCR扩增体系。使用该体系对常见检材进行STR分型,与常规方法扩增的结果比较,考察其分型准确性与扩增用时。结果本文建立的快速PCR扩增体系含DNA TyperTM19试剂盒的Primer Mix(5×)2μL;Ta KaRa试剂的Fast BufferⅡ(10×)1μL,Speed STARTMHS DNA Polymerase(5U/μL)0.3μL,Mg SO4(50mmol/L)为0.1μL。扩增程序为95℃120s;95℃2s、61℃15s,27个循环;72℃60s。结论快速PCR扩增体系分型结果准确,用时仅19min,缩短了常规扩增用时,有较大的法医学应用价值。     

男性Y染色体Amelogenin Y片段及4个基因座同时缺失1例

1材料和方法1.1简要案情在某破坏公共财物案件中,因性别位点不符,3名“叶”姓男性犯罪嫌疑人的STR分型无法录入DNA数据库。经调查了解,该3名男性个体户籍地相同,年龄在30~50岁之间,发育状况良好,具备正常的男性特征。1.2DNA提取犯罪嫌疑人血样的基因组DNA采用Chelex-100法提取。1.3STR扩增分别采用Identifiler Plus扩增试剂盒、PowerPlex Y23 System试剂盒对3份样本血样DNA进行STR、Y-STR扩增,反应总体积25μL,扩增仪采用Applied Biosystems 9700 PCR仪,热循环条件按试剂盒推荐设定参数。     

两种国产磁珠试剂盒对常见PCR抑制物去除效果比较

目的比较国产博坤磁珠试剂盒和Wawasye磁珠试剂盒对法医学常见PCR抑制物的去除效果。方法选择6种常见PCR抑制物,胆汁酸盐、胶原质、腐殖酸、血红素、黑色素和尿素,分别将其与K562 DNA混合后,采用Identifiler试剂盒进行分型,以恰好抑制K562 DNA所有26个不同等位基因的抑制物浓度为标准添加浓度,在此基础上提高每种PCR抑制物的浓度,分别采用两种磁珠试剂盒对混有抑制物的标准品DNA进行纯化处理后,再进行PCR扩增和STR分型检测,统计STR基因座等位基因检出个数。结果分别混有1×、2×和4×标准添加浓度各种抑制物的K562 DNA经博坤磁珠试剂盒纯化后,均可检出所有STR基因座的全部等位基因;经Wawasye磁珠试剂盒纯化后,混有胆汁酸盐、胶原质、血红素和尿素的DNA均可检出所有STR基因座的全部等位基因,而混有腐殖酸和黑色素的DNA未检出任何等位基因。结论除Wawasye磁珠试剂盒无法有效去除腐殖酸和黑色素外,两种国产磁珠试剂盒对大多数PCR抑制物均具有良好去除效果。     

荧光标记短片段STR复合扩增系统的法医学应用研究

目的解决严重降解(低于300bp)DNA检验问题,提高降解DNA的检出率。方法重新设计引物,减小扩增产物片段长度,用荧光标记短片段STR复合扩增体系进行DNA检验,扩增结果与用Identifiler试剂盒扩增出的结果进行比较。结果用荧光标记短片段STR复合扩增系统对实际案件中的高度降解DNA检材进行检验,可以获得满意分型。结论该系统可用于严重降解DNA检材的检验工作。     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

口腔拭子DNA检验的实时定量研究

目的寻求提高口腔拭子的DNA检验效率的方法。方法对来源于不同个体或同一个体不同擦拭次数的口腔拭子用Chelex-100或磁珠法提取的DNA用实时定量PCR技术进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果在建立的Identifiler系统8μl扩增体系中,3个月内的口腔拭子用Chelex-100法提取的DNA模板1μl量较3μl量扩增效果好,磁珠法提取的DNA模板用量大小对复合扩增检测影响较小。结论用棉签擦拭颊粘膜5次制备口腔拭子,取其头部的约1/4用200μlChelex-100法提取DNA,然后用1μl模板进行复合扩增,是提高口腔拭子的DNA检验效率的简便可行的方法,但陈旧口腔拭子用磁珠法提取更能保证复合扩增分型成功。     

快速PCR扩增检验体系的建立及技术指标验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法运用快速扩增酶Fast Start与DNA TyperTM15 plus primer mix组合并优化建立快速扩增体系,对50份静脉血卡和35份案例检材提取的DNA进行扩增,并对体系检测结果的准确性、稳定性和检材适应性进行验证;采用不同稀释浓度的标准品9947,采用快速扩增方法进行检测,验证体系的灵敏度。结果模板DNA浓度达到0.50ng/μL,采用快速扩增体系可能获得准确分型;扩增耗时仅为69min,比常规扩增方法明显缩短;不同种类检材,经检测均获得良好分型图谱,同一份样本重复实验结果一致、稳定。结论本文建立的快速扩增体系可显著提升检测速率,其灵敏度、准确性、稳定性、检材适用性等技术性能,可满足实际检验的需求。     

PCR产物纯化增强STR分型强度的研究

目的研究PCR产物纯化对微量DNA的STR分型的影响。方法使用25pg/μL的9947标准基因组DNA为模板,标准程序扩增和STR分型检测。设立对照组A和实验组B、C、D。实验组分别使用分子筛(Qiagen DyeEX2.0spin kit)、超滤膜(Amicon Ultra-0.5,100KD)、亲和层析(Qiagen MinElute Column)3种DNA纯化方法,对照组不做任何处理。结果与对照组相比,3种方法均可显著提高STR分型强度(P峰高<0.001),平均峰高约为对照组的4倍,并且3种方法对提高STR分型强度无显著差异(P峰高=0.249)。结论 PCR产物纯化能显著提高微量DNA的STR分型强度,可用于骨骼、脱落细胞等微量DNA检材的检验。     

Trade mark cartoons 'FOR LIFE(R)'

‘A book may be good for nothing; or there may be onlyone thing in it worth knowing; are we to read it all through?’(Samuel Johnson) This section is dedicated to the review of ideas, articles,books, films and other media. It will include replies (and rejoinders)to articles, the evaluation of new ideas or proposals, and reviewsof books and articles both directly and indirectly related tointellectual property law. Writing a book review has never been more entertaining. The‘book’ under review is a 12 page trilingual (English,French, and Spanish) comic book compiled and co-published byWIPO and the National Institute for     

Unbrauchbarkeit der Wohnung (undichte Gasleitungen) – Rügeobliegenheit

Die Undichtheit von Gasleitungen stellt keinen offenkundigen und schwerwiegenden Mangel dar, der bei der geringsten überprüfung leicht erkennbar gewesen w?re. Wenn der Mieter im Zuge umfangreicher und kostenaufwendiger Adaptierungsarbeiten entgegen der im Mietvertrag ausdrücklich erkl?rten ursprünglichen Einsch?tzung der Vertragsparteien die Undichtheit der Gasleitungen erkennt, dann entspricht es Treu und Glauben, den Vermieter über diesen Mangel zu informieren und ihm die Gelegenheit zur Sanierung zu geben.     

菲德倍斯试剂检验唾液斑的有效性

目的验证菲德倍斯试剂（Phadebas Forensic tube test）检验唾液（斑）的有效性。方法从灵敏度、敏感性、常见载体的影响、唾液斑保存时间的影响,以及与STR检验的相关性等几个方面进行研究。结果0.01 ul唾液和阴干保存1年以上的唾液斑仍能被有效检出,该检验对其它常见体液（斑）反应不敏感,常见载体对该检验无影响。结论菲德倍斯试剂是人唾液（斑）检验的理想试剂。     

Mentype~ Argus X-8试剂盒在亲权鉴定中的应用价值

目的 验证Mentype Argus X-8试剂盒在中国人群中的应用价值.积累该试剂盒中所包含的8个X-STR基因座在中国人群中的遗传学数据.方法 应用Mentype Argus X-8试剂盒对华东地区177名汉族无关个体的血样以及104例二联体亲权鉴定案例进行X-STR分型.统计分析试剂盒中所包含的8个X-STR基因座的频率分布及遗传多态性信息.结果 8个X-STR基因座在中国人群中的多态性信息量在0.4454-0.9187.其中以DXS10135和DXS10101的多态信息含量最为丰富,在亲权鉴定案例中的排除率亦最高.除DXS7132基因座外,其余7个基因座在男性及女性群体中的分布差异无统计学意义.另外,中国人群中检测到一些新的等位基因:DXSl0074(等位基因15.3)、DXS10101(等住基因36)和DXS10134(等位基因37.3). 结论 Mentype Argus X-8试剂盒所包含的8个基因座具有高度多态性,在特殊亲权案件的鉴定中具有重要的应用价值.     

R. (Martin) v Mahony: the History of a Classical Certiorari Authority

R. (Martin) v Mahony, a decision of the Irish High Court of 1910, continues to be acknowledged by modern textbook writers as a leading authority for the classical rule that certiorari could not correct error of law. This rule, which considerably reduced judicial superintendence of magistrates' courts, had been established by the English court of Queen's Bench in the 1840s. However, the rule was repudiated by the Exchequer Division in Ireland in the late 1880s, which developed a novel, liberal theory of certiorari. This doctrinal innovation, which was used in overturning convictions under the anti-boycotting statute, the Criminal Law and Procedure Act 1887, appalled sections of Lord Salisbury's government, was disapproved of by the English courts, and split the Irish judiciary. The division caused by the doctrine persisted until 1910 when the Irish High Court, having assembled in banc in Martin's Case in order to resolve the impasse, re-established orthodox English doctrine.