测定DNA含量推断死亡时间——图像分析技术的标准化探讨

死亡时间 (PostmortemInterval ,PMI)的推断一直是法医学领域最重要且复杂的课题 ,为此人们应用各种手段做了大量的研究 ,也取得了一定进展。近年来 ,随着技术手段的发展和日益成熟 ,通过测定死亡后组织细胞DNA含量的变化来推断PMI ,有望成为一种更准确、可靠的方法。死后组织细胞DNA含量随PMI的延长而呈下降趋势 ,已被众多学者所证实[1,2 ] 。 2 0 0 0年刘良等[3 -5] 首次利用计算机图像分析技术 (ImageAnalysisTechnique ,IAT) ,对大鼠死后组织细胞DNA含量变化与PMI的关系进行了一系列研究 ,确立了建立多参数、多脏器、多元回…     

家兔急性有机磷中毒死后玻璃体液化学成分的变化趋势

目的 探讨家兔急性有机磷中毒死后不同时间眼玻璃体液化学成分的变化。方法用5％敌百虫制作家兔急性有机磷中毒动物模型,在死后0～72h内不同时间点,采用留置微量重复取样法吸取眼玻璃体液,以全自动生化分析仪测量眼玻璃体液中钾、镁、磷、钙、钠、氯浓度的变化,统计数据进行二项式回归方程拟合分析。结果家兔急性有机磷中毒死后72h眼玻璃体液中钾、镁、磷随PMI延长而逐渐升高,舻分别为0．9818、0．9700、0．9458,与PMI相关性好,其中30h内镁的相关性更好;钙、钠随PMI延长呈降低趋势,砰分别为0．7124、0．7355,相关性较差;氯表现不稳定掣仅为0．0869。结论家兔急性有机磷中毒死后玻璃体液中钾、镁、磷、钙、钠等离子浓度随PMI延长而改变,72h内总体衡量,钾与PMI最具有相关关系。     

大鼠肌肉中微生物ATP含量及其在死亡时间推断中的应用

目的 研究死后大鼠肌肉组织中微生物ATP浓度变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法取健康SD大鼠处死,死后不同时间取肌肉组织,用生物发光法检测微生物ATP浓度,对所得数据进行统计学处理.结果 死后肌肉组织中微生物ATP含量随时间延长而增加,于7d达到高峰,随后逐渐降低,并于10d再次略微升高.PMI在0～9d内与肌肉中微生物ATP含量变化拟合最优.以PMI为自变量的三次多项式回归方程为:y=0.020x3-0.166x2-0.666x+13.412(r2=0.989,P<0.01).结论 死后肌肉组织中微生物ATP含量变化可用于PMI推测;本检测方法所需检材量小,不受组织自身降解的影响.     

家兔死后眼玻璃体液镁，铁含量与PMI关系的研究

目的寻找一种精确推定PMI的方法。方法应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS),检测家兔死后96h内眼玻璃体液镁、铁元素含量,探讨其与PMI的相关性。结果家兔死后0～48h眼玻璃体液镁元素含量与PMI显著相关,6～48h铁元素含量与PMI显著相关,其二项式回归方程分别为y=0.0738x2+0.6997x+11.45(R2=0.9119)、y=0.0411x2-0.3148x+1.4113(R2=0.9594)。结论家兔死后眼玻璃体液Mg、Fe含量变化可作为推定48h内PMI的参考指标之一。     

猪眼房水中K＋、Na＋质量浓度与死亡时间的关系

目的 探讨房水中K+、Na+质量浓度与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法 利用Z-500原子吸收分光光度计检测在4℃、28℃下猪死后48h内眼房水中的K+、Na+质量浓度. 结果 4℃温度下,死后48h猪眼房水中K+、Na+质量浓度与PMI相关.推定方程为PMI=-0.178[K+]2+49.978(R2=0.995).PMI=120.987/[Na+/K+]-28.834(R2=0.905). 结论 房水中K+质量浓度变化可作为推断低温环境下尸体PMI的参考指标之一.     

家兔角膜上皮和内皮细胞DNA含量与PMI关系的图像分析

目的 探讨家兔角膜上皮和内皮细胞DNA含量与PMI的关系。方法 应用计算机图像分析技术,测定105只家兔死后72h内不同时间点家兔角膜上皮和内皮细胞核DNA含量(IOD)的变化值并做统计学分析。结果 家兔死后72h内其角膜上皮细胞和内皮细胞核DNA降解速率与PMI具有显著的相关性,并由此归纳出体现DNA降解趋势的二项式回归方程。结论 应用计算机图像分析技术,测量机体死后角膜内外皮细胞DNA含量变化,将会成为推断PMI精确、客观的新方法。     

家兔死后眼玻璃体液锌、镍含量与 PMI关系的研究

目的寻找一种精确推定PMI的方法。方法应用电感耦合等离子体质谱（ICP－MS）,检测了家兔死后96小时内眼玻璃体液锌、镍元素含量,探讨其与PMI的相关性。结果家兔死后24h内眼玻璃体液锌、镍元素含量与PMI显著相关,可作为推定早期PMI的参考指标,其二项式回归方程分别为y=0.1404x2－1.3351x＋3.8298（R2=0.9202）、y=0.0043x2－0.0596x＋0.2665（R2=0.9103）。结论家兔眼玻璃体液中Zn、Ni元素含量变化是推定早期PMI的参考指标之一。     

基于眼组织结构的死亡时间推断研究进展

死亡时间(postmortem interval,PMI)推断是法医病理学研究的重点与热点问题。近年来,国内外学者利用眼组织推断PMI取得了一定进展,机体死后眼角膜、房水、虹膜、晶状体、玻璃体液、视网膜等改变均呈现与PMI高度相关的时序性变化规律。本文基于眼组织不同结构死后形态学、生物化学、分子学、遗传物质改变等方面,对PMI推断研究进展进行了综述,对存在的问题及发展趋势进行探讨。     

应用死后眼球CT值变化规律推断死亡时间的研究

目的测量眼球整体CT值,并探究其死后的变化规律,探讨其是否可以作为推断PMI的新参数。方法采用健康成年新西兰兔10只,处死后放入20±0.5℃温箱保存,在死后0～180h的时间间隔内,每隔12h进行一次CT扫描,检测眼球整体的CT值随时间的变化情况。采用回归分析方法确定眼球整体CT值与PMI的关系。结果 PMI在0～180h之内,眼球的整体CT值随PMI的增加而增加,使用曲线拟合分析,其中三次方程的拟合效果最好,拟合回归方程为:y=-81.342+1.02x+0.099x~2-0.001x~3(x:眼球整体CT值,单位为HU;y:PMI,单位为h,R~2=0.969,P 0.001)。结论本研究表明,眼球CT值存在明确的死后变化规律,PMCT测量眼球整体CT值可作为法医学PMI推断的参数之一,有很好的应用前景,值得进一步研究。     

双眼交替微量取样检测兔玻璃体液钾镁离子浓度推测死亡时间

目的研究死后眼玻璃体液钾镁离子浓度变化及其与死亡时间的关系。方法取健康家兔处死,死后不同时间于双眼玻璃体液交替微量取样,采用全自动生化分析仪检测样本中[K+]、[Mg2+],对所得数据进行统计学处理。结果死后12~120h,家兔玻璃体液中[K+]由11.01mmol/L上升至32.97mmol/L,[Mg2+]1.12mmol/L上升至2.22mmol/L,两种离子浓度与PMI进行回归分析自变量为[K+]的二次多项式回归方程为y=0.1756x2-3.3188x+29.804(R2=0.9868);自变量为[Mg2+]的二次多项式回归方程为y=-46.916x2+248.01x-213.81(R2=0.9340);自变量为[K+]和[Mg2+]的二次多项式回归方程为y=-17.55-4.82[K+]+0.20[K+]2+75.77[Mg2+]-19.47[Mg2+](R2=0.9881)。用[K+]的方程推测PMI,当[K+]<26.0mmol/L(PMI<60h)时,平均偏离时间为2.7~9.4h,当[K+]>28mmol/L(PMI>72h)时,平均偏离时间>15h;用[Mg2+]的方程推测PMI,平均偏离时间几乎均在10h以上;用二元方程推测PMI,平均偏离时间较前两者小。结论死后眼玻璃体液[K+]、[Mg2+]随时间延长而升高,且浓度变化与时间呈强相关性。但从实际运用角度考虑,R2<0.98,或平均预测偏离时间过大的回归方程,不宜用于PMI推测;应用多指标建立多元回归方程是提高推测PMI准确性的可行方法。     

大鼠死后肌肉总腺苷酸及腺苷酸能荷的时序性变化

目的测定大鼠死后不同时间双后肢肌肉嘌呤腺苷酸[三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)]含量,计算总腺苷酸(total adenine nucleotide,TAN)含量和腺苷酸能荷(adenylic-acid energy charge,AEC)的变化值并探究其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法健康大鼠颈部脱臼处死后,20℃恒温保存,分别于死后0、24、48、72、96、120、144、168 h提取大鼠双后肢肌肉,利用反相高效液相色谱法测定嘌呤腺苷酸含量,计算双后肢肌肉组织的TAN和AEC,并分别建立其与PMI关系的相关回归方程。结果大鼠死亡168h内,ATP、ADP变化趋势不同,AMP的含量持续增加;TAN值随PMI的延长而逐渐增加,而AEC在死后168h内,整体呈现下降趋势。AEC随PMI变化规律明显,决定系数较高(R2为0.903),曲线拟合关系较好;ATP、ADP、AMP、TAN与PMI拟合关系不佳(R2为0.198~0.754)。结论AEC的死后变化规律为法医学PMI推断提供了新的研究思路。     

肋软骨及牙髓细胞DNA含量与PMI的相关性

目的探讨人死后肋软骨及牙髓细胞平均DNA含量与死亡时间(PMI)的相关性,寻求推断PMI的新方法。方法应用细胞图像分析技术分析高温(30～35℃)及低温(15～20℃)环境下人死后0～15d两种组织细胞平均DNA含量的降解情况。结果两种组织细胞平均DNA含量随死后时间的延长而逐步降解,其中低温组牙髓细胞平均DNA含量的降解在死后0～4d内有一个降解平台期。统计分析两组温度下两种组织细胞平均DNA含量与PMI有显著的负相关性(P<0.01)。结论依据两种组织细胞平均DNA含量的降解可进行PMI推断。     

家兔眼玻璃体液21例元素含量PMI关系的研究

目的寻找一种精确推定PMI的方法。方法应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS),系统研究了家兔死后96h内眼玻璃体液21种元素含量与PMI的相关性。结果眼玻璃体液Co、Mo、Cd、Sb、I、Pb、Bi、Li共8种元素与PMI无关。K、Mg、Fe、P、Na、Al、Ca、Ti、Ni、Cu、Zn、Sr、Ba共13种元素含量与PMI有关。结论眼玻璃体液K、Mg、Fe、P、Na、Al、Ca、Ti、Ni、Cu、Zn、Sr、Ba共13种元素与PMI有关。为研究人尸体眼玻璃体液元素与PMI的关系奠定了选择指标的基础。     

大鼠死后心、肝、肾巯基含量的时序性变化研究

目的 测定大鼠死后不同时间心、肝、肾3种组织内总巯基(TSH)、非蛋白质巯基(NPSH)、蛋白质巯基(PSH)含量并探究其与死亡时间(Postmortem Interval,PMI)的关系。方法 健康大鼠颈部脱臼处死后，20℃恒温保存，分别于死后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h提取大鼠心、肝、肾。利用吸光光度法，测定大鼠死后不同PMI 3种组织内不同类型巯基含量，分别建立其与PMI的相关回归方程。结果 大鼠死后168 h内，3种组织NPSH含量变化规律均不明显；心脏TSH与PSH含量随PMI无明显变化规律，而肝和肾TSH与PSH含量在24 h内升高，随后持续下降。肝、肾TSH和PSH含量与PMI的关系用二次方程拟合较好，其中肝TSH的相关系数最高(R²=0.834)，肾TSH和PSH以及肝PSH的相关系数较低(R²=0.768～0.825)。肝、肾TSH和PSH含量与PMI多元线性拟合关系较好(R²=0.862)。结论 肝组织内TSH含量与PMI相关性较好，可用于PMI推...     

离体人胸骨骨髓DNA降解与腐败尸体死亡时间推断的初步研究

目的研究死后胸骨骨髓DNA的降解与较长死后间隔时间(PMI)的关系。方法采用改良Feulgen染色及计算机图像分析技术对离体人胸骨(取材后分别室温搁置0,1,3,5,7d)骨髓DNA含量进行定量检测。结果在较长PMI范围内,人胸骨骨髓DNA含量仍呈现下降规律。结论人胸骨骨髓DNA降解规律可望应用于较长PMI的推断。     

运用猪眼视网膜细胞DNA降解程度推断死亡时间

目的运用单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis,SCGE）技术观察猪眼视网膜细胞DNA降解规律,推断死亡时间（postmortem interval,PMI）。方法猪死后取眼球放置于避光、温度（15&#177;2）℃、湿度（50&#177;5）%条件下,分别于2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h提取猪眼球视网膜细胞,进行SCGE,荧光显微镜采集图像,并运用单细胞凝胶电泳图像分析系统（IMI 1.0）进行图像分析。结果死后2～24h,视网膜细胞DNA降解程度随着PMI延长而增加;头DNA含量（%）、LT/LH、IT/IH与PMI的回归方程分别为y=92.227-5.188 x＋0.019 x^2＋0.001 x^3（R^2=0.971）、y=0.035e^0.191x（R^2=0.947）、y=0.099 e^0.264x（R^2=0.955）。结论运用SCGE检测视网膜细胞DNA降解情况有助于推断PMI。     

大鼠脑细胞DNA含量与死亡时间关系的图像分析

应用计算机图像分析技术 ,测定 15只大鼠死后 48h内不同时间点大鼠脑细胞核DNA含量的面积(Area)、等效直径 (Mean Dia ,MD)、异形指数 (Indexofdensity ,ID)、平均光度 (Averageopticaldensity ,AOD)、积分光度 (Integralopticaldensity ,IOD)、密度变化数 (L Den Coe ,LDC)和平均灰度 (Averagegray ,AG)等七项参数的变化值。结果证明 ,在大鼠死亡后 2 8h内 ,其脑细胞核DNA降解速率与PMI具有一定相关性。将每个参数的测量值进行多项式运算 ,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程。其结果表明 ,应用计算机图像分析技术 ,测量机体死后DNA含量变化 ,将会成为推断PMI精确、客观的新方法。     

玻璃体液推断死亡时间的研究进展

死亡时间(postmortem interval,PMI)推断是法医学领域最具挑战性的问题之一。玻璃体液一直是法医病理学用于PMI推断和死后化学物质分析的热点之一。本文从玻璃体液与其他常见体液的比较、温度对玻璃体液的影响、玻璃体液检测方法及数据拟合方法等方面进行综述,以期为利用玻璃体液推断死亡时间提供新的思路。     

离体血细胞钾钠离子代谢迁移的实验研究

血细胞外液钾钠离子液度的变化与实验时间存在着一定的关系,国外早有报道死后血液钾钠离子含量的变化与死亡时间的关系。有的报道死后血钾含量随死亡时间按比例地增加,特别是在死后3小时以后的变化很明显,但数据相当分散。1959年Jetter等人发现血清钠在死后最初12小时保持稳定,之后才开始下降,而1974年Coe报道血钠在死后立即下降,但其下降速度的个体差异很大,大样本测定的平均下降速度为     

肝脏电导率推断晚期死亡时间的可行性研究

目的 研究不同死亡时间（PMI）大鼠肝脏浸渍液电导率（EC）及其相关化学小分子的含量与晚期PMI的关系，从而探讨应用组织EC推断PMI的可能性以及EC的内在变化机制。方法 选用48只成年健康无病原体SD大鼠，在同一时间处死后保存于25℃左右的恒温环境中，分别于死后7 d内提取大鼠肝组织并制成匀浆浸渍液，测定浸渍液EC及其常见小分子（电解质、微量元素、无机氮）的含量，并分析肝组织EC、导电小分子以及PMI三者之间的关系。结果 大鼠死后7 d内，随着PMI的延长，肝脏的EC明显增加，钙离子、镁离子、无机磷、尿素氮和肌酐的含量也随着PMI的增加而明显增加R2=(0.93～0.99)。钾离子和尿酸的含量随着PMI的延长而上下波动，其变化没有统计学意义（P> 0.05）。死亡1 d后，没有检测到钠离子和氯离子。此外，钙离子、镁离子、无机磷、尿素氮和肌酐与EC的变化具有显著的线性关系，R2=(0.87～0.98)。结论 利用EC和多种肝脏化学小分子的含量变化来推断晚期PMI有潜在的应用价值。而且，这些化学小分子含量的变化也可能有助于理解死后肝脏分解过程中EC增加的微观机制。