KingFisher磁珠纯化仪在提取脱落细胞检材DNA上的应用

目的验证利用KingFisher磁珠纯化仪提取脱落细胞DNA的效率。方法使用磁珠法及KingFisher磁珠纯化仪的富集浓缩程序和纯化程序提取脱落细胞DNA,并进行STR检验和结果统计。结果对45例脱落细胞生物检材进行DNA提取检验,获得完整STR分型的29例,成功率达到64%。结论 KingFisher磁珠纯化仪提取脱落细胞检材DNA,方法简单快速,成功率高,可以用于案件DNA检验应用。     

海胆壳多糖的提取及PMP柱前衍生化高效液相分析

目的建立海胆壳多糖提取工艺及柱前衍生化条件。方法水提醇沉法提取壳多糖,采用正交实验优化提取工艺;柱前衍生化后,利用高效液相色谱法检测单糖组分,对海胆壳多糖的脾淋巴细胞免疫抑制活性实验进行了初步探索。结果海胆壳多糖最佳提取工艺为15倍的水,70℃水浴回流1 h,提取3次;100μl壳多糖水解液,加入50 ml Na OH(0.2 mol·L-1),40μl l-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(0.5 mol·L-1),混匀后70℃水浴30 min,取出冷却,加入50μl HCl(0.2 mol·L-1)中和,200μl氯仿萃取3次。药理学实验表明海胆壳多糖溶液在浓度1~10μg·ml-1范围时显示出一定的免疫活性。结论本次实验成功建立海胆壳多糖的提取工艺和衍生化条件。     

一种基于全自动多重裂解滤膜法的研究应用

多重裂解滤膜法结合了差异裂解法及滤膜法的优点,经两次短时裂解后可快速去除女性成分细胞并将精子细胞截留在滤膜上,再经深度裂解即可将精子细胞DNA释放,裂解产物则使用磁珠法进行提取纯化.该方法在法医专用核酸提取工作站上实现了全自动化工艺,可在180min内完成24个混合斑样本的分离提纯.使用全自动多重裂解滤膜法对223例性...     

腐败尸体不同组织DNA扩增效果分析

目的 :对腐败尸体不同组织扩增效果进行比对。方法 :将腐败尸体的毛发 (带毛囊 )、肌肉、骨头、软骨、血液 (血纱 )用Chelex -1 0 0的方法进行消化提取DNA ,荧光标记复合扩增 ,扩增产物用荧光DNA自动测序仪进行分离和检测。结果 :不同的腐败组织扩增效果不相同 ,以软骨的扩增效率为高。结论 :针对不同情况提取检材 ,特别是提取软骨组织对日常检案非常重要。     

微湿布条DNA检验

本文根据对微湿检材的观察及分析,通过直接剪取法处理检材,再对比改良硅珠法和常规硅珠法纯化微量生物检材中的DNA。结果验证采用改良硅珠法提取微量生物检材中DNA,更易得到完整的STR基因分型图谱,而常规硅珠法提取微量生物检材中的DNA,会导致大片段位点丢失。     

固相萃取-GC／MS提取离子法检验家兔尿液中氯胺酮

文章研究了应用固相萃取-GC/MS提取离子法检验家兔尿液中氯胺酮的方法。用1mol/L氢氧化钠溶液调待检尿液pH为9~10,上GDX-403柱,以氯仿洗脱。分析结果显示氯胺酮在0.4μg/mL~8.0μg/mL范围内线性关系良好,所得标准曲线的回归方程为:y=4532.55 53034.8x,r2=0.9995。检出限为30ng/mL。平均回收率为92.4%。     

硅珠法提取腐败肋软骨DNA

本文对硅珠法在提取腐败肋软骨DNA方面进行实验研究,硅珠提取法克服了常规Chelex-100提取法扩增效率低的缺点,具有简捷、灵敏的优点,并不受检材种类和条件影响,扩增成功率高,实验所需时间短,有很强的应用价值。     

输精管结扎男性强奸案的DNA检验一例

1案例资料2005年某月某日邹某报案称在广州市番禺区一出租屋内被马某强奸,马某在其大腿内侧射精,事后事主曾用纸巾擦拭。提取邹某及其丈夫袁某、马某血纱及邹某大腿内侧擦拭物、现场纸巾进行DNA检验。2DNA检验将邹某大腿内侧擦拭物、现场纸巾加800μlTNE、80μl10%SDS、10μl1%的PrK,37℃消化3小时,套管离心去除载体,上清在PLG管(eppendorf公司)内进行氛-氯仿抽提,4℃保存备检;沉渣两次水洗后加200μlchelex-100、10μ1%PrK、20μ1DTT56℃消化过夜,震荡10sec,98℃8min,震荡10sec,10000rpm离心3min,4℃保存备检。按Amp.FL.STR.Pr…     

GA318-32A核酸自动提取仪原理与应用

DNA自动提取工作站与磁珠提取法相结合设计而成的磁珠DNA自动提取系统正逐渐成为DNA提取步骤中被广泛普及和应用的主流方法之一。GA318-32A核酸自动提取仪即是基于磁珠提取法研制而成的一套高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备。它可在短时间内利用机器磁棒架上的磁棒,将吸附有核酸的磁珠移动至不同的试剂孔内,经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱,最终得到高纯度核酸。从GA318-32A核酸自动提取仪的结构原理、主要特征、法医学应用等方面进行阐述,以期使该仪器在法医DNA检测中得到更广泛的应用。     

硅珠法提取DNA的灵敏度及抗抑制能力探究

硅珠法提取DNA具有灵敏度高、提取产物纯净等优点,在法医领域有广泛应用。采用实验室模拟的方法,以007标准DNA以及抗凝冻存血液为样品,对硅珠法的提取灵敏度进行了系统测试,并选取7种常见抑制物,包括灰尘、铁锈、油脂等,对硅珠法的抗抑制能力进行了探究。结果显示,硅珠法与磁珠法相比,在提取灵敏度上并无明显差异,当DNA达到300pg时,出位点率皆为95%以上,当千倍稀释血量达到10ul时,出位点率皆为86%以上。在抗抑制能力测试中,硅珠提取法对所选取的7种抑制物都有良好的抗性,当抑制物的量加倍时,仍可获得足够的STR位点。结果表明,硅珠法具有良好的灵敏度及抗抑制能力,可广泛适用于各种法医检材。     

十年前血痕DNA检验一例

血痕是DNA检验中最常见的检材,条件较好的血痕检材用常规的chelex-100法提取就能得到理想的检验结果。然而我们日常检案中所遇到的血痕检材往往有腐败、降解、污染等问题存在,这时我们就要优化我们的提取方法,以达到理想的检验结果。本文所报道的这例血痕检材来自于一起发生在十年前的杀人案的现场,作者成功地对这例血痕进行了DNA检验,得到了理想的检验结果,现报道如下:1案例资料取棉签沾纯水,擦去血痕上粘附的灰尘。用刀片刮取适量血痕检材2份,分别装入2个1·5m l的离心管中,编为1、2号。1号管采用5%Chelex-100法提取检材DNA;2号管用5%…     

HPLC-MS/MS法同时测定尿液中的常见毒品及其代谢物和常见药物

应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)建立了一种简便、快速、灵敏度高的定量检测尿液中甲基苯丙胺、苯丙胺、吗啡、O6-单乙酰吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮等常见毒品及其代谢物方法,尿液经蛋白沉淀、过滤后,采用BEH HILLIC(2.1*100mm,1.7μm)色谱柱进行分离,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测,6种毒品及代谢物在5~500ng/mL浓度范围内均获得良好的线性(r2=0.998),回收率为91.04%~115.81%,定量检出限为0.1~1ng/mL。此外建立了同时检测尿液中40种常见药物的定性检测方法,定性检出限为1~10ng/mL。     

国产DNA测序仪及提取试剂在接触DNA检验中的应用

如何提高接触DNA检材的检验成功率是DNA实验室面临的难题之一,研究分析了影响接触DNA检验成功率的关键环节并采用国产DNA测序仪及提取试剂检验方案,通过实际案例进行验证,针对接触DNA检验中的关键环节提出了方法和建议。     

Chelex-100法在微量检材DNA检验中的应用2例

1案例资料案例12005年某月,在广东某市一住宅内发生一起凶杀案。现场勘查在垃圾桶内提取了吃过的花生糖及口香糖各一粒、在桌面提取柚子核一堆,作者提取了花生糖及口香糖上的脱落细胞的DNA,并对柚子核进行肉眼检查,挑选了其中一粒有明显咬痕的柚子核进行DNA检验,用Amp·FL·STR     

微量物证的STR分型及数据库在交通事故研判中的应用

本文主要以毛发为微量物证特例来探讨微量物证的STR分型检验方法及其数据库在交通事故研判中的应用,并对毛发STR分型的影响因素进行分析研究,运用了chelex-100法提取DNA,使用AmpFLSTR (r) Identifiler (r)试剂盒检测样品15个STR基因座和Amelogenin性别基因座的基因型。研究表明,清洗毛发可防止污染,孵育1小时可消化完全毛囊,不用DTT不影响STR分型效果,室温放置半年也不会影响分型效果,成人毛发一般取1根提取DNA后进行STR分型可检测成功,婴幼儿毛囊较小者取2根或3根毛发扩增,或取1根毛发增加DNA模板用量可获得完整分型结果。对于毛发检材稳定、DNA提取方法简单、检材用量易于把握、不必对人体造成再次破坏便能严格公正执法与准确研判事故等优点而言,这一分型检验方法为分析微量物证数据库在交通事故处置实践中的应用奠定了重要基础。     

固相萃取GC/MS法检验鱼塘水中的丁草胺

本文采用大体积进样-全自动固相萃取仪萃取鱼塘水中微量的丁草胺并进行GC/MS分析。结果显示,该方法对鱼塘水中的微量丁草胺的提取效果较好,适用于较大体积的水样的处理,特别有助于鱼塘投毒案件的检验。     

HPLC-MS法测定盐酸纳洛酮

用HPLC-MS法对盐酸纳洛酮进行鉴定,可测定注射用盐酸纳洛酮中纳洛酮的含量。以AgilentZORBAXSB—C18（4．6×100mm,1．8μm）为色谱柱,以含5mm01甲酸铵的0．1％甲酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,流动相B的比例为20％（v／v）进行等度洗脱,流速0．40mL／min,柱温30℃。离子源为DualESI,正离子模式扫描,定量离子选择m／z为328．1550的分子离子峰[M＋H]＋。盐酸纳洛酮浓度在0．05μg／mL～10μg／mL范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,回归方程为,=1086312J＋35096,相关系数r=0．9999,检出限为0．42ng。平均回收率在96．1％～103．7％之间,RSD在2．7％～6．6％的范围内。该方法简便、精确、灵敏、专属性好,在公安实战中可以广泛应用。     

QIAamp方法在疑难生物检材STR分型中的应用

本文通过采用QIAcube自动纯化仪与QIAamp DNA Investigator试剂盒,对320份生物检材包括血迹、烟蒂、肋软骨、脱落细胞4类常见疑难生物检材进行DNA提取与纯化,采用Sinofiler试剂盒进行扩增检验。在320份生物检材中,成功获得300份检材STR分型,且获得的STR分型均在13个基因座位以上。表明QIAamp方法适合常见疑难生物检材的日常检验。     

固相萃取GC/MS(SIM)法检测尿中沙啡

应用Oasis HLB固相柱对采集的吸毒人员的尿样进行萃取,用GC/MS(SIM)法检测。建立尿中沙啡的简便快捷测定方法。结果表明Oasis HLB固相柱对尿中沙啡的提取效果好,操作简便快捷。该方法可弥补目前暂无沙啡快速筛选试剂盒的不足,为戒毒工作提供方便。     

大容积进样固相萃取GC/MS法检验水中的微量甲拌磷

本文通过在不同体积的水中添加一定量的甲拌磷,然后采用大体积进样─全自动固相萃取仪萃取溶液中的甲拌磷并进行GC/MS分析,测定其回收率。结果显示,该方法对水中的微量甲拌磷的提取效果较好,适用于较大体积的水样的处理,特别有助于鱼(虾)塘投毒案件的检验。