桃红四物汤中5种主要成分在脑缺血再灌注模型大鼠体内组织分布的研究

目的 研究脑缺血再灌注模型大鼠在灌胃桃红四物汤 （Taohong Siwu Decoction，THSWD）后，5种主要活性成分（藁本内酯、苦杏仁苷、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸）在体内组织分布的差异和规律。方法 采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，然后再灌注24 h建立脑缺血再灌注大鼠模型；将模型复制成功的大鼠灌胃THSWD（50 g/kg）后，于不同时间点采集组织（心、肝、脾、肺、肾、脑），样品处理后采用UPLC-MS技术检测各组织中待测成分的含量。结果 各成分在模型大鼠各组织中分布广泛，在肝、肾组织中浓度较高，其中藁本内酯在脑组织中有较高浓度；苦杏仁苷在肺部具有组织分布特异性；芍药苷、羟基红花黄色素A在大鼠肝、脾、肺组织具有较高分布比例，阿魏酸在脑组织中未检出。结论 THSWD中5种主要活性成分在各组织中分布广泛，各组织不同时间点的分布趋势也存在较大差异。     

不同炮制方法对白芍质量的影响

目的 通过测定白芍及其炮制品中芍药苷、芍药内酯苷及苯甲酰芍药苷含量,探讨不同炮制方法对白芍质量的影响。方法 采用高效液相色谱法,Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1％磷酸溶液(B),梯度洗脱程序为：0 min(18% A),5 min(18% A),13 min(25% A),15 min(35% A),18 min(45% A),20 min(50% A),25 min(50% A);检测波长230 nm,柱温：25 ℃。结果 生白芍、酒白芍、麸炒白芍中芍药苷含量依次降低,麸炒白芍、酒白芍、生白芍中芍药内酯苷含量依次降低,麸炒白芍、酒白芍、生白芍中苯甲酰芍药苷含量依次降低。结论 白芍经炮制后芍药苷含量均有所下降,而芍药内酯苷及苯甲酰芍药苷含量均有所升高。     

桃红四物汤中6种指标性成分的含量测定

目的 建立超高效液相色谱法同时测定桃红四物汤中6种指标性成分（羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯）的含量。方法 采用Agilent Technologies 1290 Infinity超高效液相色谱系统、DAD检测器。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相A为0.05%乙酸水（含7.84 mmol/L乙酸铵），B为甲醇溶液，采用梯度洗脱程序和多波长融合检测方法，流速0.2 μL/min，进样量2 μL，柱温25 ℃。结果 6种指标性成分的线性、分离度、稳定性、重复性与精密度良好；该方法能够快速、稳定地定量羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯。结论 该方法稳定、可靠、重复性高，可适用于桃红四物汤的质量控制。     

正交试验法优选桃红四物汤的水提工艺

目的 优选桃红四物汤的水提工艺。方法 以芍药苷和浸膏得率为考察指标,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交试验优选桃红四物汤的最佳水提工艺。结果 桃红四物汤的最佳水提工艺为加12倍量水提取3次,每次1.5 h。结论 优选出的桃红四物汤的水提工艺合理,可为其工业化生产提供依据。     

高效液相-二极管阵列法检测当归芍药散中主要化学成分

［摘要］目的 定性分析中药复方当归芍药散中的主要化学成分。方法 采用高相液相 二极管阵列检测法（high performance liquid chromatography-diode array detector, HPLC-DAD），色谱柱为Welchrom XB C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液（梯度洗脱）。二极管阵列扫描范围：200~400 nm。结果 通过实验并与已有文献的比较，利用HPLC-DAD检测后的三维图谱可找出中药复方当归芍药散中所含的主要化学成分川芎嗪、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、白术内酯Ⅰ、藁本内酯、23-乙酰泽泻醇B醋酸酯等。结论 HPLC-DAD可以对当归芍药散中主要化学成分做出准确定性，为其药效学研究提供依据。     

不同制备工艺对桃红四物汤中5种成分含量的影响

目的 研究不同制备工艺对桃红四物汤中成分的影响。方法 采用高效液相色谱法测定桃红四物汤中没食子酸、5-羟甲基糠醛、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸含量。结果 桃红四物汤A液中5种成分含量均值分别为82.9、11.1、235.7、917.3、49.3 mg/L；桃红四物汤B液中5种成分含量均值分别为126.6、13.2、187.3、1 040.4、28.6 mg/L，说明不同制备工艺使桃红四物汤中5种成分含量产生显著性差异。结论 不同制备工艺得到的桃红四物汤中化学成分种类和含量会产生变化。     

基于质量标志物的白芍配方颗粒量值传递规律及工艺优化研究

目的 研究白芍配方颗粒生产过程中白芍质量标志物的量值传递规律，优化其制备工艺。方法 通过白芍质量标志物6个成分含量及转移率，分析白芍饮片-提取液-浓缩液-干膏粉-配方颗粒中的量值传递关系，寻找生产过程中关键影响因素；并以出膏率、质量标志物的含量为考察指标，结合信息熵赋权法优化工艺关键参数。结果 浓缩和制粒两个过程中，6种成分含量略下降，但无显著性差异（P>0.05），且转移率相对较高；提取过程中，氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷等5种成分含量分别下降44.00%、24.74%、27.50%、19.57%、37.25%，其中芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷等3种成分含量有显著性差异（P<0.05），且氧化芍药苷的平均转移率为51.98%，相对较低；干燥过程中，6种成分含量均有降低趋势，其中芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷等4种成分的转移率分别降低10.79%、11.29%、15.45%、10.95%，均有显著性差异（P<0.05）；提示关键过程为提取和干燥过程，进一步确定关键影响因素为提取时间和干燥温度。通过优化，确定最佳工艺为“白芍饮片加10倍量水，浸泡30 min后，煎煮40 min，再加8倍量水，煎煮40 min；70℃减压浓缩至相对密度为1. 07~1. 09 g/mL，以进风温度为140℃进行喷雾干燥；加适量糊精，混合均匀，干法制粒”。经过优化，芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷等转移率在提取过程中分别增加16.73%、9.50%、12.92%、7.48%，均有显著性差异（P<0.01），在干燥过程中分别增加15.68%、11.80%、11.69%、10.42%，均有显著性差异（P<0.01）。结论 优化的工艺稳定、重复性好，白芍质量标志物中6种成分很大程度上得到保留，白芍配方颗粒的整体质量得到提升，为之后的生产和质量控制提供科学参考。     

牡丹皮药材规格等级初探

目的 探索牡丹皮中主要活性成分的积累量与根的粗细、根的组织结构之间的相关性，为评价牡丹皮质量及牡丹皮药材规格等级的划分提供科学依据。方法 采集安徽省亳州栽培5年生凤丹根系，将根系中的根依据粗细、长度及部位分别进行划分。同时收集市场常见不同规格的牡丹皮商品。采用高效液相色谱法同时测定各样品中芍药苷和丹皮酚含量。结果 在不同等级中，四等牡丹皮中芍药苷含量最高，一等牡丹皮中丹皮酚含量最高；芍药苷含量在主根中最少，在支根中最多；市场上连丹比刮丹中芍药苷含量高，刮丹比连丹中丹皮酚含量高。结论 细的牡丹皮中芍药苷含量反而高，由此推测芍药苷在周皮中积累量较多。由于芍药苷和丹皮酚积累量的趋势相反，因此牡丹皮质量标准有待进一步研究。     

复方白芍颗粒质量控制研究

目的 建立复方白芍颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中的白芍﹑泽泻进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷含量。结果 薄层色谱斑点清晰,且阴性对照无干扰;芍药苷浓度在33.35～333.50 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好,平均回收率为97.39%（RSD=1.35%,n＝6）。结论 所建立的方法操作简单,重复性好,可有效控制复方白芍颗粒质量。     

妇康宝口服液的质量标准研究

目的：建立妇康宝口服液的质量标准。方法：用薄层色谱法对白芍、当归和川芎进行了定性鉴别，用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了口服液中芍药苷的含量。结果：定性鉴别分离度好，专属性强；芍药苷在0．199～1．988／μg范围内呈良好的线性关系，r=0、9999，平均加‘样回收率为98．73％，．RSD为0．86％。结论：所建立的方法简便准确、灵敏度高，可用于妇康宝口服液的质量控制。     

基于PTEN研究桃红四物汤治疗产后血瘀证的机制

目的 观察桃红四物汤对产后血瘀证大鼠子宫第10染色体缺失的碱性磷酸和张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）mRNA及其蛋白表达的影响，探讨其祛瘀生新的作用机制。方法 采用米非司酮和米索前列醇灌胃法复制产后血瘀证大鼠模型，将模型大鼠分为模型组，阳性对照组（益母草颗粒4.3 g/kg），桃红四物汤高剂量（18.0 g/kg）、中剂量（9.0 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组，另设正常对照组。连续灌胃给药7 d后，麻醉大鼠并分离子宫，光镜下观察子宫血瘀状态，分别采用实时PCR和Western blot法检测子宫组织PTEN mRNA及其蛋白表达水平。结果 桃红四物汤能改善产后血瘀证大鼠子宫间质的充血、水肿。与正常对照组比较，模型组PTEN mRNA及其蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；与模型组比较，桃红四物汤高剂量组PTEN mRNA及其蛋白表达水平均显著降低（P<0.05），桃红四物汤中剂量组仅PTEN蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 桃红四物汤的祛瘀生新作用可能与其下调PTEN的表达有关。     

桃红四物汤促进产后血瘀大鼠子宫修复的作用

目的 观察桃红四物汤对产后血瘀大鼠子宫修复的促进作用，探讨其与内皮素-1（endothelin-1，ET-1）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）的关联性。方法 选取产后血瘀模型复制成功的大鼠40只，将其随机分为桃红四物汤高剂量（18.0 g/kg）、中剂量（9.0 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组，阳性对照组（益母草颗粒4.3 g/kg）和模型组（蒸馏水），另取正常雌性大鼠作为正常对照组。连续给药7 d后，腹主动脉取血，分离子宫，苏木精-伊红染色法观察子宫血瘀状态，免疫组织化学法检测子宫VEGFR-2表达情况；酶联免疫吸附法检测血清中ET-1、iNOS及VEGF水平。结果 桃红四物汤可明显改善子宫血瘀程度，促进子宫组织中VEGFR-2的表达；桃红四物汤高、中剂量组大鼠血清VEGF及iNOS水平明显升高（P＜0.05），ET-1水平明显降低（P＜0.05）。结论 桃红四物汤可促进产后血瘀大鼠子宫修复，其修复作用可能与调节子宫血管舒缩功能及促进子宫血管新生有关。     

脑缺血再灌注大鼠海马区神经营养因子的表达及桃红四物汤的干预

目的 观察脑缺血再灌注后大鼠海马区不同时间神经营养因子表达的变化及桃红四物汤的干预作用。方法 采用大脑中动脉线栓法构建大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，将实验动物随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用TTC染色法检测脑梗死体积，酶联免疫吸附法测定大鼠海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor, BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、神经营养因子3（neurotrophin-3，NT-3）的表达水平。结果 与假手术组相比，模型组术后12 h、24 h、7 d、14 d脑梗死体积明显增大。与模型组相比，桃红四物汤组在术后7 d和14 d脑梗死体积显著减小，尼莫地平组术后12 h、24 h、7 d和14 d脑梗死体积显著减小。与假手术组相比，模型组术后12 h海马区BNDF表达水平显著提高，术后24 h海马区NGF表达水平显著提高，各时点NT-3表达水平的差异无统计学意义；与模型组比较，术后7 d和14 d，桃红四物汤组、尼莫地平组BDNF表达水平显著提高，术后24 h和7 d，尼莫地平组NGF表达水平显著提高，桃红四物汤组NGF和NT-3各个时间点的表达水平无明显差异。结论 大鼠脑缺血再灌注一定时间后海马区BDNF和NGF的表达水平增高，有利于受损的神经细胞恢复，桃红四物汤通过促进BDNF的表达而保护神经细胞。     

徐志华治疗输卵管阻塞性不孕症60例总结

目的 总结徐志华治疗输卵管阻塞性不孕症的经验。方法 回顾性总结徐志华治疗输卵管阻塞性不孕症的60例病案，分析其辨证论治思路及组方用药特色。结果 60例输卵管阻塞性不孕患者中，湿热瘀阻证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证分别为31、18、11例，分别以墓头回方清热利湿活血化瘀通络、通经散（二丹四物汤）理气活血化瘀、二丹桃红四物汤补肾养血化瘀通络进行治疗，并根据经前期、经间期和经后期灵活选择治法。经1～12个月的治疗，60例患者中，妊娠44例；16例未妊娠者中，11例输卵管通畅。结论 徐志华的经验方墓头回方、通经散、二丹桃红四物汤分别对湿热瘀阻、气滞血瘀、肾虚血瘀型输卵管阻塞性不孕症具有较好的疗效。     

桃红四物汤加味联合微创锁定钢板内固定术治疗胫骨中下段骨折临床观察

目的 观察桃红四物汤加味联合微创锁定钢板内固定术治疗胫骨中下段骨折的临床疗效。方法 将54例胫骨中下段骨折患者按随机数字法分为观察组和对照组，每组27例；观察组采用口服桃红四物汤加味+微创锁定钢板内固定术治疗，对照组采用常规微创锁定钢板内固定术治疗，观察治疗前后患者患侧小腿肿胀程度及2个月后踝关节功能美国足踝协会（American Orthopedic Foot and Ankle Society，AOFAS）量表评分并比较两组患者的临床疗效。结果 与伤后24 h比较，两组患者术后1周下肢肿胀度均明显减轻（P<0.05）；观察组患者术后1周下肢肿胀度降低程度明显大于对照组（P<0.05）。两组患者基于AOFAS量表评分的疗效比较，差异无统计学意义（P>0.05）。两组患者临床疗效分布比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 桃红四物汤加味联合微创锁定钢板内固定术治疗胫骨中下段骨折疗效优于常规微创锁定钢板内固定术，能有效缓解肿胀，改善患肢功能。     

桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的保护作用及机制

目的 观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用，以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法 建立左侧大脑中动脉阻塞模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度，行为学实验观察大鼠的运动神经功能，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色法观察大鼠脑梗死面积，苏木精—伊红染色观察大鼠缺血侧脑部皮质组织病理变化，干湿法测定脑含水率，伊文思蓝（Evans blue,EB）灌注染色法检测血脑屏障通透性，透射电子显微镜观察血脑屏障紧密连接超微结构，免疫组织化学法检测脑组织紧密连接蛋白occludin、胞质附着蛋白-1(zona occludens-1, ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9, MMP-9)表达水平。结果 大鼠神经功能损伤程度与运动神经功能经桃红四物汤给药后呈现改善的趋势。TTC结果显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑梗死面积明显减少（P＜0.05）。苏木精—伊红染色显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑皮质组织神经元细胞质浓缩，核固缩、分裂或溶解，细胞排列紊乱，层次不清晰的情况得到改善。与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑含水率、脑出血性转化程度以及EB渗出量显著降低（P＜0.05）。免疫组织化学检测结果显示，与模型组比较，桃红四物汤组大鼠脑梗死区occludin、ZO-1蛋白表达水平显著升高，MMP-9表达水平显著降低（P＜0.05）。透射电子显微镜观察发现，模型组大鼠血脑屏障紧密连接明显受损，桃红四物汤组和尼莫地平组大鼠血脑屏障紧密连接损伤明显改善。结论 桃红四物汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能，缩小梗死面积及减轻脑水肿。其作用机制可能与改善血脑屏障紧密连接超微结构，减少紧密连接相关蛋白表达，进而降低血脑屏障通透性有关。     

桃红四物汤干预后的血小板外泌体对脑缺血再灌注模型大鼠的血管新生作用

目的 探究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)干预后的血小板外泌体（platelet-derived exosomes，PLT-Exos）对脑缺血再灌注大鼠的血管新生作用。方法 采用超高速差速离心法提取PLT-Exos，透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米微粒示踪分析检测外泌体粒径分布,蛋白质免疫印迹法检测外泌体标志蛋白表达水平；建立大鼠脑缺血再灌注模型，将所提取的经THSWD干预后的PLT-Exos通过尾静脉注射到模型大鼠体内，再通过脑血流量测定、苏木精－伊红染色、免疫荧光染色，验证THSWD-PLT-Exos对大鼠脑缺血再灌注模型血管新生的治疗作用。结果 提取的PLT-Exos表征符合典型。THSWD-PLT-Exos可显著提升脑缺血大鼠脑部的血流量，改善海马区损伤，具有良好的血管生成和神经保护作用。结论 THSWD-PLT-Exos对脑缺血再灌注大鼠损伤有良好的血管新生作用。     

桂枝麻黄各半汤联合熏蒸发汗法治疗血瘀型银屑病疗效观察

目的 观察桂枝麻黄各半汤联合熏蒸发汗法治疗血瘀型寻常型银屑病的临床疗效。方法 选取血瘀型寻常型银屑病患者48例，采用随机数字表法将其分为观察组（25例）和对照组（23例），对照组患者口服加减桃红四物汤，观察组患者口服加减桂枝麻黄各半汤联合中药熏蒸方熏蒸。治疗4、8周末，分别采用银屑病面积和严重程度指数（psoriasis area severity index，PASI）的减分率判定临床疗效，采用皮肤病生活质量指数（dermatology life quality index，DLQI）评价患者的生活质量。结果 治疗4、8周末，两组患者DLQI评分均较治疗前明显降低（P＜0.05），且观察组患者DLQI评分显著低于对照组（P＜0.05）。治疗4、8周末，观察组临床疗效明显优于对照组（P＜0.05）。两组患者未发生明显的不良反应。结论 桂枝麻黄各半汤内服联合熏蒸发汗法对血瘀型银屑病具有较好的临床疗效。