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牛霉形体PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法.并对该方法进行了敏感性和特异性试验.该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性.利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法. 相似文献
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单克隆抗体阻断ELISA检测SPF猪与非SPF猪肺炎霉形体抗体的比较严彩红刘志南(北京市SPF猪育种管理中心100095)猪霉形体肺炎是由猪肺炎霉形体(Mycoplasmahyopneumoniae)引起的一种慢性呼吸道传染病,带菌猪是主要传染源。... 相似文献
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禽源霉形体细胞蛋白SDS┐PAGE电泳分析李自力毕丁仁(华中农业大学畜牧兽医学院武汉430070)目前对细菌的分类主要以形态学、生化及血清学特征为基础,霉形体因缺乏细胞壁,细胞呈高度多形态,很少具有特征性形态的霉形体种,所以形态学特征在霉形体种的分类... 相似文献
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根据鸡毒霉形体( MG) 、滑液霉形体( MS) 的基因文库,设计并合成了分别与MG、MS 某段基因序列互补的两对引物,用这两对引物进行多重聚合酶链反应( MultiPCR) 同时检测MG 与MS。当样品中同时含有MG 和 MS 的目的模板DNA 时,均同时得到2 条大小与试验设计相符的732 bp( MG) 和207 bp ( MS) 的PCR 扩增带;而对其它8 种禽病病原的扩增均为阴性。敏感性测定结果表明,该多重PCR 技术最低能同时检出100 fg 的MG、MS DNA 模板量 相似文献
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蛋用鸡滑液霉形体病的诊治随着集约化养鸡业发展,霉形体病成为其重要的传染病,其中以败血霉形体(Mycoplasmagalisepticum,MG)感染引起的慢性呼吸道病常见,而滑液霉形体(Mycoplasmasynovium,MS)感染引起的滑液囊炎较... 相似文献
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利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。 相似文献
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我国山羊传染性胸膜肺炎病原的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文按Freundt等(1979)介绍的方法,较系统地鉴定了我国山东、山西和新疆三个地区分离保存的山羊传染性胸膜肺炎病原,其中2株是经过山羊传代保存的强毒株,2株是经过鸡胚保存的毒力减弱株。结果表明,上述4株病原在形态特征、培养特性、生化特性和血清学反应等方面均与丝状霉形体山羊亚种国际模式株PG,相一致。因此,我国山羊传染性胸膜肺炎病原是丝状霉形体山羊亚种(M.mycoides subsp. Capri.)。 相似文献
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根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp.capri,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他病原菌不能扩增出任何条带,它最低能够检测出10 pg的Mmc DNA,说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示,对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段,表明,该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。 相似文献
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《中国兽医科学》2020,(35)
本文旨在筛选出新的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae, Mccp)特异性分子诊断靶标。首先通过全基因组本地BLASTp方法筛选得到Mccp理论上特异的蛋白基因序列,经BLASTn验证、优选特异性基因92.1作为候选靶标,设计引物92.1F/R,采用普通PCR体系检测4株Mccp(1801、1601、1309F、Zly-14)和7种其他支原体基因组DNA,包括无乳支原体(Ma)PG2、丝状支原体山羊亚种(Mmc)PG3、Mmc YG(前称丝状支原体丝状亚种大菌落型,MmmLC)、绵羊肺炎支原体(Mo)Y98、山羊支原体山羊亚种(Mcc)Ckid、牛支原体(Mb)08M、李奇氏支原体(Ml)PG50,并检测Mccp、Mo、Mmc人工感染羊试验样本DNA,评估该体系的特异性。结果表明92.1F/R引物只能从Mccp菌株及其感染试验样本中扩增出509 bp目的条带,证实该引物可用于检测Mccp,92.1序列可作为CCPP新的核酸诊断靶标,为CCPP诊断和实验室研究提供了一种新的分子标记。 相似文献
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霉形体 (Mycoplasma)是软皮体纲 (Mollicutes)霉形体目(Mycoplasmatales)中的一类原核微生物[1] 。霉形体及霉形体病的研究 ,始于 1898年Nocard从牛传染性胸膜肺炎病灶中分离出该种病原体 ,至今已愈百年 ,但早期由于诸多因素 ,这方面的研究进展缓慢。 1962年Chanock及Hayflick在人工培养基上分离肺炎霉形体获成功后 ,霉形体的研究得以迅速发展。资料报道 ,截至 2 0 0 0年分离出的霉形体达 160种 ,遍布世界各地[2 ,3 ] ,对人类及牛、羊、猪、鸡等的危害较大。同时实验动物及细胞培… 相似文献