低血清培养PK-15细胞系对TGEV增殖规律的研究

为降低疫苗生产综合成本,本研究探讨了以低血清培养基(M08011)替代常规细胞培养基(DMEM)的可行性。本研究依次采用含100、80、50、30、20、10、0mL/L血清的低血清培养基(M08011)驯化PK-15细胞,并考察猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在低血清培养的PK-15细胞系中的增殖规律。结果显示,驯化后的PK-15细胞在含100、80、50、30、20 mL/L的低血清培养基中生长状态良好,与常规培养基所培养的PK-15细胞无差异。低血清培养体系培养PK-15细胞时,血清最低添加量为20 mL/L。用该体系培养的PK-15细胞接种TGEV后,TGEV的TCID50为10^-4.97/100μL,与常规条件培养的TGEV的TCID50为104.88/100μL相比,差别不明显。TGEV接种PK-15细胞,低血清培养基中血清浓度降低至20 mL/L,毒价未受到影响。结果表明,本研究建立的PK-15细胞及TGEV低血清培养体系可初步应用于TGEV的增殖培养,为相关疫苗研发奠定了基础。     

犬细小病毒JL-(18)1/Beagle株的分离鉴定及遗传进化分析

为研究犬细小病毒(CPV)流行株遗传变异情况,本研究从吉林省某比格犬养殖场采集疑似CPV感染致死犬的肠道组织,将病料接种至F81细胞进行病毒分离,并通过电镜形态学、PCR、血凝试验及动物回归试验进行鉴定。结果显示,所分离的这株病毒在F81细胞中产生了典型CPV细胞病变(CPE);在电镜下可见病毒呈无囊膜、直径为20 nm左右的病毒粒子;PCR鉴定证实CPV核酸呈阳性;血凝试验表明此病毒对猪红细胞具有凝集作用,血凝效价为1∶256;将这株病毒命名为JL-(18)1/Beagle。动物回归试验表明,JL-(18)1/Beagle使比格犬产生犬细小病毒感染的典型临床症状;以NS1基因进行遗传进化分析显示,JL-(18)1/Beagle与CPV-2c型分离株CPV-SH1516以及Canine/China/23/2017 NS1基因亲缘关系较近,而核苷酸相似率为100%;以VP2基因进行遗传进化分析显示,JL-(18)1/Beagle与New CPV-2b型CPV/CN/JL3/2013、CPV/CN/HB1/2013和CPV/CN/JL6/2013亲缘关系较近,核苷酸相似率为99.89%~99.94%;以VP2蛋白氨基酸进行序列分析表明,JL-(18)1/Beagle属于New CPV-2b型,与近期吉林CPV分离株相比,关键氨基酸位点无明显变化。因此,本试验从吉林省比格犬肠组织中分离到1株New CPV-2b型CPV毒株。     

非洲猪瘟CD2v胞外区基因片段的真核表达及其多克隆抗体的制备

本研究利用真核表达系统表达非洲猪瘟病毒的CD2v胞外区蛋白,研究其免疫特性,制备多克隆抗体并研究其性质,为研发特异性单抗奠定数据基础。以非洲猪瘟病毒Wuhan2019-1株(GenBank:MN393476.1)为模板,合成CD2v胞外区基因序列,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS载体中,获得pCAGGS-CD2v胞外区重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染293F细胞,获得重组胞外CD2v蛋白(简称His-CD2v)。用Ni-NTA柱纯化His-CD2v,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用ELISA和间接免疫荧光对多克隆抗体进行鉴定。结果显示,(1)His-CD2v融合蛋白在293F中以可溶形式表达,SDS结果显示,相对分子质量约为35~80 ku的弥散带;(2)融合表达的His-CD2v能与阳性血清反应,与对照不反应;(3)HisCD2v制备的多抗效价最高达1∶218700,且能与阳性血清竞争性结合CD2v抗原。上述结果表明,His-CD2v融合蛋白的表达及其多抗的成功制备,为进一步筛选CD2v特异性单抗及研制竞争ELISA试剂盒,为非洲猪瘟感染与免疫鉴别方法的建立奠定了坚实的基础。     

平原湖区也须重视防旱——以鄱阳湖区为例

鄱阳湖区位于长江南岸,江西省北部,包括南昌市的进贤县、南昌县、新建县;上饶市的波阳县、余干县;九江市的都昌县、湖口县、星子县、德安县、永修县和庐山区共11个县、区,面积19800平方公里,占江西省国土总面积的12%。湖区共有人口715万,农田1010万亩,是江西省乃至中国重要的粮棉油鱼产区。鄱阳湖区位于亚热带湿润季风气候区域内,降水的年际差异和季节变化均很大,不仅频繁出现洪涝灾害,旱灾也较严重。湖区盛传“小旱年年有,大旱隔三、五”的农谚,表明鄱阳湖区干旱的出现频率也很高,对湖区农业生产构成严重威胁。干旱频率高鄱阳湖区多年平均…     

重庆市人民政府办公厅关于进一步加强从疫区返渝来渝人员非典型肺炎防治工作的紧急通知

各区县(自治县、市)人民政府,市政府各部门,有关单位:我国一些地区出现非典型肺炎(以下简称非典)以来,在党中央、国务院的统一部署下,市委、市政府高度重视,采取了一系列防治措施,取得了明显的成效。但由于我市对外经济和政务活动频繁,人口流动性大,外出务工人员有530多万人,相当数量在非典疫区范围内,近段时间返渝人数呈急剧上升之势,使我市非典防治上作面临非常严峻的形势。为进一步搞好我市的非典防治工作,有效预防和控制疫情,现就进一步加强从疫区返渝、来渝人员非典防治工作的有关事项通知如下:     

重庆市人民政府办公厅关于充分发挥三峡库区地质灾害监测预警预报系统作用的通知

有关区县(自治县)人民政府,市政府有关部门:在国务院的亲切关怀和国家有关部委的大力支持和帮助下,我市三峡库区地质灾害监测预警预报系统已初步建立,并正式运行。为充分发挥三峡库区地质灾害监测预警预报系统的作用,确保人民群众生命财产安全,经市政府领导同意,现就有关事项通知如下:一、各有关区县(自治县)人民政府要高度重视三峡库区地质灾害监测预警预报工作,按照"专群结合、重点设防、全面监控"的原则,建立完善地质灾害监测预警预报系统。要层层落实地质灾害监测预警预报行政首长、项目法人责任制,按"专人专责"的要求,把地质灾害监测预警预报的责任落实到具体的人员。要落实专门部门负责做好地质灾害监测预警预报系统的     

重庆市人民政府办公厅关于成立全市汛期地质灾害防治应急指挥部的通知

各区县(自治县、市)人民政府,市级有关部门:汛期是各种突发性地质灾害的高发期,为了提高全市在汛期地质灾害防治方面的应急处理能力,更好地落实防灾预案、险情巡查、汛期值班、灾情速报等汛期地质灾害防灾制度,尽最大努力将地质灾害造成的损失降到最低程度,市政府决定成立全市汛期地质灾害防治应急指挥部。现将全市汛期地质灾害防治应急指挥部及4个应急分队名单通知如下,各区县(自治县、市)要按照市里的统一要求,结合各地实际情况,建立相应的地质灾害防治应急指挥系统。     

非常时期的“平常英雄——记牺牲在抗击非典一线的肥乡县公安局民警冯志杰

1．80米的大个子，有着铁打一样身体的冯志杰忽然倒在了抗击非典第一线。医生诊断：紧张、疲劳，过度劳累、血压升高引发脑溢血……