SDS┐PAGE和免疫印迹技术对绵羊肺炎霉形体和丝状霉形体山羊亚种膜蛋白的分析

ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ和免疫印迹技术对绵羊肺炎霉形体和丝状霉形体山羊亚种膜蛋白的分析１）逯忠新邓光明包慧芳梁桂香（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）绵羊肺炎霉形体（ｙ－９８，下同）和丝状霉形体山羊亚种（ＰＧ３，下同），都能引起山羊传染性胸膜肺炎，两...     

F-2毒素检测方法研究——离心薄层层析法检测

采用离心薄层层析仪分离真菌毒素,国内外尚未见报道。我们试用离心薄层层析法分离真菌毒素F-2,以便探索新的真菌毒素检测方法。材料与方法(一)仪器 ①LBC-I型离心层层析仪;②紫外线分析仪。(二)洗脱展开系统 ①甲苯:三氯甲烷:丙酮(To:TC:A 3:15:1 V/V/V);②三氯甲烷:甲基异丁酮(TC:MIBK 5:1 V/V)。     

F-2毒素检测方法的研究——F-2的光谱分析

1986年我们从饲料中分离出引起奶牛流产的物质,其生物学特性及薄层色谱特征均被证明为F-2毒素。该物质分离的纯品进一步通过光谱分析,也确定为F-2。材料与方法(一)F-2样品的制备1.菌种:QFM-1和QFG-1。2.培养方法:大米50g加40％水,分装500ml三角瓶内,121℃高压灭菌30分钟,冷却后接上述菌种,27℃培养14天,15℃培养21天,25℃再培养14天。培养物取出后65℃烘干,球磨机粉碎后备用。3.提取制备F-2纯品:用正己烷和三氯甲烷提取,经离心薄层层析仪分离(以TO:TC:A=3:15:1 V/V/V为展开洗脱剂),刮取转子硅     

F-2毒素检测方法研究——柱色谱洗脱剂的筛选

F-2毒素除直接用薄层色谱法检测外,还可经柱色谱法分离,除掉样品中大量杂质,然后再通过薄层色谱法定性、定量或提纯。柱色谱法是大剂量提纯真菌毒素必要程序之一,因此筛选分离物组份集中的洗脱剂,将是试验的主要目的。     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。     

牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。     

F-2毒素卫生标准研究——妊娠奶山羊的安全剂量试验

F-2毒素的生产真菌及其理化性状,国外已有广泛报道。本毒素对动物的影响虽已引起人们关注,但还缺乏系统的研究。根据我们调查,我国饲料中F-2毒素的污染率及含量均很高,并引起某     

猪胸膜肺炎放线杆菌APXⅡA基因原核表达载体的构建及其表达

经PCR从含有APXⅡA基因片段的重组质粒 pT APXⅡA中扩增出了APXⅡA基因。同时对目的基因和表达质粒 pGEX 4T 1进行了双酶切 ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析 ,证明连接向位和阅读框架正确。成功构建了APXⅡA基因的原核表达载体 pGEX APXⅡA。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下 ,用SDS PAGE分析表达目的蛋白。结果表明 ,蛋白质的分子质量为 10 2 .5ku。     

甘肃省羊传染性胸膜肺炎血清学调查

由羊肺炎支原体（Myc－oplasmaOvipneumonia）引起的绵羊、山羊传染性胸膜肺炎已成为世界性分布的一种重要传染病。本病能感染不同年龄、性别的绵羊、山羊。在我国陕西、青海、宁夏、四川、云南、辽宁等省均有发生本病的报道。1987年在甘肃省也首次确定了该病的存在。为了解本病在甘肃各地羊群的感染情况和为本病的防治提供依据，我们于1991年以来，对甘肃省的酒泉、阿克塞、金塔、张掖、皇城羊场、天祝、古浪、景泰、漳县、环县、合水、华池等县（市）进行了羊传染性胸膜肺炎血清学调查，现将结果报告如下。（一）材料和方法1.血清:被检血…