非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析

非洲马瘟（African horse sickness,AHS）是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AH...     

川西马道上

灰白的马道向前延伸,伙伴们骑在马上,渐渐变小,终于消失。我坐在马站前粗实的木栏上,望着这条有点神秘的马道,突然冒出一个想法,走路到冲古寺去。我立刻将这个想法同达娃卓玛说了。她迟疑一下才回答,我当然可以呀。     

印共(马)对社会主义革命和发展道路的新探索

在落后的东方大国 ,对“什么是社会主义、怎样建设社会主义”问题的探索 ,除了中国共产党之外 ,印共 (马 )是又一个典型。印共 (马 )从印度的特殊实际出发 ,在对社会主义革命和发展道路的探索方面取得了较为系统全面的成果 ,值得我们学习借鉴。     

马流感病毒NP单克隆抗体的制备及特性鉴定

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类鉴定、间接ELISA检测和特性鉴定。结果显示,单抗2G11为IgG1亚型,3E10为IgG2a亚型,4A1为IgM亚型,轻链均为κ链。单抗2G11、3E10和4A1的细胞上清液及腹水效价分别为1∶640、1∶640、1∶320和1∶409 600、1∶204 800、0。这3株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白,并且能够与天然EIV结合;获得的3株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。亲和力试验结果显示,单抗2G11和3E10与EIV的亲和力常数分别为4.39×106 M-1和2.20×106 M-1。     

链球菌猪主要致病种和型多重PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种、型3个水平上检测链球菌猪主要致病种和型(C群马链球菌兽疫亚种和猪链球菌1、2、7、9型)的多重PCR方法。结果显示,该多重PCR在退火温度为61℃时可一次性扩增出7条符合预期大小、序列正确的基因条带;特异性试验和准确性试验结果均符合预期,无非特异性、交叉反应、假阳性、假阴性条带出现;对16株临床分离鉴定链球菌的检测结果与细菌学鉴定及单纯PCR鉴定的符合率均为100%;敏感性为0.08ng/μL;5次重复试验的结果也完全一致。结果表明,建立的多重PCR方法具有高度特异性、准确性、敏感性和稳定性,适用于猪场链球菌病的监控和流行病学快速诊断。     

韩国古代诗歌的大唐影响——杜甫与李达诗中的“马”意象

韩国古代＂三唐诗人＂致力于学习中国唐诗,努力将自己的诗风与唐诗接近,在唐代诗人中,杜甫的诗成为他们学习和模仿的典范。李达与杜甫的人生遭际类似,一生处于社会底层,抑郁不得志,他的《柳摠戎紫骝马歌》是赠与知己友人柳珩的诗.表达了一个远离于主流社会的局外人的悲哀。他借鉴了杜甫诗中的＂马＂意象,但又有所不同。杜甫在自己的作品中,通过＂马＂的形象映射自己的理想和抱负,而李达的诗中只是以一个叙事者的身份状物抒情,没有达到杜甫的意象高度,李达虽然模仿了唐诗,但并没有完全悟透其中滋味。本文试图通过一个侧面,揭示韩国古代三唐诗人在接受中国唐代诗歌中的得失。     

马动脉炎病毒大囊膜蛋白和膜蛋白基因的克隆与序列分析

参考GenBank收录的马动脉炎病毒(EAV)读码框大囊膜蛋白基因 ORF5、膜蛋白基因ORF6的核苷酸序列,分别设计了2对引物,对EAV的这两种主要结构蛋白基因进行了 RT PCR;将扩增产物克隆于pUC18通用载体,对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实克隆片段的可靠和准确性。测序结果,ORF5目的片段包含768 bp,编码255个氨基酸组成的多肽;ORF6目的片段包含489 bp,编码162个氨基酸组成的多肽。与EAV NC 002532标准毒株比较,ORF5、ORF6核苷酸的同源性分别为99.1%和99.4%;推导氨基酸的同源性分别为96.9%和98.2%。     

动物骨骼切片制作及染色条件的探索

通过对大白鹅和成年马股骨中段骨骼进行切片和染色,探索动物骨骼脱钙后冰冻骨切片的最佳制作方法及硫董-苦味酸染色方法的最佳条件,为法医学的骨组织学种属鉴别建立一套简便、有效、便于大量制作的骨切片制作和染色方法。结果发现：用7％的硝酸脱钙2-4天,OCT包埋并在在-30℃冷冻3—5min,切成20μm厚的切片,在饱和的硫堇和苦味酸溶液中分别染色12min和30s,能够获得最佳的骨组织切片。     

论美国司法审查制度的基础

马伯里诉麦迪逊一案在美国司法审查建立的过程中有着重要的意义,可以说这一案件使得联邦最高法院对国会立法的否决权成为现实。但是,马伯里诉麦迪逊一案只是美国司法审查建立过程中由于各种因素而获得特别重视的事件,在此案之前,美国社会已经孕育了司法审查产生及存在的政治,社会,法律的各种因素。本文旨在论述马伯里诉麦迪逊案判决的背景,以期找到美国司法审查制度的根基。     

基于CRISPR/Cas12a技术的非洲马瘟病毒可视化检测方法的建立

根据AHSVS7基因的保守序列,设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导的恒温扩增（RT-RAA）特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA,结合侧向流试纸建立了一种AHSV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法,并对其性能进行了评估。结果显示,该方法与蓝舌病毒（BTV）、鹿流行性出血热病毒（EHDV）、伪狂犬病病毒（PRV）、马传染性贫血病毒（EIAV）、马动脉炎病毒（EAV）、马流感病毒（EIV）的核酸均无交叉反应;敏感性试验结果显示,本方法最低可检出2.16×101copies/μL的AHSV核酸;应用该方法及WOAH推荐的RT-q PCR方法对50份模拟样品进行平行检测,结果显示,Kappa值为0.956,表明两者具有高度一致性。综上表明,本研究建立的非洲马瘟病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法特异性好、敏感性高,且操作简单、无需特殊仪器,可应用于野外或口岸现场的AHSV快速筛查检测工作。