猪多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的建立及其应用

设计了 1对用以检测猪多杀性巴氏杆菌的引物。对临床送检的有肺炎症状或萎缩性鼻炎症状的发病猪的病料进行细菌培养 ,然后挑菌做PCR ,同时对可疑菌落纯化培养后做生化鉴定。结果 ,从不同省 (市 )的送检病料中分离鉴定出 6 6株多杀性巴氏杆菌 ,PCR检测结果与生化鉴定结果完全符合 ;该引物对其他 6种猪的常见呼吸道病原菌的扩增结果均为阴性 ;该PCR检测方法能检出CFU为 10 3/mL的巴氏杆菌模板。     

口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1的纯化复性与活性检测

收集含有口蹄疫病毒结构蛋白VP2 3 1基因的大肠埃希氏菌菌液 ,将其超声破壁 ,用菌体裂解液裂解 ,提取包涵体 ,并用 8mol/L尿素溶解 ,收集上清液 ,用亲和层析法纯化融合蛋白VP2 3 1 ,透析法复性 ,并用间接ELISA检测FMDV阳性血清和阴性血清。结果 ,P/N值大于 2 .1 ,说明纯化复性后的目的蛋白有一定的生物活性     

PCR技术在法庭科学中的地位与作用

根据国内先进的分子生物学检测方法———PCR技术的原理及应用范围 ,阐述了技术在法庭物证检验中的地位与作用 ,在实际检案中遇到超微量 ,降解 ,变性等检材样品能用一种更科学 ,更实用、更灵敏、更快速的检验方法来满足实际检案需要。PCR技术的广泛应用将我国法庭科学的犯罪物证鉴定、个体识别等内容在分子生物发展的基础上 ,跻身于国际法庭科学的先进行列     

液氮冷冻单根毛发根直接PCR进行DNA分型

首次用液氮冷冻单根毛发根，再经三次94℃高温处理，直接PCR扩增，从68根毛发根中，成功地检测了62根毛发根的人类vWF基因40内含子VNTR，检出率达91．2％。本方法简便、快速、实用，在法医学检验及群体遗传学研究中有重要应用价值。     

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a( )中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。     

微生物群体多样性在法庭地理学上的应用前景

法庭地理学(Forensic Geology)是一门基于土壤物证在法庭科学中的重要意义而新建立的学科分支,主要是对现场采集的土壤物证进行检验和分析,从而为案件的侦破提供线索[1].     

羊毛皮张和土壤中炭疽杆菌PCR检测方法的建立

建立了检测炭疽芽孢杆菌染色体特异性基因序列 (Ba813)的PCR技术 ,并用于模拟污染的羊毛、皮张和土壤中炭疽芽孢 (Sterne菌株、PasteurⅡ菌株 )的检测。结果表明 ,该方法可特异、敏感地检出 0 .5 g羊毛中Sterne菌株的 4 5 2个芽孢和PasteurⅡ菌株的 6 88个芽孢 ;0 .5g皮张中Sterne菌株的 4 5 2个芽孢和PasteurⅡ菌株的 10 32个芽孢 ;0 .5 g土壤中Sterne菌株的 4 5 2个芽孢和PasteurⅡ菌株 1376个芽孢。证实PCR可用于羊毛、皮张和土壤等外环境中炭疽杆菌芽孢的检测。     

乳牛布鲁氏菌病病原DNA快速检测技术的研究

在国内首次建立了乳牛原乳中布鲁氏菌外膜蛋白(OMP)25 ku基因套式聚合酶链反应(nested-PCR)检测技术。结果显示,本方法的特异性好,只能扩增布鲁氏菌DNA,而不能扩增同样能引起乳牛流产的鹦鹉热衣原体、弓形虫、胎儿弯杆菌DNA;乳样的检测灵敏度达50 CFU/mL,重复试验35次,可重复性和稳定性均十分理想;对 4 批 331 头凝集试验阳性(24 份)或阴性(307 份)乳牛的乳样用本方法检测,符合率为100%。在48 h内即可获得诊断结果。本方法同样可用于血液或其他流产病料中布鲁氏菌DNA的检测。     

抗人Tf及抗人Hb试剂盒的比较

目的研究比较抗人Tf(转铁蛋白)和抗人Hb(血红蛋白)试剂盒的实验方法。方法采用胶体金标记单克隆抗体结合免疫层析技术,对不同稀释度的人血、动物血进行检测,并对保存时间、溶解度等影响因素进行研究。结果抗人Tf和抗人Hb试剂盒同样具有简单、快速、灵敏、稳定、特异性好的优点,但抗人Tf试剂盒能检测出陈旧及难以溶解血痕。结论抗人Tf试剂盒适用于法医物证的血痕种属检验。     

牦牛血铜锌超氧化物歧化酶的提纯研究

本文首次以牦牛血红细胞为原料,采用乙醇-氯仿处理,丙酮沉淀和DE AE-32纤维素柱层析等分离手段提取纯化出铜锌超氧化物歧化酶。本法每升血红细胞可获得纯化的超氧化物歧化酶总活力为360000单位,比活为13000U/mg蛋白(邻苯三酚法),活力回收为64.3％。聚丙烯酰胺凝胶电泳(pH8.9,Tris-Gly缓冲液)显示清晰的两条带。