猪鼻枝原体的病原性

引言 猪鼻枝原体(Mycoplasma hyohinis)是一种能引起猪多发性浆膜炎、关节炎及胸膜肺炎等病症的致病性枝原体。最初Carler和Mckay(1953)从传染性萎缩性鼻炎的呼吸道分离到这种枝原体。Switzer(1953、1954、1955)从萎缩性的和正常猪的鼻甲骨分离到,并详细叙述了这种分离物的生物学特征,建议采用猪鼻枝原体(Mycoplasma hyorhinis)来命名。在英国和美国的慢性猪肺炎中,50％以上存在这种枝原体,(Whittles     

一种与枝原体感染相联系的绵羊增生性间质性肺炎

羊群的自然病史 一些传染原,包括巴氏杆菌属、枝原体、依原体和副流感3型病毒,都与绵羊肺炎相联系(St.George氏,1972),但这些病原中没有一种已被清楚证明在田间情况下是一种重要的初发性病原。此外,对绵羊肺炎还未下充分的定义而且对已发生的绵羊肺炎没有一致的病原学概念。     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节、囊壁、囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头绦虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律。结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达到峰值，一直持续到试验结束；免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试验结束时抗体效价仍维持在较高水平。原头节可溶性抗原免疫组和原头节ＥＳ抗原免疫组血清抗体总体水平要高于囊壁和囊液抗原免疫组，原头节ＥＳ抗原和原头节层析纯化抗原的敏感性、特异性要高于囊壁和囊液层析抗原。试验表明，以上４种抗原可用于ＥＬＩＳＡ检测绵羊免疫及感染后的抗体应答反应。     

粪肠球菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用超声波裂解法制备粪肠球菌的裂解物作为抗原包被酶标反应板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,成功地建立了检测致羔羊脑炎粪肠球菌抗体的间接ELISA.在此间接ELISA中,抗原最佳包被浓度为37.57μg/mL,被检血清的最佳稀释度为1100.建立的间接ELISA的灵敏度是微量凝集反应的25～100倍.交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法具有重复性好、特异性强、操作简便快速等特点.确立的检测ELISA效价的回归方程lg[1/ET]=1.275 2.730 D405mm,可用于抗体定量测定.利用此方法检测了来自未免疫绵羊场的50份成年绵羊的血清和50份羔羊的血清;结果,2份成年绵羊的血清为阳性,其他样品均为阴性.     

绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定

取发病绵羊的皮肤痘疹研磨制成病料样品悬液,将该悬液感染未免疫的健康绵羊,同时接种原代绵羊羔羊睾丸(LT)细胞,盲传5代后,转接Vero细胞,进行间接免疫荧光试验和PCR鉴定。样品悬液感染未免疫的健康绵羊后出现绵羊痘的典型发病症状,经过LT细胞传代后转接Vero细胞,出现了特征性细胞病变;间接免疫荧光试验和PCR均检测出病毒存在。PCR产物的核酸序列测定结果显示,分离毒株的RPO30基因与已发表的绵羊痘病毒毒株的相应基因的同源性在99%以上。上述结果表明,本研究从宁夏固原市疑似绵羊痘病毒感染的绵羊体内成功分离到1株绵羊痘病毒,并将其命名为绵羊痘病毒固原株。     

免疫途径对绵羊支原体肺炎灭活疫苗安全性和抗体水平的影响

为了评价免疫途径对绵羊支原体肺炎灭活疫苗安全性和免疫效果的影响,将该疫苗分别于颈部皮下和肌肉各接种205只绵羊,对全身性反应和注射局部进行安全性观察,并于免疫当天和免疫后第21天各采集50只绵羊血分离血清,用绵羊肺炎支原体ELISA试剂盒检测血清抗体阳转率和抗体水平。结果,皮下注射组(19.5%)与肌肉注射组(17.6%)全身性不良反应均较高,差异不显著;但皮下注射组(36.6%)的局部不良反应显著高于肌肉注射组(2.4%);肌肉注射组抗体阳转率(89.8%)和平均D450值升高水平(免疫后比免疫前升高0.89)均显著高于皮下注射组(77.1%,0.45)。上述结果表明,肌肉注射绵羊支原体肺炎灭活疫苗的安全性和免疫效果优于皮下注射。     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——病原诊断

于1987年从甘肃省陇东类山羊传染性胸膜肺炎流行区采取临床可疑的山羊、绵羊病料,进行了一系列病原诊断研究,结果:排除了相关致病因素,如梅迪,维士那,山羊关节炎脑炎(CAE),衣原体及相关致病菌感染和寄生虫侵袭;最终从21例山羊6/6例绵羊病变肺组织中培养分离出支原体13株/4株,分菌率均在60％以上,分离株经初步鉴定后,经英国国际支原体鉴定中心(NCTC)最终鉴定均为绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia);以分离株人工感染健康山羊7只,绵羊3只,结果6/7的山羊,2/3的绵羊于接种后第14天始形成与自然病例相似的病变,并以7/7山羊,2/3绵羊病变肺组织中收回原接种物;以琼脂双扩散,试管凝集反应及间接血球凝集试验进行抗原性研究结果证明,分离株与绵羊肺炎支原体标准株(y—98)具有共同抗原性。从而不仅首次确证了该地本病是由绵羊肺炎支原体所致,且对山羊和绵羊都具有很高的感染率和较强的致病性。     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

枝原体的生物学性状

(一)溶血性 枝原体一般都有溶解豚鼠血球的性质,特别是肺炎枝原体有很强的溶血能力。在含3％血球的琼脂培养后,于冰箱中放置一夜,即在菌落周围出现溶血。肺炎枝原体和肺枝原体等为B型完全溶血,其他型枝原体溶血反应迟缓,而且是d型不完全溶血。使用的血球以豚鼠的最好,家兔的最差。溶血素是向琼脂扩散的毒素,是能通过透析膜的低分子物质。在氧分压下降和菌量生长过多时不能发生溶血反应,因此,氧化反应与溶血反应是有某些关联的。经56℃加热或用紫外线杀死的枝原体无溶血能力。最近弄清了溶血球就是过氧化     

绵羊注射棘球蚴包囊液后的血清抗体应答

为制备绵羊棘球蚴病间接血凝试验(IHA)的标准阳性血清,我们于1987年5月用棘球蚴包囊液对绵羊进行免疫,12个月内定期采血,以IHA法检测其血清抗体。结果发现免疫羊不仅血清抗体上升快,而且持续时间长。现将免疫前后绵羊抗体消长动态报告于后。     

三种抗原对家畜日本血吸虫病诊断价值的比较

以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23/pGEX、可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)及SEA经Sephadex G-200柱层析分离后得到的第一峰SEA1作为诊断抗原,应用ELISA检测人工感染日本血吸虫绵羊血清及自然感染日本血吸虫水牛血清。结果显示,三种抗原用于检测人工感染日本血吸虫绵羊血清的阳性符合率分别为88.79%、98.15%、100%,阴性符合率均为100%;自然感染日本血吸虫水牛血清的阳性符合率分别为80%、80%、84%,阴性符合率分别为88.9%、93.3%、91.1%;三种抗原与伊氏锥虫病牛血清无交叉反应;检测感染日本血吸虫不同时间绵羊血清,发现感染6周后均被检出针对这三种抗原的特异性抗体,且SEA及SEA1在感染4周后即可检出特异性抗体。三种抗原的诊断效果差异不显著。     

绵羊肺炎支原体荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立快速检测绵羊肺炎支原体的荧光定量PCR方法,根据EF-Tu基因序列设计合成引物,构建含有EF-Tu基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,检验该方法的特异性、敏感性和重复性,并用于临床样本的检测。结果显示,本研究建立的方法能特异性扩增绵羊肺炎支原体,与其他病原无交叉反应,最低检测限为5 copies/L,在5×104~5×109稀释度范围内具有良好的线性关系(r2=0.996),检测的批内和批间变异系数均小于5%。对临床肺组织样本中绵羊肺炎支原体的检出率(105/134,78%)与基于P113基因的q RT-PCR方法的相符,而对鼻腔棉拭子样本的检出率(27/50,54%)略高于后者(25/50,50%)。对人工感染绵羊肺炎支原体山羊肺的病变部位、病健交界部位和无明显病变部位的检出率分别为1/6、6/6和4/6,确定肺的病健交界部位为最佳采样部位。对采自四川、新疆、青海的439份表观健康羊肺绵羊肺炎支原体的平均检出率分别为48%(61/126)、63%(103/163)和75%(113/150),提示受检羊群仍存在严重的绵羊肺炎支原体带菌感染情况。该方法的建立对绵羊肺炎支原体感染的监测与快速诊断有重要意义。     

猪气喘病弱毒菌株免疫研究

自1974年,用甘肃省兰州市安宁区强毒菌株人工感染传二花脸168号猪发病,从该病猪肺中分离到猪肺炎霉形体168号菌株。与国际参考菌株J株高兔兔血清作微粒凝集试验、生长抑制试验和代谢抑制试验都证实为猪肺炎霉形体。经14年连续继代300多代次,作数十次回归健康猪测试毒力。约在300代后对健猪的毒力已明显下降。试作免疫注射测其安全性和免疫力。结果:304代对杂交2代猪巳趋安全,340代对杂交1代猪也趋安全。经强毒攻击免疫平均保护率(攻毒后透视无阴影,无症状)为84.04％,60天康复率为95.35％。但对纯繁二花脸猪尚不安全。曾以健康杂交猪与340代免疫猪混圈饲养60天,经X线透视未见肺脏病变。间接血球凝集反应检查血清为阴性。屠宰后采集肺脏接种培养无猪肺炎霉形体出现。免疫接种弱毒菌苗猪的生长、增重与健猪比较,无明显差异。免疫期已测到6个月。现已在野外病猪场作少量试用。     

动物枝原体疫苗

(一)鸡败血枝原体疫苗 1957年Domermuth将在培养基上或用鸡胚培养的活菌,给雏鸡进行肌肉或皮下接种后,经过4～9周,在后胸气囊内重复感染时,抑制了病灶的形成,标志着已经建立了免疫。其保护率由于感染菌量不同而异,但平均在36.2％,据说增加了免疫次数也未能使保护率提高。McMartin等曾试验给4周龄的鸡鼻腔滴入活菌液,或于腹部气囊直接注射感染,尔后检查气囊的病变或分离枝原体。免疫菌数在10~3菌落形成单位或更多,     

绵羊致病性乳房炎链球菌的分离试验

致病性乳房炎链球菌主要包括无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌,这三种链球菌在形态上相似,其中牛乳房炎的病原体致病性较强,但无乳链球菌也可引起绵羊的乳房炎,不过病例少见,据国外资料报道;停乳链球菌可致羔羊多发性关节炎。 近几年来,在红星一牧场绵羊中流行一种以产羔母羊乳汁稀薄和产后无乳为特征的慢性传染病,给养羊事业带来一定的损失。为此,我们对该病病原进行了较为全面的调查研究,现将分离鉴定结果介绍如下。     

我国11个省份山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的血清抗体检测

为摸清我国山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的流行情况,用竞争ELISA(C-ELISA)方法对采自河北等11个省份的山羊与绵羊血清进行了抗体检测。结果显示,共检测山羊血清2 083头份,检出山羊关节炎-脑炎抗体阳性血清8份,阳性率为0.38%;检测绵羊血清1 339份,检出绵羊进行性肺炎抗体阳性血清6份,阳性率为0.45%。按不同山羊血清来源统计,山羊关节炎-脑炎的规模场阳性率为0.51%,散养户阳性率为0.50%;按不同绵羊血清来源统计,绵羊进行性肺炎的规模场阳性率为0.53%,屠宰场阳性率为0.12%。按不同山羊饲养方式统计,山羊关节炎-脑炎的全舍饲阳性率为0.41%,半舍饲阳性率为0.35%,放牧阳性率为0.35%。按不同绵羊饲养方式统计,绵羊进行性肺炎的全舍饲阳性率为0.48%,半舍饲阳性率为0.26%,放牧阳性率为0.85%。结果表明,我国山羊与绵羊中分别存在山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的感染,但感染流行率较低。     

禽类霉形体简介

霉形体原译作枝原体。禽类霉形体病是一种慢性呼吸道感染,其特征是咳嗽流鼻,窦部肿胀,呼吸困难,有气管罗音。 禽类霉形体主要以禽类作为宿主。早在1935年Nelson在检查鸡的慢性呼吸道病时,就发现了一种球杆菌样小体,当时由于种种原因而未能定论。直到六十年代初,随着分离培养技术的完善,霉形体的研究工作才得以迅速发展。国际霉形体学会专门设立了禽类毒形体研究组织,对禽类霉形体的研究起到了积极作用。目前,国内外有关霉形体的研究报告不少,但     

家兔源性大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及药敏试验

兔大肠杆菌和克雷伯氏菌都可引起仔兔腹泻、死亡等疾病,二者混合感染后对仔兔危害极大。为了确定引起仔兔腹泻、死亡的病原,本研究对河南省某兔场断奶前后病死仔兔进行剖检。通过采集腹泻、死亡仔兔肝脏、肺脏、脾脏、盲肠、肠系膜进行病原菌分离培养、形态观察、PCR鉴定,最终鉴定该病死仔兔为大肠杆菌与肺炎克雷伯氏菌混合感染。经药敏实验发现,分离得到的大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌同时对庆大霉素、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢拉定等五种药物敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。上述研究结果为兔大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌混合感染的分离鉴定以及科学指导用药提供了参考。     

兔体穴位注射猪喘气病疫苗的抗体效价观察

国内外多年的研究早已证明,猪喘气病的病原是猪肺炎霉形体。该病是一种严格的局部免疫疾病,共免疫途径专一为呼吸道、肺脏;非呼吸道接种病原体既不发病,也不产生免疫力,且病原体只存在于猪支气管、细支气管中,其它脏器及肌肉均不含病原体;血清中的凝集抗体与保护力不成正相关。近几年,我们曾用穴位注射猪喘气病疫苗,之后行强毒攻击检     

制取牛粘膜病病毒和绵羊边界病病毒的试样供电镜检验

牛病毒性腹泻──粘膜病(简称BVD-MD)是欧美各国奶牛和肉牛群的常发病,近年测知,我国也有少数地区存在本病。其病原属RNA病毒,对牛粘膜病毒或牛病毒性腹泻病毒、绵羊边界病病毒和猪瘟病毒已进行分类,同属于披盖病毒科(Togaviridae)的瘟疫病毒属(genus Pestvirus)。 病毒在动物体产生中和抗体和补体结合抗体;在琼脂扩散系统中,BVD-MD病毒抗原和猪瘟血清或绵羊边界病血清产生沉淀反应,所以说,三种病毒有共同的可溶性沉淀抗体。还