应用自制荧光抗体检测仔猪副伤寒

用兔抗猪伤寒沙门菌抗体自制荧光抗体对仔猪副伤寒进行了实验室诊断。结果表明 ,用自制荧光抗体在 2～ 3h内即可对仔猪副伤寒做出诊断 ,比直接镜检的特异性和敏感性均强。     

JX-2荧光显现法在血足迹显现中的应用

JX-2荧光显现法是针对各种血手印的一项显现技术，2003年公安部对该成果进行了推广。笔者在使用过程中，根据实际办案需要，对该方法进行改进，将试剂制作成试剂盒，即开即用，还可以长期保存，该方法在显现现场血手印方面已经取得了良好的效果和积累了一定的经验。     

重庆市山羊博尔纳病病毒P24基因的检测

为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8．3％(5／60),脑组织检测阳性率为10％(6／60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96．51％,与标准株Strain V和 He／80同源性为95．35％,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。     

增强“502”显现潜手印的紫外荧光技术

本文对常规的“502”显出手印的荧光染色方法进行了改进,提出以1/10000罗丹明6G为染色主剂,以30％的三氯甲烷、乙醇混合剂为溶剂,以短波紫外线为激发源的紫外荧光技术。     

食品中毒案中粘合剂和包装封口材料的检验

目的研究食品包装封口处粘合剂和封口材料成份的检验方法并对两例食品中毒案进行检验。方法利用傅立叶变换红外光谱法对案件所涉及的包装封口处粘合剂和封口材料的成份分别进行了检验。结果检出包装封口处的粘合剂成份。结论该检验方法对于食品中毒案中判断中毒原因以及确定犯罪嫌疑人起到十分关键的作用。     

鸡γ-干扰素实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立一种检测鸡γ-干扰素的实时荧光定量RT-PCR方法,采用RT-PCR方法从ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增得到鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)和鸡的28 SrRNA(Ch28 S)基因,将其分别克隆至体外转录载体后经体外转录获得了ChIFN-γ和Ch28 S的RNA,采用各自的特异性引物及Taqman探针,以Ch28 S RNA作为内参进行一步法实时荧光定量RT-PCR,检测ChIFN-γ。结果表明:ChIFN-γ和内参Ch28 S的Ct值与标准品稀释梯度在1×102~1×107拷贝/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.99。此方法用于检测ChIFN-γ,具有简便、高效、敏感、特异的特点。     

荧光粉末显现指纹1例

1 案件简介 某年9月5日,某村发生一起放火案,犯罪嫌疑人放火烧毁村委会多间办公室及部分财物,技术人员在一间嫌疑人放火时未引燃的办公室内提取一装过助燃剂的塑料瓶,经初检该塑料瓶较为陈旧,打光观察未发现指纹,用美国锐眼全自动熏显柜自动程序进行熏显也未显出具备鉴定价值的指纹,     

酸性黄显现非渗透性客体上血潜手印初步探究

目的建立一种酸性黄显现非渗透性客体上血潜手印的方法。方法制备白色瓷砖、黑色塑料袋、黑色瓷瓶、易拉罐侧面、深色铁质茶叶盒等为客体的捺印手印,配置以酸性黄作为主要成分的染色剂,对其进行固定、染色、漂洗,在多波段光源下观察。结果在440nm激发光源条件下,通过橙色护目镜观察有很强的黄色荧光特征。结论酸性黄显现法具有操作简单、显现效果明显、能排除深色背景干扰的特点,容易推广使用。     

肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据肺炎克雷伯菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法与猪肺炎支原体、猪鼻支原体、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽胞杆菌、猪丹毒杆菌、奇异变形杆菌和化脓隐秘杆菌共15种细菌无交叉反应;标准品浓度在2.29×109~2.29×104 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.29×102 copies/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%。临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和检测快速的优点,可用于肺炎克雷伯菌感染的早期诊断、样品的快速检测以及肺炎克雷伯菌的定量分析。     

鸡Akt基因mRNA SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为快速检测鸡细胞的增殖能力,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术,建立鸡Akt基因mRNA的定量分析方法。根据GenBank中原鸡Akt基因和鸡β-actin基因序列,设计合成特异性引物,应用RT-PCR技术从DF-1细胞中扩增出目的基因的DNA片段,并将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin。分别以重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin为标准品建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测的标准曲线。结果显示,建立的RT-PCR标准曲线具有良好的线性关系和特异的单个峰,能够对样品进行稳定可靠的定量检测。采用本方法检测DF-1-PrP和DF-1-count细胞系的Akt基因的相对表达量,前者为1.656 9×103,后者为2.257 4×102,DF-1-PrP细胞系的Akt基因表达量明显高于DF-1-cont细胞系(P0.01),说明PrPC及Akt在DF-1细胞系中的表达量呈正相关。结果表明,本研究建立的鸡Akt RT-PCR检测方法能够通过对Akt基因的转录量进行检测而评价鸡细胞的增殖能力。