桃红四物汤对糖尿病脑病大鼠认知功能的保护作用

目的 观察桃红四物汤对糖尿病脑病（diabetic encephalopathy，DE）模型大鼠脑神经细胞的保护作用及机制。方法 采用高糖、高脂饲料喂养以及链脲佐菌素诱导复制DE模型大鼠。选取成功建立的DE模型大鼠，随机分为模型组（蒸馏水），桃红四物汤低剂量（4.5 g/kg，相当于临床等效剂量１倍）、中剂量（9 g/kg）、高剂量（18 g/kg）组，二甲双胍组（0.2 g/kg），多奈哌齐组（1 mg/kg），每组10只，另取正常雄性大鼠10只作为对照组，每天灌胃给药1次，连续5周。观察各组大鼠血糖与体质量的变化，采用Morris水迷宫实验观察各组大鼠学习和空间记忆能力，采用试剂盒检测各组大鼠血清三酰甘油（triglycerides，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和脑组织过氧化脂质（lipid peroxide, LPO）含量和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的活性，苏木精-伊红染色观察各组大鼠海马组织神经细胞形态学变化，实时定量聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）、β-分泌酶（β-secretase，BACE1）、β-淀粉样蛋白（amyloid-β，Aβ）mRNA表达水平。结果 桃红四物汤能显著降低DE模型大鼠血糖水平（P＜0.05），显著改善DE模型大鼠的学习记忆能力（P＜0.05），能显著降低DE模型大鼠体内TG、TC、LDL-C水平（P＜0.05），升高体内HDL-C水平（P＜0.05），能显著减少DE模型大鼠海马组织神经细胞的损伤，降低脑组织内LPO含量、NOS活性（P＜0.05），能显著抑制DE模型大鼠海马组织中APP、BACE1、Aβ1-40、Aβ1-42的表达水平（P＜0.05）。结论 桃红四物汤能够降低DE模型大鼠脑内氧化应激反应，通过抑制APP和BACE1的表达，减少Aβ的积聚，发挥神经细胞保护作用，改善DE模型大鼠的学习记忆能力。     

桃红四物汤保护2型糖尿病模型大鼠血管损伤的实验研究

目的 观察桃红四物汤对2型糖尿病模型大鼠胸主动脉的保护作用，并探究其作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型，桃红四物汤连续干预模型大鼠8周，观察模型大鼠胸主动脉的病理学变化，Western blot法检测胸主动脉核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）蛋白表达，RT-qPCR技术检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）mRNA表达，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量。结果 桃红四物汤可显著改善模型大鼠胸主动脉损伤；显著抑制模型大鼠胸主动脉NF-κBp65蛋白和MCP-1、VCAM-1 mRNA的表达（P<0.05），显著降低血清TNF-α、TGF-β1的含量（P<0.05）。结论 桃红四物汤可有效保护模型大鼠胸主动脉病理损伤，其作用机制与干预NF-κB信号通路，抑制MCP-1、VCAM-1、TNF-α和TGF-β1表达有关。     

桃红四物汤多糖的结构分析及对缺血性脑卒中大鼠的抗炎作用

目的 探究桃红四物汤多糖的结构特征以及其对缺血性脑卒中大鼠的抗炎作用，为后续药效学研究提供基础。方法 采用水提醇沉法提取桃红四物汤多糖，苯酚—硫酸法测定多糖的总糖含量，凝胶渗透色谱测定桃红四物汤多糖的分子量，分析其单糖组成及红外吸收特征。采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型，24 h后进行神经功能评分，将大鼠随机分为7组：假手术组，模型组，桃红四物汤多糖低、中、高剂量组，桃红四物汤组和尼莫地平组。给药7 d后采用Berderson评分进行神经功能评分；TTC染色法检测脑梗死率，ELISA法检测血清白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平，苏木精—伊红染色观察脑组织病理损伤情况；免疫组织化学法和Western blot检测脑组织中炎症因子的表达水平。结果 桃红四物汤多糖中总糖的含量为75.25%，分子量为2.47×104Da，是由甘露糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成的杂多糖。红外光谱结果显示,桃红四物汤多糖的结构中有多糖的特征吸收。动物实验结果表明，桃红四物汤多糖干预后，大鼠脑组织损伤得到改善，神经功能评分和脑梗死率有不同程度的下降，血清和脑组织中IL-6、IL-1β和TNF-α的水平也明显降低。结论 桃红四物汤多糖通过抑制炎症反应发挥对缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用。     

桃红四物汤干预后的血小板外泌体对脑缺血再灌注模型大鼠的血管新生作用

目的 探究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction, THSWD)干预后的血小板外泌体(platelet-derived exosomes, PLT-Exos)对脑缺血再灌注大鼠的血管新生作用。方法 采用超高速差速离心法提取PLT-Exos,透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米微粒示踪分析检测外泌体粒径分布,蛋白质免疫印迹法检测外泌体标志蛋白表达水平;建立大鼠脑缺血再灌注模型,将所提取的经THSWD干预后的PLT-Exos通过尾静脉注射到模型大鼠体内,再通过脑血流量测定、苏木精-伊红染色、免疫荧光染色,验证THSWD-PLT-Exos对大鼠脑缺血再灌注模型血管新生的治疗作用。结果 提取的PLT-Exos表征符合典型。THSWD-PLT-Exos可显著提升脑缺血大鼠脑部的血流量,改善海马区损伤,具有良好的血管生成和神经保护作用。结论 THSWD-PLT-Exos对脑缺血再灌注大鼠损伤有良好的血管新生作用。     

“守正创新”理念下中药学专业中药药理学课程教学初探

中药药理学是中医药理论与现代科学结合的重要桥梁,是中药学专业的核心课程。为全面提升中药人才培养质量,安徽中医药大学中药药理学教学团队将“中医药文化自信”“中医药思维”“批判性思维”“勇于探索的科学精神”等元素与教学环节融合融通,推进“守正创新”理念下的课程建设,培养德才兼备的中医药创新人才。     

桃红四物汤抗血栓形成作用研究

目的探讨桃红四物汤的抗血栓作用。方法采用Chandler环血栓形成法测定体外血栓的湿质量、干质量和血栓长度，采用大鼠下腔静脉结扎血栓形成法观察静脉血栓湿质量及干质量，采用二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）和肾上腺素致肺栓塞实验模型观察小鼠肺栓塞时间。结果桃红四物汤能显著降低体外血栓长度、湿质量和干质量，显著降低体内静脉血栓湿质量和千质量，显著缩短静脉注射ADP和肾上腺素所致小鼠肺栓塞时间。结论桃红四物汤具有较好的抗血栓作用，其作用环节可能与抑制血小板聚集有关。     

四物汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用及其机制研究

目的 探讨四物汤对血管性痴呆（vascular dementia，VD）大鼠的保护作用及其机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组，模型组，四物汤高剂量（6 g/kg）、低剂量（3 g/kg）组，尼莫地平组（20 mg/kg），每组12只。采用大脑中动脉阻塞再灌注法复制大鼠VD模型，术后连续给予相应药物14 d。采用水迷宫实验观察VD大鼠学习能力和记忆能力；酶联免疫吸附法测定海马组织中乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）、5- 羟色胺（5- hydroxy tryptamine，5- HT）、内皮素- 1（endothelin- 1，ET- 1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的含量。腹主动脉取血检测血液流变学指标。苏木精- 伊红染色观察海马CA1区神经细胞形态学变化。结果 与模型组比较，四物汤高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05），在目标象限距离百分比显著增加（P<0.05），海马AChE、ET- 1含量显著降低（P<0.05），5- HT、VEGF含量显著升高（P<0.05），全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数显著降低（P<0.05）。四物汤高、低剂量组比较，仅血浆黏度和红细胞聚集指数的差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，四物汤组海马CA1区锥体细胞缺失减轻，神经纤维排列整齐，仅少数细胞核固缩。结论 四物汤对VD具有一定的改善作用，其机制与改善神经递质，调节海马ET- 1、VEGF含量，改善血流状态有关。     

桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的保护作用及机制

目的 观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用，以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法 建立左侧大脑中动脉阻塞模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度，行为学实验观察大鼠的运动神经功能，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色法观察大鼠脑梗死面积，苏木精—伊红染色观察大鼠缺血侧脑部皮质组织病理变化，干湿法测定脑含水率，伊文思蓝（Evans blue,EB）灌注染色法检测血脑屏障通透性，透射电子显微镜观察血脑屏障紧密连接超微结构，免疫组织化学法检测脑组织紧密连接蛋白occludin、胞质附着蛋白-1(zona occludens-1, ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9, MMP-9)表达水平。结果 大鼠神经功能损伤程度与运动神经功能经桃红四物汤给药后呈现改善的趋势。TTC结果显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑梗死面积明显减少（P＜0.05）。苏木精—伊红染色显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑皮质组织神经元细胞质浓缩，核固缩、分裂或溶解，细胞排列紊乱，层次不清晰的情况得到改善。与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑含水率、脑出血性转化程度以及EB渗出量显著降低（P＜0.05）。免疫组织化学检测结果显示，与模型组比较，桃红四物汤组大鼠脑梗死区occludin、ZO-1蛋白表达水平显著升高，MMP-9表达水平显著降低（P＜0.05）。透射电子显微镜观察发现，模型组大鼠血脑屏障紧密连接明显受损，桃红四物汤组和尼莫地平组大鼠血脑屏障紧密连接损伤明显改善。结论 桃红四物汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能，缩小梗死面积及减轻脑水肿。其作用机制可能与改善血脑屏障紧密连接超微结构，减少紧密连接相关蛋白表达，进而降低血脑屏障通透性有关。     

LC-MS/MS鉴定大鼠血浆中桃红四物汤有效成分

目的 研究桃红四物汤有效成分体内作用的物质基础。方法 利用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography technique coupled with tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）提供的色谱及离子碎片信息，对大鼠灌胃桃红四物汤中入血成分进行分析鉴定。结果 通过保留时间比对、离子碎片解析等综合分析，鉴定桃红四物汤中6个入血成分（梓醇、藁本内酯、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷和苦杏仁苷）均为原形成分，入血成分可能为桃红四物汤体内直接作用的有效成分。结论 本实验确定了桃红四物汤经口服后可被胃肠道吸收入血的6个有效成分，为后期桃红四物汤的药物代谢动力学研究提供了参考依据。     

脑缺血再灌注大鼠海马区神经营养因子的表达及桃红四物汤的干预

目的 观察脑缺血再灌注后大鼠海马区不同时间神经营养因子表达的变化及桃红四物汤的干预作用。方法 采用大脑中动脉线栓法构建大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，将实验动物随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用TTC染色法检测脑梗死体积，酶联免疫吸附法测定大鼠海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor, BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、神经营养因子3（neurotrophin-3，NT-3）的表达水平。结果 与假手术组相比，模型组术后12 h、24 h、7 d、14 d脑梗死体积明显增大。与模型组相比，桃红四物汤组在术后7 d和14 d脑梗死体积显著减小，尼莫地平组术后12 h、24 h、7 d和14 d脑梗死体积显著减小。与假手术组相比，模型组术后12 h海马区BNDF表达水平显著提高，术后24 h海马区NGF表达水平显著提高，各时点NT-3表达水平的差异无统计学意义；与模型组比较，术后7 d和14 d，桃红四物汤组、尼莫地平组BDNF表达水平显著提高，术后24 h和7 d，尼莫地平组NGF表达水平显著提高，桃红四物汤组NGF和NT-3各个时间点的表达水平无明显差异。结论 大鼠脑缺血再灌注一定时间后海马区BDNF和NGF的表达水平增高，有利于受损的神经细胞恢复，桃红四物汤通过促进BDNF的表达而保护神经细胞。