日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆和分析

为筛选新的有潜在保护性的抗原分子编码基因 ,采用重复感染兔血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,将阳性克隆的插入序列进行了PCR扩增和序列分析。结果发现 ,所筛选的阳性克隆中有 2个为日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因 (SPI)。序列分析表明 ,它可编码分子质量为 4 .6ku ,等电点为 5 .76的蛋白 ,与GenBank中日本血吸虫SPI基因 (大陆株 )、曼氏血吸虫SPI基因和埃及血吸虫SPI基因编码的氨基酸序列的同源性分别为 98%、6 2 %和 6 2 %。TMpred分析表明 ,该蛋白具有 2个明显的跨膜区即 36～ 5 5和 35 6～ 372位氨基酸。     

补肺活血胶囊对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的干预作用及机制研究

目的 基于转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smads信号通路及蛋白酶与抗蛋白酶系统，探讨补肺活血胶囊对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）模型大鼠气道重塑的作用机制。方法 将40只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、补肺活血组和茶碱组。采用香烟烟雾暴露复合气道内滴注脂多糖的方法复制COPD动物模型；实验自第21天起，补肺活血组予补肺活血胶囊0.42 g/kg，茶碱组予茶碱缓释片0.02 g/kg，连续给药40 d。实验第61天取血后处死大鼠，取肺组织制作病理切片观察其病理学改变及气道胶原沉积情况，检测肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase ，NE）、α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin，α1-AT）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9, MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，TIMP-1）的表达水平。结果 与正常对照组比较，模型组大鼠气道上皮增厚，炎症细胞浸润，细胞外基质沉积，基底膜增厚，肺泡结构破坏，肺泡融合，肺泡间隔增厚，胶原纤维沉积明显；肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平升高（P＜0.05），Smad7表达水平降低（P＜0.05）。与模型组比较，补肺活血组与茶碱组炎症细胞浸润减轻，胶原纤维沉积显著减少；肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平降低（P＜0.05），Smad7表达水平升高（P＜0.05）。与茶碱组比较，补肺活血组各指标均未见显著差异（P＞0.05）。结论 补肺活血胶囊可以通过调节TGF-β1/Smads信号通路、蛋白酶与抗蛋白酶平衡干预COPD模型大鼠气道重塑。     

嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶对斑点叉尾鮰的组织病理学影响

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A50凝胶层析等方法从嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物中提纯了一种蛋白酶,将提纯的蛋白酶腹腔注射斑点叉尾鮰,研究了嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶对斑点叉尾鮰的致病性以及引起的病理变化。结果发现,斑点叉尾鮰出现不同程度的死亡,其LD50为3.49μg/g。病鱼鳃丝肿胀;肝及肾肿大,质地脆,有大小不等的坏死区;脾肿大出血。组织学观察可见肝细胞肿胀,严重者空泡变性,大量细胞坏死、溶解消失;肾小管上皮细胞严重空泡变性,细胞淡染,逐渐溶解、消失,隐约可见细胞轮廓;脾严重出血,网状内皮细胞坏死;胃肠黏膜下层炎性水肿。超微病理学观察发现肝细胞糖原颗粒减少,细胞核染色质溶解,线粒体肿胀,线粒体嵴模糊不清;脾大量红细胞浸润,网状内皮细胞核染色质大量消失;肾小管上皮细胞刷状缘微绒毛肿胀,脱落;细胞核染色质减少,边移,核膜扩张;线粒体肿胀,滑面内质网扩张。扫描电镜观察发现胃肠道黏膜上皮细胞肿胀、坏死、脱落。证实,嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶可致斑点叉尾鮰各组织器官出现不同程度的病理变化,特别是对肝、脾、肾、脑和胃肠道的影响较大。     

大鼠脑外伤后脑组织MMP-9的表达与损伤时间相关性

目的观察大鼠脑外伤后脑组织MMP-9的表达规律,探讨其在损伤时间推断中的应用价值。方法健康SD大鼠75只,随机分为损伤组、假损伤组和正常对照组。损伤组采用自由落体方法建立脑损伤模型;致脑损伤后分10个时间点,采用HE染色观察损伤区的变化,采用免疫组化方法检测各时间点阳性细胞的种类和比值,并与假损伤组和对照组进行统计分析比较。结果免疫组化染色显示损伤组伤后1h可见中性粒细胞阳性着色,6h后可见神经细胞阳性染色并逐渐增强,伤后5d阳性细胞数达到峰值,而后开始减弱,14d基本消失。假损伤组和正常对照组未见阳性表达。将实验组中2h～7d阳性细胞比值与其它各时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05);实验组各时间点与假损伤组和对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。统计分析结果见表1。结论损伤后MMP-9阳性表达的规律性,有望成为脑损伤时间判定的参考指标。     

尿蛋白酶抑制剂对尿样STR分型的影响

目的研究尿蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor,UTI)对提高尿样STR分型成功率的作用。方法收集男女各5名健康志愿者中段尿,分装后分别添加不同质量浓度的UTI,-80℃保存,于8个不同的时间点进行DNA提取与Identifiler系统STR分型。比较15个STR基因座在不同组别尿样及来自同一个体对照血样的分型结果,计算不同组别尿样STR分型成功率。结果对照血样及保存期限为1 d的尿样15个STR基因座均分型成功,未经UTI处理的女性尿样3 d即发生基因座的丢失,9 d时检测不到任何基因座,而经UTI处理的女性尿样在9d之内均可以检测到15个STR基因座;未经UTI处理的男性尿样7d时检测不到任何基因座,而经UTI处理的男性尿样9d时STR基因座平均检出数约为9个。当尿液保存时间为30d时,经0.2、0.4和0.6μg/mL UTI处理的女性尿样的STR基因座检出率差异无统计学意义,平均为0.840 0±0.042 3,显著高于男性尿样的0.160 0±0.042 3。结论 UTI处理可显著提高尿样STR分型成功率,一定程度上延长尿样用于个体识别的保存期限。     

多项免疫学指标在青霉素过敏死亡鉴定中的价值

目的考察类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、IL-4和IL-10在青霉素过敏死亡豚鼠死后0~48h的水平或表达。方法采用青霉噻唑蛋白致敏和激发,豚鼠死后0~48 h提取血液或组织,采用免疫组织化学法和ELISA法分别检测类胰蛋白酶与类糜蛋白酶组织表达和IL-4、IL-10水平。结果与对照组相比较,实验组肺和气管中类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的表达增强,血清、肺、气管中的IL-4、IL-10水平增高(P0.05)。结论类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、IL-4和IL-10在青霉素过敏死亡鉴定中具有重要价值。     

基质金属蛋白酶与心血管疾病及其法医学意义

在心血管疾病发病机制中起重要作用的蛋白质大分子,对于心脏性猝死的发生及确诊具有十分重要的意义。基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases,MMPs)是一类锌依赖的金属内肽酶的总称,是降解心肌细胞外基质最重要的蛋白水解酶类。本文就基质金属蛋白酶生物学特性、功能在心血管疾病发生发展中的作用和在法医病理学中的意义作一介绍。     

大鼠脑挫伤后基质金属蛋白酶3的表达

目的 检测脑挫伤修复过程中基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)的表达,探讨其表达规律与损伤时间的相关性.方法 将大鼠分成对照组、假手术组和脑挫伤组.应用免疫组织化学技术和蛋白质印迹(Western blot)方法检测脑挫伤后不同时间脑组织中MMP-3的表达变化. 结果免疫组化结果:对照组及假手术组脑组织未见MMP-3阳性染色;伤后6h组脑组织出现MMP-3阳性染色,此后24h内染色逐渐增强,伤后5 d阳性细胞数及染色强度均达高峰,随之下降,伤后14d仍有少量MMP-3表达.Western blot结果:对照组及假手术组脑组织未见MMP-3阳性染色;挫伤后6h组出现MMP-3表达,随后表达量逐渐上升,5d达到高峰,以后逐渐下降,14d仍有表达.结论 大鼠脑挫伤修复过程中MMP-3的表达呈时序性变化规律,可望用于脑挫伤时间的推断.     

利用朴素贝叶斯和多元logistic回归构建月经血mRNA标志分析模型

目的 利用月经血特异性mRNA标志检测技术结合统计学方法,建立基于朴素贝叶斯和多元logistic回归方法的月经血鉴定模型,以定量区分月经血与其他体液。方法 采集86份月经血、48份外周血、48份阴道分泌物、24份精液和24份唾液样本,经试剂盒提取样本RNA、反转录后得到cDNA,对5种月经血特异性标志,包括基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）家族的成员MMP3、MMP7、MMP11,孕激素相关子宫内膜蛋白（progestogensassociatedendometrialprotein,PAEP）和斯钙素-1(stanniocalcin-1,STC1)进行扩增和电泳检测分析。采用朴素贝叶斯和多元logistic回归对检测结果进行分析。结果 朴素贝叶斯和多元logistic回归法构建的分类模型对月经血归类的准确率达88.37%和91.86%。在非月经血体液中,对外周血、唾液和精液的区分准确率普遍高于90%,分辨阴道分泌物时准确率较低,分别为16.67%和33.33%。结论mRNA检测技术结合统计学方法可对月经血建立分类判别模型,可用于区分月经血和其他...     

旋毛虫组织蛋白酶B基因TsCB1的克隆与生物信息学分析

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。结果表明,成功克隆到旋毛虫组织蛋白酶B基因(TsCB1)的cDNA序列,TsCB1cDNA含有1个由1 449个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码482个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量理论值为55.1ku,理论等电点为7.66。TsCB1第1～35位氨基酸残基为信号肽序列,有2个潜在的N-糖基化位点,具有1个生长调节素B结构域和半胱氨酸蛋白酶结构域,半胱氨酸残基活性位点被丝氨酸残基所替换,同源性分析表明与其他线虫组织蛋白酶B的一致性在60%左右。