免疫胶体金技术及其法医学意义

<正> 1 胶体金概述 胶体金由金化合物的水溶液制备而成。在氯金酸(HAu—CI4)的水溶液中加入还原剂,如柠檬酸、鞣酸、抗坏血酸(即维生素C)和白磷等,金离子被还原而聚集成5～60 nm的金颗粒,在一定条件下呈疏水胶体状态,故称胶体金。检测溶液中的抗原(或抗体)常选用15～30 nm的胶体金颗粒。     

鼠抗人转铁蛋白抗体轻链与重链可变区基因库的制备

以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到eDNA合成所需的浓度后,反转录制备出eDNA,在合成的eDNA中加入轻、重链引物,扩增制备出小鼠抗人转铁蛋白抗体的轻、重链可变区基因库。     

抗人转铁蛋白单链抗体的研制及部分性能研究

研制人转铁蛋白的单链抗体。以纯化人转铁蛋白免疫小鼠,制备小鼠脾脏 mRNA,RT-PCR 扩增重轻链可变区基因;Linker 连接及引入 Sfi Ⅰ和 NotⅠ酶切位点构建单链抗体基因;同载体 pCANTAB 5E 连接,转化 E.coliTG1细胞,以 M13K07挽救制备噬菌体抗体呈现文库,筛选抗原阳性重组噬菌体粒子(Panning);感染 E.coliHB2151菌株,制备可溶抗体并检测其性质;测定抗体基因序列并分析同源性及结构特征。制备出4株分泌抗人转铁蛋白可溶抗体的 E.coli HB2151菌株。抗体基因只由小鼠抗体的轻重链可变区基因构成,开放读码,无终止子,并紧接一末尾为一琥珀终止密码的 E 末端序列,其对应氨基酸序列 V_H 和 V_L 部分均遵从抗体可变区特征。实验证明,可把基因工程抗体技术应用于法医血清学,以制备新型抗体试剂。     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因序列测定及分析

从携带人转铁蛋白单链抗体基因载体转化的大肠杆菌菌株中提取质粒,经电泳分析及筛选、纯化出线状质粒DNA,定量后以载体上人转铁蛋白单链抗体基因插入子两边的已知DNA序列经合成后作为引物进行测序扩增凝胶电泳,将得到的人转铁蛋白单链杭体基因序列重轻链可变区部分同基因库中鼠抗体重轻链进行同源比对,证明人转铁蛋白单链抗体基因确由鼠抗体重轻链可变区基因构成,在此基础上,进一步对基因核苷酸序列的可变区结构特征作推断分析,并推导出其对应的氨基酸序列.