龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

中国28个省/区汉族人群41个STR基因座多态性数据分析

目的调查分析中国28个省/区汉族人群41个STR基因座的遗传多态性,为相关研究和鉴定提供全面科学的基础数据。方法收集28个省/区汉族9 126名无关个体血样本,采用Global FilerTM、AGCU EX-22和AGCU 21+13种试剂盒,进行41个STR基因座分型,统计各基因座等位基因分布和遗传学参数,并对各数据之间进行差异性检验。结果中国28个省/区汉族人群41个基因座分别检出8~76个等位基因,各基因型分布经正和检验,除SE33等7个基因座外,均符合Hardy-Weinberg平衡定律。遗传学参数分析显示,41个基因座中SE33等21个属高鉴别力、高杂合度、高信息量,其余20个属中等高度多态性基因座。部分省份等位基因频率分布数据之间有显著性差异(P0.05),各省与全国综合数据之间则无差异(P0.05)。结论本文调查结果证实41个STR基因座均具有较强的个体识别能力,获得的数据可为法医学应用和筛选适合中国汉族人群基因座等研究和实践提供科学的基础数据。     

两种骨骼及牙齿纯化方法的比较分析

目的比较硅珠法和硅胶膜法对骨骼和牙齿的纯化效果。方法选择6根骨骼和8颗牙齿,进行消化后分别采用硅珠法与硅胶膜法进行纯化,用Global Filer~(?)试剂盒进行扩增检测,通过比较检出率和峰高来评价这两种方法。结果两种纯化方法均成功检测出了骨骼和牙齿的STR分型。同一样本中,相同基因座上两种方法检出的等位基因分型结果完全一致。两种方法处理得到的平均峰高差异无统计学意义。结论硅胶膜法在骨骼及牙齿的纯化中能满足实际常规检案的要求,且和硅珠法无明显差异,但在操作上更具优势,缺点是成本较高,在实际工作中可以选择使用。     

浙江汉族人群D1S1656、SE33和D2S1338基因座的遗传多态性调查

本文在CODIS系统为主的STR基因座调查研究的基础上[1-2],应用NGM Select荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族433名无关个体进行群体遗传学调查,获得D1S1656、SE33和D2S1338三个基因座的频率分布,并进一步计算各基因座的群体遗传学参数,为其法医学应用提供基础数据。现报道如下：     

中国汉族人群41个STR基因座突变情况的观察分析

目的调查41个STR基因座在中国汉族人群中的突变情况。方法收集1 932个三联体家系4 546份血样本,采用AGCU_21+1、AGCU_EX22、Global Filer_Express~(TM)系统扩增41个STR基因座分型,统计各基因座发生突变的频率。结果 150个三联体在32个基因座共观察到154次突变,平均突变率为1.0×10~(-3)(95%CI:0.8~1.1×10~(-3)),突变率最高的是基因座SE33。其中一步突变152次(98.7%),两步突变2次(1.3%);146个三联体仅1个基因座发生突变(97.3%),4个三联体在2个基因座发生突变(2.7%);父、母来源突变比率约为4.7:1。结论 STR基因座等位基因突变现象较为常见,亲子鉴定时应引起注意。     

AGCU Mini系统在法医学中的应用

目的考察及评价AGCU Mini系统在法医学实践中的应用价值。方法应用AGCU Mini系统检测12 775份陈旧血样,进行梯度DNA模板浓度分析,并与IdentifilerTM试剂盒检测结果进行比对,评价体系的检测成功率及方法的灵敏度。针对AGCU Mini系统中D19S253基因座,对699份浙江汉族无关个体进行多态性调查。结果 12 775份陈旧血样采用AGCU Mini试剂盒检测,12 885份(96.1%)分型成功,检测灵敏度为40pg(10μL体系),方法成功率及灵敏度均高于IdentifilerTM试剂盒。D19S253基因座共检出9个等位基因,频率范围为0.005 7～0.316 2,杂合度为0.814 0,多态性信息含量为0.772 9。结论 AGCU Mini系统可用于法医微量物证的STR分析,与相关试剂盒联合使用价值更高。     

用Y-STR单倍型信息指导数据库采样分析

目的分析浙江省绍兴诸暨市（县级市）各镇、村和姓的Y-STR单倍型分布，为Y_STR数据库的采样与应用提供依据。方法采集诸暨市17个镇156村的55个姓氏，且各镇一村有同姓人员10人以上（含）的家族样本5903份男性个体血样。采用YfilerTM复合扩增试剂盒进行17个Y-STR分型，所得数据进行镇（乡／街道）／村／姓氏的组合和镇（乡／街道）／村／姓氏／单倍型组合分布情况统计分析。结果在5903份男性样本中，获得1987种Y-STR单倍型，它们分布于235种镇（乡／街道）／＋-t／姓氏组合，共构成2547种镇（乡／街道）／村／姓氏／单倍型组合。各单倍型对应的“镇／村／姓”组合次数出现从1到18次不等，其中有1686种单倍型对应1种镇一村一姓组合（84．9％），绝大部分的单倍型对应1～2种镇一村一姓组合（95．3％）。各镇／村中同姓人员出现的主流分型大部分为1～2种（90．7％）。在镇／村的同姓人员中出现次要分型的频率平均为18．22％。结论Y-STR数据库在诸暨的采样在家族调查的基础上，应针对次要分型较多的姓增加采样量，减少遗漏风险，获得高质量的YSTR数据库。     

显微捕获技术结合低体积扩增技术在混合唾液斑检验中的应用

显微捕获技术联合应用低体积扩增技术,建立一种分离混合唾液斑的口腔上皮细胞,并获得DNA分型的方法。方法:制备模拟混合唾液斑,利用显微操作捕获细胞技术捕获口腔上皮细胞,将捕获的细胞直接放置到安利快得玻片反应位点上,加PK孵育,然后加入PCR反应混合物进行反应。结果:利用该方法捕获一个口腔上皮细胞12次,可以成功分离模拟混合唾液斑中的两名供者的DNA分型。得出显微捕获技术联合应用低体积扩增技术对混合唾液斑类检材有重要意义的结论。     

30个Y-STR基因座在中国汉族人群中的多态性与突变

目的调查30个Y-STR基因座在中国汉族男性人群中的遗传多态性和突变情况,研究其法医学应用效能。方法应用自行建立的30个Y-STR基因座检测系统对中国汉族人群1 005名男性无关个体和1 008对父子(1 949人)的血样进行Y-STR分型,统计各基因座的群体遗传学参数与突变情况。结果1 005名中国汉族男性无关个体共检出983种单倍型,其中963种仅检出1次,总体单倍型多样性(HD)和识别能力(DC)分别为0.999 955和0.978 109。30个Y-STR基因座共检出340个等位基因,基因多样性(GD)为0.410 3~0.952 3,24个基因座GD值大于0.6。1 008对父子共有30 269次等位基因传递,68对父子仅1个基因座发生突变,3对父子的突变同时发生在2个基因座上。在71对父子间涉及的26个基因座中观察到74次突变,平均突变率为2.4×10~(-3)[95%CI为(1.9×10~(-3),3.1×10~(-3))],其中一步突变73次(98.6%),两步突变1次(1.4%)。结论该30个Y-STR基因座复合扩增体系在中国汉族男性人群中具有较高的遗传多态性及较低的突变率,在Y-STR数据库建设和群体遗传学研究中具有重要价值。     

中国汉族人群46个Y-STR基因座多态性与突变调查

目的调查分析46个Y-STR基因座在中国汉族人群中的遗传多态性与突变情况。方法收集中国汉族人群1 008名无关男性个体、1 124对父子共2 165份男性血样。采用Yfiler PlusTM、AGCU Y-24、GFS 24Y 3种复合扩增试剂盒进行46个Y-STR基因座分型,统计各基因座群体遗传学参数与突变情况。结果 1 008名中国汉族无关男性个体,共检出1 001种单倍型,其中994种仅出现1次,总体单倍型多样性值(HD)和识别能力(DC)分别为0.999 986和0.993 1。46个基因座共检出548个等位基因,基因多样性值(GD)在0.432 0~0.953 2之间,37个基因座GD值大于0.6。1 124对父子共检测出51 739次等位基因传递,193对父子41个基因座共观察到214次突变,平均突变率为4.1×10-3(95%CI 3.6~4.7×10-3)。其中一步突变209次(97.7%),两步突变5次(2.3%);175对仅1个基因座发生突变(90.7%)。结论本文46个Y-STR基因座中大多数在中国汉族人群中具有较高的遗传多态性,适合法医学应用,高突变率基因座在Y-STR数据库家系查询与父系鉴定应用中应予以关注。