提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗原在鸡体内的免疫应答

应用木瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次。应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明：免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，ＥＬＩＳＡ的ＯＤ值（Ｘ）为０．２３，至第３次免疫后１０天，ＯＤ值（Ｘ）为０．４４。这表明从鸡ＭＤ肿瘤细胞提取的ＭＡＴＳＡ，再好鸡免疫接种后可出现明显的抗体应答。木研究结果为ＭＤ肿瘤疫苗的研制提供了重要的参考依据。     

高度特异的李斯特菌单抗试剂的研制及鉴定

以单核细胞增生李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，ＬＭ）制备免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了３株能稳定分泌抗单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌和格氏李斯特菌的单克隆抗体的细胞系，分别是ＬＪ１０Ａ，ＬＭ１１和ＬＢ５，而与其余种的李斯特菌和属外细菌不发生交叉反应。３株单抗均为ＩｇＭ，所识别的抗原为菌体表面蛋白     

西咪替丁对鸡细胞和体液免疫功能的作用

观察了西咪替丁和左旋咪唑对鸡细胞和体液免疫功能的作用。对２８ 日龄鸡每天分别按２ ．５ 、１０ ．０ 、１００ ．０ 和４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁或２ ．５ 、１０ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重左旋咪唑饮水给药，连用３ ｄ 后再分别肌肉注射绵羊红细胞（ＳＲＢＣ） 和牛血清白蛋白（ＢＳＡ） 或布鲁氏菌（ＢＡ） 抗原。测定外周血淋巴细胞转化率和ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值；测定血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价和血清补体总活性。结果表明，西咪替丁能明显增强鸡外周血Ｔ 淋巴细胞功能，但对Ｂ 淋巴细胞无明显影响；明显升高血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价；１０ ．０ ～４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁能明显升高ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值和血清总补体活性。西咪替丁与左旋咪唑相比具有非常类似的作用。     

牛O-A型口蹄疫双价灭活苗研究——小白鼠接种疫苗后的细胞免疫应答

用牛Ｏ型和Ａ型口蹄疫（ＦＭＤ）双价灭活苗免疫小白鼠后，通过四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色分析法检测了其病毒特异性Ｔ细胞增殖应答，相应抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增生作用高于未免疫对照组；通过氨基黑－１０Ｂ比色分析法检测了其致敏淋巴细胞对靶细胞的杀伤率，免疫组为１４．３％～１５．５％，未免疫组为３．２％；通过常规毛细管法检测了白细胞移动指数（ＭＩ），免疫组为０．７５和０．７０，未免疫组为１．１３。以上３项检测结果经Ｆ检验，均达到１％的显著水平，表明小白鼠接种牛Ｏ型和Ａ型ＦＭＤ双价灭活苗后，激发了病毒特异性细胞免疫应答     

鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因的反转录－聚合酶链反应研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的一对引物，其跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，经反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后用琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，３个毒株均获取了与预期一致的ＰＣＲ产物。灵敏度测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板     

RU_(486)对地塞米松诱导鸡淋巴细胞免疫抑制的逆转效应

给２０日龄雏鸡注射不同剂量糖皮质激素（ＧＣ）制剂———地塞米松（Ｄｅｘ）,结果不同剂量的Ｄｅｘ对鸡淋巴细胞免疫功能都产生明显的抑制效应;体外试验进一步证明Ｄｅｘ能抑制鸡脾淋巴细胞的刺激增殖活性,用１０－７ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＲＵ４８６（ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎ）阻断鸡淋巴细胞糖皮质激素受体（ＧＲ）则可逆转这种抑制效应。试验证明２５ｍｇ／ｋｇ体重剂量的ＲＵ４８６在鸡体内有拮抗Ｄｅｘ抑制鸡体免疫功能的作用,从而证实ＧＣ诱导鸡淋巴细胞免疫功能降低是由淋巴细胞的ＧＲ介导的。所以,部分阻断ＧＲ可防止鸡体因ＧＣ升高所导致的免疫力下降,这对提高鸡的疫苗免疫效果及应激状态下抗病力有理论指导意义。     

多头绦虫抗原特性的研究（1）——囊液和囊壁粗抗原的免疫原性

用羊脑多头蚴囊液和囊壁粗抗原以１２ｍｇ／只的免疫剂量与等体积的白油－司班佐剂乳化，分３次免疫羊。于第３次免疫后１４ｄ，经口攻击感染多头绦虫虫卵２５００枚，攻击后２２５ｄ，剖杀检查免疫效果。结果囊壁粗抗原免疫组羊只全获保护，囊液粗抗原免疫组羊只（３／４）获保护，另１只羊脑中有直径０．６ｃｍ钙化的多头蚴病灶，其间为干酪样物质。而感染对照组羊脑中均有多头蚴寄生，其中１只羊脑中有３个多头蚴包囊，致使羊的脑组织极度萎缩，呈一层薄膜包围在包囊周围。免疫羊血清抗体滴度与免疫保护力之间呈正相关关系，免疫羊体重略高于对照羊     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。     

多头绦虫抗原特性的研究——原头节及其排泄分泌抗原的免疫原性

应用多头蚴原头节可溶性抗原和将原头节进行体外短期培养后获得的排泄分泌（ＥＳ）抗原，以４ｇ／Ｌ抗原量与等体积的白油－司班佐剂乳化后，按每次２ｍＬ剂量对试验羔羊进行３次免疫。于最后一次免疫后２周，攻击感染２５００个多头绦虫虫卵，攻击后２２５ｄ剖杀各组羔羊。结果感染对照组羔羊全部感染了多头蚴，所含原头节为圆形或椭圆形，大小为０．３９０～０．４１０ｍｍ×０．３９５～０．４１５ｍｍ。原头节可溶性抗原及其ＥＳ抗原免疫组有２／３羔羊获全保护；１／３羔羊未能获保护，但其多头蚴包囊的大小、原头节数目及大小均小于感染对照组。     

鸡用天然缓释免疫增强剂的研究──天然免疫增效药物的筛选

选用黄芪等１０种天然药物，将２６４只８日龄蛋用雏鸡分为１１组，每组２４只。１０个试验组，每组饲料中添加１种天然药物。在鸡３，５，７和１０周龄时检测Ｔ淋巴细胞Ｅ花环（ＥＲＦＣ）形成率、Ｂ淋巴细胞花环（ＥＡＣ）形成率、外周血淋巴细胞转化率、酸性α醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）阳性率，结果证明所选用的药物程度不同地增强了鸡的免疫功能。从中筛选出黄芪等７种免疫增效作用较强的药物。     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵连续沉淀法从绵羊棘球蚴囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原Ａ和抗原Ｂ的阳性检出率分别为８３．３３％、８３．３３％和７５％，阴性符合率分别为７２．２２％、８６．１１％和７５％，表明抗原Ａ的敏感性和特异性均优于ＳＰＰＣＦ和抗原Ｂ。     

Highlights of CAFIU’s International Exchanges from March to May 2002

March（１）OnMarch６，CAFIUVice－PresidentLiChengrenmetwithandhostedadinnerinhonorofMr．TariTolvanen，person－in－chargeoftheFinnishNationalFundforResearchandDevelop－ment．（２）CAFIUVice－PresidentLiBeihai，asasked，metwithCubanambassadorAlbertoRo－driguezArufetothePeople＇sRe－publicofChina，whodeliveredtoLitheinvitationletterfromChairmanRichardoAlarconoftheCubanNationalAssemblyofPeople＇sPower．TheletterinvitedCAFIUPresidentLiGuixiantovisitCuba．（３）InvitedbytheAmal…     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

反转录－聚合酶链反应检测牛食道－咽部分泌物中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。第１组６份Ｏ－Ｐ液，采自人工感染发病牛，ＰＣＲ检测结果都是阳性；查毒试验结果５／６阳性。其中１份样品的１０－１，１０－２，１０－３和１０－３．７稀释液的ＰＣＲ检测结果也都是阳性；同样稀释的样品接种细胞，每稀释度２瓶，１０－１～１０－３都是２／２出现ＦＭＤＶ所致的细胞病变（ＣＰＥ），１０－３．７１／２出现ＣＰＥ。第２组样品是从野外采集的水牛Ｏ－Ｐ液，共５２份。ＰＣＲ检测结果９份为阳性，另７份为可疑（弱阳性）；取接种了这７份Ｏ－Ｐ液的细胞培养液（无ＣＰＥ）再作ＰＣＲ检测，结果全部是阳性。５２份Ｏ－Ｐ液样品分别接种ＩＢ－ＲＳ－２细胞培养物，并盲传３代，均未观察到典型的ＣＰＥ。研究结果表明，建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法不仅可用于检测细胞培养物和动物组织，也适用于检测牛Ｏ－Ｐ液中的ＦＭＤＶ。该方法比目前常规的查毒试验显著的快速和灵敏     

弓形虫速殖子排泄分泌抗原的SDS－PAGE分析

弓形虫速殖子排泄分泌抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析马军武，杜重波，张德林，李惠萍（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）弓形虫速殖子排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ）是虫体在入侵宿主细胞及细胞内外增殖游离过程中向血液、体液或培养上清液释放的可溶性抗原成份（Ｃｈ...     

Highlights of CAFIU''''s International Exchanges from August to October 2002

August：（１）．FromAugust２to１４，a３－memberCAFIUdelegationledbyCouncilMemberWangJinshengattendedtheinternationalsymposiumof″Reconcil－iationAgenda－Peace″attheinvitationoftheSwitzerlandFoundationofMoralRe－Armament．（２）．InvitedbyCAFIU，BrigadierGeneralMaungMaungThien，MemberoftheExecutiveCommitteeofSolidarityandDevelopmentoftheU－nionandMinisterofFarmingandAquaticProductofMyanmar，leda６－memberdelegationtovisitChinafromAugust４to１１．WhileinBeijing，Vice－Chairman…     

用氯化铬联结病毒与绵羊红细胞的被动血凝试验

建立的用低浓度氯化铬溶液作联结剂将蛋白质抗原联结于绵羊红细胞表面，用于被动血凝试验（ＰＨＡ）的方法显示，绵羊红细胞在联结前用０．２５％胰酶处理，可显著提高抗原与红细胞的联结效力；用联结蛋白相对应的抗血清检测，滴度可达１：２６２１４４０；被联结蛋白浓度由前人试验所获得的最低３ｍｇ／ｍｌ降低到０．２ｍｇ／ｍｌ，从而可用于低蛋白浓度的病毒的联结。     

皮癣双价灭活苗接种牛的免疫监测

用８头健康犊牛每头注射皮癣双价灭活苗２ｍｌ，间隔１４天重复注射１次。在注苗前和泣苗后不同时间采血进行血清抗体检测和以淋巴细胞转化试验检测细胞免疫情况。结果在注苗前以双向免疫扩散试验（ＤＩＤ）法检测８头牛疣状毛癣菌代谢产物抗原（Ｔｖ）抗体和石膏样毛癣菌代谢抗原（Ｔｍ）抗体均为阴性，注苗后１４～１１０天出现Ｔｖ抗体阳性反应，反应高峰在注苗后２１～２８天，最高滴度为１：８。注苗后１４～６３天出现Ｔｍ抗体阳性反应，反应高峰在２１～２８天，最高滴度１：４。注苗前８头牛淋巴细胞转化率均在４％以下，注苗后１４～６３ｋ对特异性抗原Ｔｖ和Ｔｍｌ出现淋巴细胞转化阳性反应，反应高峰均在注苗后２１～２８ｋ，最高转化率为２５％（Ｔｖ）和２９％（Ｔｍ）。通过免疫监测证明接受该疫苗的牛绝大多数都能产生良好的体液免疫和细胞免疫，并对攻击感染具有抵抗力。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在酶标抗体（ＨＲＰ－Ｆ＿（２３））稀释液中加入４％（ｗ／ｖ）聚乙二醇（ＰＥＧ）６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬ１５Ａ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ＿（４９０）值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法具有实际应用价值。ＰＢＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有普遍意义。     

猪源弓形虫强毒株膜蛋白的SDS－PAGE和免疫印迹

猪源弓形虫强毒株膜蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹王一成，张雪娟，黄熙照（浙江省农业科学院畜牧兽医研究所杭州３１００２１）自Ｈａｎｄｍａｎ（１９８０）首次进行弓形虫膜抗原研究以来，已有许多有关弓形虫膜抗原的鉴定和分离的报道（Ｓｈａｒｍａ１９８３）。但...