西安汉人D1S80位点基因频率调查

利用PCR技术、小型聚丙烯酰胶凝胶电泳及银染法，检测D1S80位点的VNTR扩增片段长度多态性（Amp－FLP）。在175名无关的西安地区汉族人群中发现了22个等位基因，片段大小分布于320～750bp之间，频率分布为0．0057～03314，杂合度为82．3％，个人识别率（DP）为0.9588，非父排除率（EPP）为0．6704。对7个家系23名相关个体分析，证实DIS80位点的遗传符合孟德尔方式。已发现的64种基因型分布符合Hardg－Weinberg定律。     

云南白族人群DIS80位点扩增片段长度多态性研究

本研究采用扩增片段长度多太性(Amp—FLP)分析技术，对116名云南白族人DIS80位点进行检测。共检出19个等位基因，52种基因型。扩增片段大小分布于340～780bp之间，基因频率分布为0．0043～0．2424，杂合度为85.34%，个人识别半(DP)为0．9606。     

中国人p33.6位点的扩增片段长度多态性

用PCR、小型聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法对小卫星区域p33.6(D1S111)位点的扩增片段长度多态性(Amp—FLP)进行分析和对100例无关中国人p33.6位点的等位基因频率进行调查及数据处理,发现该位点核心序列重复数从9到22之间的全部14个等位基因,片段长度分布于435～925bp之间,基因频率为0.5～35.5％,杂合度为76％。对6个家系共22名相关个体进行分析,符合孟德尔遗传定律;对人体各种不同组织DNA进行该位点的分析,显示出高度的一致性。该位点适用于法医学上的个人识别以及亲子鉴定。     

复合扩增STR位点片段长度多态性的研究

本文介绍了以三个短串联重复序列（STR）位点为基础的复合扩增进行个体识别的技术。其特点是在同一扩增体系内对彼此独立的三个STR位点，即HUMTH01[AATG]nHUMFABP[AAT]nHUMARA[AGC]n进行复会扩增，扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。经研究发现这三个STR位点具有高度多态性，扩增产物分子量在190～310bP之间，各位点等位基因数分别为6、9、16个，杂合度78．2％、85，0％、89．0％，个体识别率0．918、0．960、0．905，其累积的个体识别率达0．9997，高于pMCT118等位点，且扩增时间短，操作简便，为法医物证检验提供了一种高效的个体识别手段。     

p33.4位点扩增片段长度多态性及其法医学应用的研究

以聚合酶链反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和银染法对中国100名无关个体小卫星区域p33．4位点的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究，检出了8个等位基因。通过BIOTRAC系统进行数据处理．各等位基因重复单位的数目分别为7、10到15，其中在13～14之间发现一差值不足一个重复单位长度的罕见等位基因。片段长度分布于603～1115bP之间，基因频率分布于0.5～33．5％间，杂合度为64％，DP值为84．5％。对5个家庭25名相关个体进行分析，符合孟德尔遗传定律；对同一个体不同组织的DNA进行P33.4位点的分型研究表明，该技术适宜于法医物证检验。此外，本研究以Chelex处理不同检材制备DNA模板用于扩增，率先建立了比常规方法更快、更简便、更为实用的检验方法。     

法医DNA标准物质备选细胞STR等位基因片段长度的定值

目的 研究建立法医DNA标准物质备选细胞基因组STR基因座等位基因片段长度标准定值的方法.方法 利用有机法提取HPF和HSSM细胞基因组DNA并进行STR复合扩增,将产物进行电泳检测.利用Gene Mapper软件分析电泳结果,记录STR基因座等位基因的数值,并对目前我国公安系统应用较为广泛的DNATyperTM15、IdentifilerTM两种试剂盒扩增产物进行相应的DNA片段长度(bp)统计以及定值.结果 HPF为男性个体细胞,HSSM为女性个体细胞.HPF和HSSM细胞DNATyperTM15系统等位基因片段长度范围分别为126.26±0.05～367.53±0.20bp和125.33±0.07～370.08±0.17bp,IdentifilerTM系统等位基因片段长度范围分别为117.22±0.04～340.02±0.08bp和117.21±0.03～323.86±0.09bp.结论 对STR基因座等位基因片段长度进行标准定值,可为法医DNA标准物质提供有效的溯源途径.     

三个单位点DNA杂交联合应用的研究

本文从一些多态位点中筛选出在中国人群中，对于同一种限制酶HaeⅢ酶解都能检出良好多态性的三个单位点探针（PMLJ14、PYNH24、α－globin－3’HVR）。对这三个位点的等位基因频率进行了调查．用DNA指纹自动识别系统进行了数据处理，各位点的数据如下：PMLJ14、杂合度94％，等位基因频率分布0．002～0．051；PYNH24：杂合度89％，等位基因频率分布0．003～0．152；α－globin-3’HVR：杂合度78％，等位基因频率分布0．003～0．077。分析15个家系，未见到变异发生，符合孟德尔遗传规律。这三个位点个人识别中的累加机率是：1．7×10-5～2．1×10-14。     

pMCT118位点扩增片段长度多态性及其应用

本文报道了对98例中国人 pMCT118位点扩增片段长度多态性的等位基因频率调查及有关法医生物物证检验问题的研究。用多聚酶链反应、小型聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法,在12h 内检测低至1ngDNA 的 pMCT118位点扩增片段长度多态性。已发现22个等位基因,大小分布在340～780bp 之间,基因频率为0.005～0.3,杂合度为79%。对6个家系22名相关个体的分析符合孟德尔定律。探讨了微量检材样品制备和对混合斑、单根毛囊、唾液等生物检材的法医应用。对20个实际案例进行了检验。     

DNA的apoB位点扩增片段长度多态性的检测及其在法医学中的应用

用PCR方法对100例无关个体血样的apoB位点扩增片段进行研究,已发现有11个等位基因,片段长度分布于600～1100bp之间,基因频率为0.005～0.525,杂合度为70％。家系分析及对人体血液、血斑、精液、精斑、混合斑、带毛囊毛发及其它各种有核细胞组织的研究表明,该技术在个人识别及亲子鉴定上均能发挥重要作用。     

短串联重复位点ACTBP2(SE33)的扩增片段长度多态性研究

应用变性聚丙烯酸胺凝胶电泳（dn－PAGE）结合银染色技术对短串联重复（STR）位点ACTBP2（SE33）的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究。在210名无关中国个体中观察到了25个等位基因，等位基因频率分布在0．007～0．093之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律，个体识别能力（DP）值为0．99，杂合度（H）为98．7％。七个家系分析的结果表明，该位点的遗传符合孟德尔遗传法则，未观察到变异。对几种常见的法医物证检材的分析表明，该分型系统对DNA降解放为严重的检村适用性强，而且灵敏度高（0．5ng），适合于法医学实际应用。     

HLA—A基因座分步PCR—SSP分型研究

目的使HLA基因分型能应用于法医常见检材的个人识别。方法 建立检测HLA—A基因座的分步PCR—SSP方法。先用一对HLA—A基因座特异的引物作第一次扩增,以所得产物为模板,分别用对HLA—A30、A31、A33特异的3对引物作第二次扩增,二次扩增的产物经电泳判型。结果 1130例血清分型为HLA—A30、A31、A33的血痕,其PCR—SSP分型和血清分型的不符合率为29％;室温保存2年的精斑、唾液斑,保存18年的血痕第一次扩增均获得满意的结果。结论法医亲子鉴定和个人识别宜用基因分型替代血清分型。HLA—A基因座分步PCR—SSP基因分型适用于法医检材。     

用引物Y_3、Y_4和PCR方法鉴定性别的法医学应用

用Y3、Y4和Alu9．1、Alug．2两对引物和PCR方法检测陈旧血痕和毛根的性别获得成功。引物Y3、Y4扩增的靶序列位于Y染色体特异3．4Kb重复序列中，扩增产物为460bp；引物Alu9．1、Alu9.2用以扩增男女共有的Alu重复序列，扩增产物为130bP。室温保存13年之久的19例脐带血血痕（男性9冽，女性10例）和室温保存10～11个月的10例已知性别自然脱落毛根（男性6例，女性4例）的性别测定结果均正确；对一起凶杀案的血痕性别测定为定案提供了重要证据。本方法简化了样品的前处理过程。     

PCR扩增ZFY/ZFX基因鉴定人类干血痕性别

应用 PCR 技术同时扩增人 ZFY 和 ZFX 基因特异的 DNA 序列,在男性血痕中可检测到两种扩增产物,即340bp 长的 ZFY 基因及488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段;在女性血痕中仅可检测到488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段,据此判定干血痕性别。干血痕的最小检出需要量为0.125μl 血液量的血痕。室温保存10年的血痕可以准确判定性别。ZFY 基因位于 Y 染色体短臂。本方法同时检测两条性染色体,可以避免由于扩增失败或 Y 染色体长臂变异出现的假阴性或假阳性。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳即可区分。     

扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

目的建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种．又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法。方法从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12SrRNA基因序列．设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12SrRNA基因。以通用引物扩增片段为内部对照．以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定。结果通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段：特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小：人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值：人100％、鸡99％、鸭100％;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2．5Pg;特异引物扩增灵敏度人为2．5pg,鸡、鸭均为200Pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出．不受另一种DNA量的干扰：盲测结果准确。结论本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属。     

用引物Y_3,Y_4和DNA扩增技术作血液(痕)和毛根性别鉴定的研究

作者用引物Y_3、Y_4和DNA聚合酶链式反应(PCR)作微量人类血液(痕)和毛根的性别鉴定。扩增的靶序列位于Y染色体DNA特异3.4kb重复序列中,扩增产物为460bp。检材用量为:新鲜血液0.5μl、血痕纱纤维1mm、毛根单个。20例保存4个月的血痕与2例保存6年半的血痕性别判定结果均正确,无性别记载的保存9～11年的3例血痕显现了清晰的460bpY特异DNA扩增带。15例保存20天的自然脱落毛根性别判定结果均正确。本法省略了检材处理中的酚-氯仿抽提DNA等纯化步骤,既简化了实验操作,又减少了检验过程中外源DNA的污染机会和样品DNA的损耗,使这一性别鉴定方法更符合法医学实践的需要。     

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。     

A 26plex Autosomal STR Assay to Aid Human Identity Testing*†

Abstract: A short tandem repeat multiplex assay has been successfully developed with 25 autosomal loci plus the sex‐typing locus amelogenin for a total of 26 amplified products in a single reaction. Primers for the loci were designed so that all of the amplicons present were distributed from 65 base pairs (bp) to less than 400 bp within a five‐dye chemistry design with the fifth dye reserved for the sizing standard. A multiplex design strategy was developed to overcome challenges encountered in creating this assay. The limits of the multiplex were tested, resulting in the successful amplification of a wide range of genomic DNA sample concentrations from 2 ng to as low as 100 pg with 30 cycles of PCR. The 26plex has the potential to benefit the forensic community for reference sample testing and complex relationship evaluation.