PRRSV标记病毒样颗粒的制备及其鉴定

当今预防猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的灭活苗和弱毒苗都存在不可避免的局限性,所以研制新型疫苗势在必行。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)在形态结构上与天然病毒粒子无异,生物安全指数高,是理想的传统疫苗替代品。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)粒子主要由能够诱导产生中和抗体的GP5蛋白和具有强细胞免疫力的M蛋白组成基本框架结构。本研究以2型高致病性PRRSV的GP5蛋白和M蛋白为研究对象,通过Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统,构建标记型PRRSV VLPs,同时探索核衣壳蛋白N对VLPs形成的影响。在本试验中将含有Myc标签的GP5(Myc-GP5)和含有His标签的M(His-M)蛋白基因分别克隆至pFastBac dual载体的p10和pH双元启动子下;N蛋白基因克隆至pFastBac HTB载体上,转染sf9和Highfive细胞后,GP5、M和N蛋白均被成功表达。透射电镜观察结果表明,Myc-GP5和His-M能够自动组装成VLPs,并且与天然PRRSV形态一致,具有双层膜结构,直径大小在40~60 nm。采用抗M蛋白的家兔血清进行免疫电镜观察,结果显示,Myc和His双标记型VLPs与天然病毒一样都能够被金颗粒标记,而且共感染的N蛋白不影响标记型VLPs的组装。本研究首次采用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了PRRSV的双标记型VLPs,具备与天然病毒相似的特性,为开发高效安全以及能够区分感染与免疫VLPs疫苗奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核可溶性表达和间接ELISA抗体检测方法的初步建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的核衣壳蛋白N是一种含量高、免疫原性强、最早刺激机体产生特异性抗体的主要结构蛋白,研制针对N蛋白抗体的检测方法对进一步实现PRRS的流行病学监测和诊断具有重要意义。本研究以带有MBP标签的p MAL-C4X作为表达载体,实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,每升菌液经纯化可得约20 mg的融合N蛋白。Western-blot结果表明,融合N蛋白能被抗MBP的单抗和PRRSV N蛋白的家兔多抗特异识别。以融合N蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法不与猪圆环病毒2型(PCV2)、古典猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的阳性猪血清发生交叉反应,但与1型PRRSV阳性猪血清有较强反应性。田间样品检测结果表明,本研究建立的间接ELISA抗体检测方法与IDEXX同类试剂盒的总符合率为90%左右。本研究以MBP作为促溶标签,实现了PRRSV N蛋白在大肠杆菌内的高效可溶性表达,重组蛋白具有良好的免疫反应性,这为深入研究N蛋白功能以及开发PRRS相关诊断制剂奠定了基础。     

团党早年关系论析——以早年关于团、党关系文件为研究中心（1920—1927）

1920-1927年间中国共青团与中共关系的复杂情形，远非人们一般认知中的“被领导与领导”、“外围”与“核心”等词语所能简单概括。起始，两者间的从属关系并没有见诸于正式文本，团和党的中央领导层甚至还有意避谈“领导”与“被领导”等词，将双方的政治关系定格为“协定”、“保持团的组织的独立性”。团“二大”及中共“三大”之后，这种关系才演变为党对团“组织上指导与援助”，仍强调团的组织上的独立性。随后团与党中央又颁布了若干文件和决议反复重申这种关系，但团与党的关系却并没有因此而改善，健康和谐的团、党关系在1920-1927年间显然还不具备存在的基础。     

继续着英勇的日子

他们曾经成功侦破著名电影演员吴若甫被绑架案。当事人的声名让他们从幕后走到前台,让京城和全国的老百姓一睹他们骄人的风采。他们在刀光剑影中成长,他们在青春与热血里淬火。他们是一支年轻的队伍,他们有满腔的真诚,有令人艳羡而挥洒不尽的爱,他们表现出了这支队伍应有的激情,他们令所有的对手胆寒,他们——北京市公安局刑警总队特案侦查支队,为首都公安民警赢得百姓的敬重与爱戴。     

“恶魔杰克”的末日

根据受害人的描述,专案组请专家画出恶魔模拟画像：瘦脸、分头、小胡子、小眼,杀人幽灵从无形变成有形,深深地印在每一个参与破案侦查员脑中。     

一次漂亮的抓捕行动

在1996年年底开展的冬季严打战役中,北京市公安局刑侦处的侦查员,将犯罪嫌疑人孙志勇、龚海涛列入了追捕的视线。     

牦牛初生犊致病性大肠杆菌的分离与鉴定

牦牛初生犊腹泻病在青藏高原流行甚广,危害亦大。近年来有牦牛大肠杆菌病的报道,但未进行过病原菌的致病性血清型的分离与研究。我们于1980年4～10月在青藏高原中部海拔4200米的四川省石渠县对牦牛犊腹泻病原进行了调查,在1080头初生犊中发病75头,死亡17头,选择部分病例作了病毒因子的初步分离,未获阳性结果。作细菌分离获得大肠杆菌165株,通过生化反应、毒素试验及血清型鉴定,共检出7种致病性血清型。     

羔羊致病性大肠杆菌的分离与鉴定

青藏高原东南部的石渠县,羔羊痢疾流行严重。1980～1982年对本病进行了调查,初生羔羊1807只,发病766只,发病率为42.4％,其中死亡403只,致死率为52.6％。从未治疗的死羔中,挑新鲜病尸37例作细菌学分离,其中35例获得致病性大肠杆菌,经鉴定为O_8、O_(14)、O_(15)、O_(26)、O_(28)、O_(117)、O_(157)等血清群。 (一)材料与方法 1.采取病料:从新荣、蒙宜和菊母三个乡的21个藏绵羊群中,选择死于羔痢的各类典型病例,于-30℃～35℃冷冻保存。然后逐只剖检,采取肝、脾、心血、肺、肾、淋巴结和前段小脑进行培养。 2.分离方法:病料接种于麦康凯琼脂平皿,经37℃培养24～36小时,选取红色圆形光滑而湿润的菌落,镜检为革兰氏阴性的中等杆菌,再经三糖铁琼脂斜面穿刺培养,符合大肠杆菌的246株,均经半固体琼     

发达省份落后地区青少年思想道德现状、问题与对策分析——基于广东省韶关市乳源瑶族自治县460名青少年的实证调查

改革开放的持续深入、下岗分流的大规模实施、社会转型的急剧加快,给发达省份落后地区青少年思想道德教育带来了深刻影响.一方面,他们大多尊敬师长、关爱父母,社会责任意识和是非感较强、讲义气,注重仪表仪态、生活务实.另一方面,他们对重大政治理论和时事不甚关心和理解,自制力、意志力及理想践行力薄弱.针对发达省份落后地区“90末00初”青少年思想道德发展的现实问题及其成因,家庭、政府、社会三个层面多管齐下,全力协同学校,相关问题方能有效消解.     

禽滑液囊支原体WF224株的分离鉴定及其致病性的研究

用禽支原体16S rRNA引物对山东省潍坊市某养鸡场疑似禽滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染的气管棉拭子病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性条带。通过分离纯化获得MS分离株CHN-WF224-2016;低倍显微镜观察到,菌落呈典型的"荷包蛋"状;生化鉴定结果表明,该分离株能发酵葡萄糖,不水解精氨酸,不利用尿素。然后,将测序后的16S rRNA序列上传Gen Bank。MEGA分析和构建的系统发育树表明,CHN-WF224-2016分离株与其他MS菌株在同一进化分支上,为禽滑液囊支原体;其中与MS标准菌株(WVU1853)和河南商丘分离株(CHN-SQ27-2017)的相似性分别为99%和98%。用MS分离株CHN-WF224-2016感染21日龄的鸡,攻毒后第11天和第21天进行实验室解剖,观察临床症状及气管粘膜病理形态学改变;结果表明,分离株CHN-WF224-2016能引起典型的足垫肿胀和关节滑液囊炎。本研究结果证实,CHN-WF224-2016分离株致病性强,可作为今后疫苗研究的候选菌株。