三七破壁饮片质量分析

目的 建立三七破壁饮片的质量控制方法。方法 参考2015年版《中华人民共和国药典》相关检测方法，对10批三七破壁饮片的性状、显微特征、薄层鉴别、指纹图谱及其水分、灰分、浸出物、重金属、粒径分布以及人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量等进行检测，建立三七破壁饮片的质量控制方法。结果 三七破壁饮片为灰褐色至灰黄色的颗粒，气微，味苦回甜。显微镜下可见淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4~30 μm，脂道碎片含黄色分泌物，导管碎片较少。薄层鉴别显示，10批样品在与对照品色谱相应的位置上，均显示相同颜色的斑点。水分范围为5.05%～9.82%，总灰分范围为2.96%～3.20%，酸不溶性灰分范围为0.52%～1.19%，浸出物含量范围为21.03%～27.78%，每0.01 g样品中未破壁细胞数为46~81。指纹图谱显示，各批次三七破壁饮片的色谱图相似度为0.879~0.996。粒径分析显示，各样品D90为34.09~38.93 μm。10批样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1总含量为6.9%～8.3%。结论 建立的方法可用于三七破壁饮片的质量控制。     

鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建与鉴定

为了研究spiC基因对鸡白痢沙门菌致病性的影响,采用同源重组方法构建该基因缺失株。以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增spiC基因上、下游DNA片段作为等位基因;将上游片段、卡那霉素抗性基因(KmR)及下游片段依次连接并克隆到pGMB151自杀性质粒上,构建重组自杀质粒pGMB151-ΔspiC/KmR,通过大肠杆菌χ7213与鸡白痢沙门菌S06004固相杂交,将质粒转入S06004中,运用反向筛选法获得含KmR基因的spiC基因缺失株(ΔspiC/KmR);再使用编码FLP重组酶的温度敏感型质粒pCP20敲除KmR,获得无抗性ΔspiC。PCR鉴定和测序结果显示,spiC基因被成功缺失。血清型、生化特性、生长特性、耐药性等鉴定表明,S06004ΔspiC未发生理化特性改变。本研究成功构建了spiC基因缺失株S06004ΔspiC,为进一步研究鸡白痢沙门菌致病性变化及spiC基因的功能奠定了重要基础。